广东从化无规定马属动物疫病区野鸟和蚊子分布及其西尼罗病毒感染情况调查

[目的]了解广东从化无规定马属动物疫病区野鸟和蚊子的种类、数量和分布等情况及其西尼罗病毒感染的情况。[方法]对鸟类在沿途设网抓捕取样;蚊虫采用紫外灯诱捕和网捕进行样品采集,随后利用荧光定量RT-PCR方法对西尼罗病毒进行检测。[结果]2012—2013年该地区共捕获鸟类110种381只,隶属于12目37科76属;共捕获蚊虫5种,共计3048只,其中淡色库蚊占50.66%、三带喙库蚊占32.12%、褐尾库蚊占12.99%、中华按蚊占3.61%和白纹伊蚊0.62%;对381份鸟泄殖腔棉拭子和3048份蚊子样品进行了西尼罗病毒的检测,结果均为阴性。[结论]虽然本次调查未发现鸟类及蚊子感染西尼罗病毒,但本地区存在西尼罗病毒引入以及在本地区传播的条件,存在西尼罗病毒病发生风险。因此,为继续维持广东从化无规定马属动物疫病区的无疫状态,有必要对媒介鸟类及蚊虫开展长期的调查和监测。     

上海地区野鸟中伯氏疏螺旋体和西尼罗病毒感染的血清学调查

于2005年从飞抵上海的12种候鸟和4种留鸟中采集208份血清样品,采用酶联荧光测定(ELFA)法和酶联免疫吸附试验(ELISA),分别对伯氏疏螺旋体和西尼罗病毒的感染状况进行了血清抗体调查,结果受检野鸟样品的检测结果均为阴性。     

2009年～2011年新疆雁形目野生鸟类禽流感血清流行病学调查与分析

本研究采集了新疆野鸟血清样品260份,进行了禽流感H1～H16亚型的血清学监测,结果显示,野鸭类血清样品2009年检出5个血清亚型,其中H8检出率高达15.38%,H13为9.62%;2010年检出11个血清亚型,H5亚型的阳性率最高,达14.29%;2011年检出12个血清亚型,其中H9检出率最高,达15.79%。不同品种野鸭的禽流感阳性检出率分析表明,绿头鸭禽流感抗体阳性率58.82%,赤麻鸭为68.66%,赤嘴浅鸭为34.09%,凤头浅鸭为44.44%。灰雁的血清样品检测结果表明,H13亚型的阳性率最高,为40.91%。1份天鹅血清样品检测出H13抗体阳性。对乌鸦、斑鸫、野鸽和红隼等野鸟血清样品检测,全部为阴性。本次在覆盖新疆边境的野生鸟类栖息地开展的禽流感血清学调查,掌握了新疆地区野生鸟类禽流感血清学监测数据,为新疆地区乃至全国的禽流感预警预测提供了科学依据。     

2020年新疆地区规模化猪场猪PCV2抗体检测与分析

为了解新疆地区2020年规模化猪场猪圆环病毒2型的免疫抗体水平,选择新疆地区6个规模化猪场,针对不同日龄段的猪采集血清样品333份,采用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法进行抗体检测分析。结果发现,2020年新疆地区规模化猪场猪圆环病毒2型平均抗体阳性率为77.78%（259/333）,平均抗体阳性率符合国家标准。但各猪场免疫效果参差不齐,抗体阳性率最高的为A场,阳性率达100.00%;阳性率最低的为C场,仅48.78%,低于（70%）的国家标准。不同日龄段的猪抗体水平也存在一定的差异,抗体阳性率最高为种公猪,达96.30%;而保育阶段猪抗体水平最低,仅有47.92%,低于国家标准。     

警惕西尼罗病毒入侵

西尼罗病毒是由虫媒生物 (主要为库蚊 )传播的、可感染人和多种动物发病的黄病毒科病毒 ,引发人或动物发生脑炎、脑膜炎 ,并导致部分病例死亡。 1 937年首次被发现。 1 999年 ,该病毒入侵美国后迅速传播 ,于 2 0 0 2年形成大流行 ,造成很大危害。该病还向周边国家扩散 ,已成为严重危害人类和动物健康的一个病毒。我国也时刻面临着西尼罗病毒入侵的严重威胁 ,因此需高度警惕西尼罗病毒的流行 ,积极采取有关措施 ,严格防范西尼罗病毒的入侵。     

非洲马瘟病毒、西尼罗病毒和马冠状病毒的基因芯片检测技术研究

为探索建立马病病毒基因芯片检测方法,采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(ASHV)核酸序列,通过分子克隆技术获得西尼罗病毒(WNV)和马冠状病毒(ECV)的特异基因片段。用芯片点样仪逐点分配到处理过的玻片上,制备成检测芯片。以拼接、克隆的核酸序列为模板通过多重不对称RT-PCR进行特异性扩增和荧光标记后滴加到芯片上进行杂交,对杂交结果进行扫描检测和计算机软件分析。结果显示,制备的基因芯片可同时检测和鉴别上述3种病毒,ECV质粒样品、WNV质粒样品检测灵敏度为10²拷贝;AHSV质粒样品检测灵敏度为10⁴拷贝。其他病毒材料未出现荧光信号,验证了本方法的特异性。证明基因芯片技术可快速、准确和灵敏地同时进行多种病毒的检测。     

2014—2015年新疆家养动物小反刍兽疫病原学监测

为了解新疆地区家养动物小反刍兽疫防控情况,对2014—2015年从新疆14个地州的种畜场、商品代养殖场、散养户养殖场、交易市场及屠宰场采集的羊眼鼻分泌物等3 812份样品,利用荧光反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）方法,进行了小反刍兽疫病原学检测,结果未检测出病原学阳性样品。监测结果表明,新疆各地采取的小反刍兽疫防控措施行之有效,尤其是疫苗免疫对防控小反刍兽疫起到了关键性作用。     

西尼罗病毒的基因进化分析

为更好的了解西尼罗病毒在世界各地的流行特征,从GenBank中随机选取45株西尼罗病毒的全基因或部分基因序列,进行同源性分析构建了基因进化树.发现西尼罗病毒可以分为两个谱系,1系病毒广泛分布在非洲西部、中东、东欧、印度、美国和澳大利亚等地,2系病毒分布在非洲亚撒哈拉、马达加斯加等地.1系的西尼罗病毒可进一步分为3个分支.对其中的22株西尼罗病毒部分基因序列进行同源性比较,发现1系病毒之间核苷酸同源在76.8%以上,氨基酸同源性在78.3%以上,而2系病毒与1系病毒核苷酸同源性约为64.7%～76.2%,氨基酸同源性约为64.7%～93.0%.     

新疆某猪场母猪繁殖障碍病病原学检测和毒株鉴定

2018年4月,新疆某规模化繁育猪场出现大量母猪流产,产死胎、木乃伊胎等繁育障碍症状。为确诊病因,采集胎儿组织和母猪流产分泌物,通过普通PCR、RT-PCR、real-timePCR技术,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、弓形虫4种病原进行检测。结果显示,PRRSV检测呈阳性,PRV、PPV和弓形虫检测呈阴性。通过PRRSV特异性引物NSP2进行PRRSV毒株鉴定,确定该猪场存在PRRSV类NADC30毒株。结果表明,类NADC30毒株是导致该猪场出现母猪繁殖障碍的重要病原,说明该新型毒株已经蔓延到新疆地区,并开始对该地生猪养殖业造成危害。本试验为新疆地区猪场母猪繁殖障碍的病因调查提供了依据。     

新疆地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查

为了解目前新疆维吾尔自治区猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学特征,应用PCR方法对新疆14个地区猪场送检的共430份病料进行PCV2的检测,并对阳性样品的基因组进行了扩增和克隆测序,分析研究PCV2遗传变异情况。结果显示,430份样品中,有21份样品为PCV2阳性,阳性率为4.88%。经序列比较和遗传进化分析对21株PCV2进行了基因型鉴定,其中2份样品为PCV2a(9.52%),3份样品为PCV2b(14.29%),15份样品为PCV2d(71.43%),1份样品为PCV2e(4.76%)。与其他基因型相比,新疆地区PCV2优势基因型PCV2dORF2的特异性氨基酸位点主要集中在第53I、89L、90T、121T。结果表明,目前新疆地区的PCV2以PCV2d基因型为主,同时也伴有其他类型,本研究为更好地掌握新疆地区PCV2的流行情况、基因组特性进而提出针对性防控措施提供参考数据。     

Serologic Responses of West Nile Virus Seronegative Mature Horses to West Nile Virus Vaccines

A 42-day study was conducted to assess the impact of three West Nile virus vaccines given either as separate injections or incorporated with their counterpart equine encephalitis and tetanus vaccines on serological responses under field use conditions. Two hundred forty mature, West Nile virus seronegative (<4) horses were followed serologically pre- and postprimary and secondary vaccination with six different vaccination programs, all including West Nile virus antigens. Forty horses were unvaccinated sentinel horses. All vaccines stimulated both a primary and secondary (booster) response to vaccination that was significantly higher than that of seronegative controls. However, inclusion of West Nile virus with equine encephalitis viruses and tetanus toxoid in vaccines had a significant detrimental impact on West Nile virus serum neutralization antibody production to both the primary and secondary vaccinations.     

西尼罗河病毒病的研究进展

西尼罗河病毒病是由西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)引起的一种人畜共患传染病,病原是一种虫媒病毒,可导致西尼罗河热和致死性的西尼罗河脑炎。自发现以来,西尼罗河病毒病曾在世界上多个国家暴发,给畜牧业和人类生命安全造成了巨大的危害。我国目前尚无该病的发生,但是防治技术储备是必要的。本文对西尼罗河病毒病的流行病学、病原学、致病机制、临床症状和病理剖检变化、诊断方法和候选疗法进行综述,为西尼罗河病毒病的防控提供资料。     

West Nile virus: North American experience

West Nile virus, a mosquito‐vectored flavivirus of the Japanese encephalitis serogroup, was first detected in North America following an epizootic in the New York City area in 1999. In the intervening 11 years since the arrival of the virus in North America, it has crossed the contiguous USA, entered the Canadian provinces bordering the USA, and has been reported in the Caribbean islands, Mexico, Central America and, more recently, South America. West Nile virus has been reported in over 300 species of birds in the USA and has caused the deaths of thousands of birds, local population declines of some avian species, the clinical illness and deaths of thousands of domestic horses, and the clinical disease in over 30 000 Americans and the deaths of over 1000. Prior to the emergence of West Nile virus in North America, St. Louis encephalitis virus and Dengue virus were the only other known mosquito‐transmitted flaviviruses in North America capable of causing human disease. This review will discuss the North American experience with mosquito‐borne flavivirus prior to the arrival of West Nile virus, the entry and spread of West Nile virus in North America, effects on wild bird populations, genetic changes in the virus, and the current state of West Nile virus transmission.     

西尼罗热病毒RT-PCR检测方法的建立

参考Genebank发表的西尼罗热病毒(West Nile virus，WNV)E糖蛋白基因序列，自行设计合成一对引物，对WNV进行RT—PCR扩增，产物经琼脂糖电泳分析，呈现一条约400bp的条带，将其克隆入pMD18-T—Vector载体中，并进行序列测定，与已发表的WNV基因比较发现，核苷酸的同源性为99．7％，证实为WNV的E基因，通过对样品多次检测，都能扩增出一条约400bp的条带，表明该方法比较稳定。     

西尼罗病毒套式RT-PCR检测方法的建立

从GenBank上调取西尼罗病毒的基因序列,经过分析,设计并合成2套套式RT-PCR引物,分别对西尼罗病毒灭活苗进行扩增,结果扩增出与目的片段大小一致的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector中,进行序列测定,证实为WNV的基因。建立了套式RT-PCR检测方法,经各反应条件的优化后,发现2套nest-PCR引物能分别扩增出85个拷贝和62个拷贝的双链DNA,对乙型脑炎病毒、黄热病毒等11种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立套式RT-PCR具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸WNV的检测和监测。     

West Nile virus infection of horses

West Nile virus (WNV) is a flavivirus closely related to Japanese encephalitis and St. Louis encephalitis viruses that is primarily maintained in nature by transmission cycles between mosquitoes and birds. Occasionally, WNV infects and causes disease in other vertebrates, including humans and horses. West Nile virus has re-emerged as an important pathogen as several recent outbreaks of encephalomyelitis have been reported from different parts of Europe in addition to the large epidemic that has swept across North America. This review summarises the main features of WNV infection in the horse, with reference to complementary information from other species, highlighting the most recent scientific findings and identifying areas that require further research.