β-HB对牛皱胃平滑肌细胞活性影响——MTT法和CCK-8法的比较研究

以牛皱胃平滑肌细胞为研究对象,采用MTT法和CCK-8法检测添加不同浓度β-羟丁酸(β-hydroxybutyric acid,β-HB)对牛皱胃平滑肌细胞活性的影响.通过接种不同的细胞密度((0.2、0.5、1、2、3)×105个/mL),加入MTT/ CCK-8孵育后,在不同的波长下读取D值并进行分析.确定CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳细胞浓度为1×10 5个/mL,最佳检测时间为4 h;MTT法的最佳检测波长为490 nm,最佳细胞浓度为3×105个/mL.在检测β羟丁酸对牛皱胃平滑肌细胞活性的影响时,2种方法的结果对比发现CCK-8法的数据偏差小,准确性高,灵敏,优于MTT法.     

紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡和细胞ROS及SOD失衡的研究

为研究紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)凋亡及对氧化还原平衡的影响,本实验以不同浓度的紫杉醇处理细胞,采用台盼蓝排斥试验和MTT法检测细胞活性,并进行丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双荧光染色以及在透射电镜下观察CHMm细胞凋亡和形态学变化,并检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)等反映细胞内氧化还原功能的指标。结果显示:在紫杉醇的作用下,CHMm生长受到不同程度的抑制,引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态;ROS和MDA含量增加,SOD和CAT酶活性降低,细胞内出现氧化还原失衡。表明紫杉醇能够抑制CHMm细胞生长,打破氧化还原平衡,诱导细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性。     

嗅神经鞘细胞条件培养液对PC12细胞活性及分化影响

研究嗅神经鞘细胞(OEC)条件培养液对PC12细胞活性和分化的影响。原代培养并纯化OEC，收集其培养上清并制备条件培养液，然后用其培养PC12细胞，随后于倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化，通过MTT检测PC12细胞活性，免疫细胞染色观察β-tubulin的表达变化。结果显示OEC条件培养液可促进PCI2细胞突起生长，增加细胞活性，促进其β-tubulin的表达升高。从而证明OEC能够分泌一些促进PC12细胞和诱导其向神经元分化的营养因子。     

人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关.     

猪伪狂犬病毒感染PK15细胞对细胞凋亡及相关凋亡因子的影响

为研究PRV感染PK-15细胞对其细胞凋亡及相关凋亡因子的影响,本试验采用体外细胞培养技术在不同时间点收集细胞、应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、流式细胞仪测定细胞凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因caspase-3,Bcl-2,Bax和Bcl-xl的表达情况。结果显示,PRV感染24 h后可明显抑制细胞的增殖,这种抑制与时间密切相关,与感染剂量无显著差异。流式细胞仪检测也显示PRV能明显提高其凋亡率,PT-PCR显示PRV感染后caspase-3,Bax表达量明显上调,Bcl-xl,Bcl-2表达量明显下调。结果表明,PRV在感染过程中对细胞的生长的影响与时间紧密联系,能够诱发细胞凋亡,Bax,Bcl-2,Bcl-xl,caspase-3,起着重要的调控作用。     

GDNF对缺气损伤的体外培养新生儿大鼠背根节神经元的作用

运用体外缺气损的细胞模型，研究GDNF对损伤的新生儿大鼠背根节神经元（DRG）是否有保护作用。采用原代培养的方法，用N1无血清培养基分离培养DRG神经元24h后，加入含20μg/mL GDNF的无血清培养液，然后液体石蜡封闭培养液，继续培养4，8，12，24h，分别做MTT实验检测细胞活性OD值，台盼蓝染色记数，细胞部蛋白测定活性OD值，台盼蓝染色记数，细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况，结果表明：（1）封闭12h后GDNF组的DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高（＊＊P＜0．01），其余各时间点均无显著性差异，缺气损伤8h和12h后，GDNF组的DR细胞总蛋白较对照组显著升高（＊＊P＜0．01，＊＊P＜0．05），其余各时间点均无显著性差异；（2）各时间点DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著，缺气损伤一定时间的GDNF对新生大鼠DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用，而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用。     

AO/EB双重染色法检测紫杉醇体外诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡

以体外培养犬乳腺肿瘤系CHMm株为模型,用0.1μmol/L的紫杉醇对细胞处理后,用台盼蓝排斥实验和MTT法检测细胞活性,AO/EB双荧光染色荧光显微镜下观察犬乳腺肿瘤细胞凋亡及形态学变化.结果显示,紫杉醇作用后,CHMm细胞生长受到不同程度的抑制,并引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态.表明紫杉醇能抑制CHMm生长,引起...     

NDPKB真核表达载体的构建及其对细胞生长活性的影响

将目的基因NDPKB连接到pEGFP—N1真核表达载体，转染Vero细胞，通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和Westernblotting分析，鉴定构建的pEGFP—NDPKB真核表达载体的正确性；利用生物信息学工具分析预测NDPKB蛋白的三维结构和可能存在的活性位点；MTT试验检测NDPKB对细胞生长活性的影响。结果显示，pEGFP-NDPKB真核表达载体构建成功，在Vero细胞中NDPKB和GFP蛋白能有效地融合表达。在线预测了NDPKB蛋白的三维结构和可能存在的活性位点。MTT试验结果表明，NDPKB对Vero细胞生长活性的抑制率为25．8％，对A549细胞生长活性的抑制率为22．7％。结果表明，NDPKB能够抑制细胞的生长，对细胞的凋亡具有正调节作用。     

不同浓度奶牛乳腺上皮细胞和奶牛脐带间充质干细胞共培养对细胞增殖作用的研究

研究在不同浓度下奶牛脐带间充质干细胞和奶牛乳腺上皮细胞共培养对共培养体系细胞增殖的影响。将P3代UC-MSCs与P3代BMECs按照浓度比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶50、1∶100、1∶1000、2∶1等不同比例随机混合培养,同时设立UCMSCs与BMECs单纯培养组为对照组,并分别于0h,24h,48h,72h,96h,120h和144h时观察各组细胞的形态变化,用MTT法检测细胞增殖。将UC-MSCs和BMECs按照不同浓度比混合共培养后,细胞生长状态良好,无抑制作用;MTT检测增殖发现各组OD值在72h时均达到最大,其中1∶2浓度组OD值最大,细胞增殖最快。UC-MSCs和BMECs混合共培养,两种细胞之间无抑制作用,生长状态良好,同时能够促进共培养体系的细胞增殖。     

MTT法细胞计数中细胞接种量的确定

在96孔细胞培养板中接种不同数量的CHO细胞,经过48 h和120 h培养后,采用MTT法进行细胞计数,以观察各孔细胞数量是否超出该法的可检测范围。为确保在经过连续培养5 d后各孔细胞数量仍在MTT法的测定范围内,确定出较为合适的细胞接种量非常必要。     

用鳞片估计马来穿山甲个体数量

我国每年都能查扣到多起非法走私大量马来穿山甲鳞片进入境内的案件,由于不知如何根据鳞片来估计个体数量,而给森林公安机关立案、量刑与处罚带来极大不便。通过统计9头马来穿山甲鳞片的数目（Sm）、鲜重（Sfw）、干重（Sdw）,分别获得了以Sm、Sfw、Sdw为参数来估计马来穿山甲个体数量（N）的3个方程,它们是①Sm/929.8≤N≤Sm/681.8;②Sfw/835.4≤N≤Sfw/389.8;③Sdw/774.3≤N≤Sdw/367.9。执法部门在办理此类走私案件中能通过这些方程方便快捷地估算出走私物品的个体数量,能为同类案件的立案、量刑和处罚提供依据。     

图的关联约束数

控制理论经过了三十年的发展,已经成为了图论研究中的一个重要领域,在实际问题中有着重要的应用。正是由于这方面的研究和实际应用之间有着紧密的联系,本文将研究图在关联改变下的控制稳定性,即使用关联约束数考虑图中关联的改变对控制有何影响。首次给出了关联约束数的概念,得到相关性质。进一步研究路、无向圈的关联约束数,并得到准确值。     

应用不对称竞争性PCR技术确定藏羊Agouti基因拷贝重复数

实验采用不对称竞争性PCR技术,测定16只不同毛色藏羊Agouti基因的拷贝重复数,对记录所得Agouti基因连接点的比值进行分析。对样品(n=16)的Agouti基因拷贝数进行分析,区分未知样品Agouti基因的拷贝数。10只全白藏羊的拷贝数在3~6个之间,其余不同毛色6只藏羊均为2个拷贝数。实验证明:不对称竞争性PCR技术检测Agouti基因拷贝重复数变异的方法,可以直接对产物进行定量,具有良好的稳定性和特异性,而且操作简单、安全,自动化程度高,不易产生污染,不需昂贵设备,适合在普通实验室检测。     

胎次对大白母猪产死胎数与弱仔数的影响

为探究胎次对母猪产弱仔、死胎的影响,实验对广西某猪场2015年12月——2017年11月的8 028窝大白母猪的胎次和产弱仔数、死胎数进行统计分析。结果表明:不同胎次母猪产弱仔数和死胎数具有极显著差异(P<0.01),其中第1胎次母猪弱仔数显著高于其他胎次母猪(P<0.05),且弱仔数均值呈逐渐下降趋势;第5胎次母猪的死胎数显著低于其他胎次(P<0.05),且死胎数均值近似呈先下降后上升的趋势;对产弱仔数和死胎数占总产仔数的比例进行分析进一步证明了上述结果。综上,第2～6胎次母猪产弱仔数和死胎数都相对较少,产仔性能最好,规模化猪场可以考虑淘汰7胎以上的母猪;对第1胎次的母猪建设P1场(第1胎次母猪场),制定更为严格的"驯化"和饲养工作。     

拷贝数变异及其研究进展

拷贝数变异作为遗传变异的一种新来源在表型多样性和进化中起着重要作用,引起了研究者广泛的兴趣。拷贝数变异(copy number variation,CNV)是指大小从kb到Mb范围内亚微观DNA片段的变异。CNV在人类正常个体和许多模式动物中已经做了很多的研究工作,并通过生物信息学和杂交的方法确定了CNV的区域。进一步研究发现拷贝数变异与疾病的致病机理有着密切的联系。本文从概念、检测方法和研究进展方面对CNV进行了较为全面的介绍与阐述,分析了目前CNV研究存在的一些问题,并对它在疾病和其他方面的前景做出一些展望。     

猪乳头数性状QTL研究进展

乳头数是种猪繁殖性能选育的重要指标之一。母猪乳头数与其繁殖性能有着较强的相关性,乳头数越多,则窝产仔数越多。因此,在选择种公猪及母猪时要着重考虑乳头数,对乳头数性状施予较高的选择强度,选育出乳头数较多的种猪,以满足高产仔数的需要。论文综述了猪乳头的形成和调控机制,猪乳头数性状QTL定位方法及其研究进展,旨在深入理解猪乳头数性状在猪繁殖性能中的重要作用,为种猪选育提供参考。     

全基因组拷贝数变异研究进展

拷贝数变异(CNVs)是指大小从1 kb到数Mb范围内的DNA片段的变异。有关学者通过生物芯片技术或直接测序技术确定了CNV的区域,并发现拷贝数变异与疾病的致病机理以及畜禽的表型性状和功能性状有着密切的联系。本文就拷贝数变异的概念、突变机制、检测方法以及在致病机理和畜禽遗传育种中的应用等方面进行了综述,为畜禽遗传育种提供新的思路和方法。     

Number of Samples Required for Estimating Herbaceous Biomass

Although the precision of herbaceous biomass estimation depends on the sample number, the spatial heterogeneity of the biomass, and sampling procedures, the magnitudes of the influences on the precision have not been clarified. We simulated virtual plant communities based on the gamma distribution to clarify the relationships between the precision of estimating herbaceous biomass and the number of samples, sampling density, spatial heterogeneity of the biomass, and sampling procedures. Using only two parameters, the gamma distribution can approximate the frequency distribution of herbage mass with varying heterogeneity. Our simulations demonstrated that the number of samples is a more influential factor than sampling density on the precision of the herbaceous biomass estimation. Moreover, our simulations confirmed that biomass heterogeneity strongly affected the precision and quantified the magnitude of the influence. When we estimated biomass with random sampling and a 50 × 50 cm quadrat and accepted estimation error of ± 10% of the mean for a confidence interval of 95%, the numbers of samples needed were 200, 77, and 9 for very, intermediate, and less heterogeneous grasslands, respectively. Similarly, when we estimated biomass with a ranked set sampling (RSS), then 24, 15, and 4 samples were needed in very, intermediate and less heterogeneous grasslands, respectively. We came to two conclusions: 1) In less heterogeneous grasslands, good precision of estimation can be obtained with a small number of samples, and it is useful to employ RSS. The cutting method, as well as nondestructive methods, will be practical; and 2) estimation for heterogeneous grassland requires a large number of samples, and it is not so useful to employ RSS. For that reason, more research is needed on nondestructive methods.     

号牌联结产销平台牵引产业——专访杭州市标准化研究院事业发展部许燕君主任

标准化工作近年来在我国发挥的作用越来越大．在家禽业发展过程中,随着行业整体水平的提高、消费者食品安全和卫生意识的增强、家禽业国际化程度的加深．大家都意识到标准对于推动生产、促进消费、规范市场的积极作用。在现行家禽业标准中,品种和产品标准居多．而关于产品生产全过程和市场流通环节的标准和规范却很少．产销联结不畅。导致好的产品不被消费者熟知,消费者也很难购买到货真价实的产品．部分标准的理论性大于实践性．而真正能服务生产、服务百姓的标准才是大家最需要的。