波尔山羊和江苏本地山羊的AFLP和RAPD分析

 实验山羊共 10 5只 ,其中波尔山羊 6 0只 (公母羊各半 ,采血样 2 0个 ,组织样 4 0个 ) ,徐淮山羊 30只 (公母羊各半 ,每羊采血样 1个 ) ,海门山羊 15只 (公羊 7只 ,母羊 8只 ,每羊采血样 1个 )。分别提取DNA ,按品种构建DNA池。应用 36个选择性引物组合对波尔山羊、徐淮山羊和海门山羊品种间AFLP多样性进行研究 ,其中 2 9个引物组合共扩增出 32 5 3个标记 ,包括多态标记 92个 ,平均每个引物组合扩增 3.17个多态标记 ,多态频率达2 .8%。多态标记数较多的引物组合为 :E0 0 +ACG/M 0 0 +CAA(13个 )、E0 0 +ACG/M0 0 +CAG(10个 )、E0 0 +AAC/M0 0 +CAC(8个 )和E0 0 +AAC/M0 0 +ACT(7个 )。从 93个随机引物中筛选出品种间多态性较强、重复性好的引物 2 2个 ,对 3个品种池DNA进行RAPD扩增 ,共扩增出 183个标记 ,其中多态标记 6 0个 ,平均每个引物扩增2 .73个多态标记 ,多态频率为 32 .8%。两种方法得到一致结果 ,即徐淮山羊与海门山羊遗传距离最近 ,徐淮山羊与波尔山羊次之 ,海门山羊与波尔山羊遗传距离最远。按UPGMA法将海门山羊与徐淮山羊聚为一类 ,其次为波尔山羊。两种方法均能较好地反映 3个山羊品种的遗传差异 ,但AFLP方法多态标记数更多。     

山羊Kiss-1基因克隆、表达模式和SNPs筛选

Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,RT-PCR试验鉴定其在山羊中的组织表达模式,采用DNA池测序筛选Kiss-1基因编码区SNPs位点。结果发现3种山羊Kiss-1基因编码区序列长度均为408 bp,编码135个氨基酸残基;海门山羊与苏淮山羊新品系Kiss-1核苷酸序列一致性为100%,与波尔山羊的一致性为98.80%;系统进化发育分析发现海门山羊与苏淮山羊新品系首先聚在一起,然后再与波尔山羊聚在一起;组织表达谱显示Kiss-1基因在肺脏中表达量相对较高,在其他内脏和肌肉组织中表达量很少;DNA池测序发现2个SNPs位点,其中A175C位点突变引起了苏氨酸到脯氨酸的突变,G256A位点突变引起了丙氨酸到苏氨酸的改变。研究结果为进一步研究山羊Kiss-1基因的进化、功能及其与生产性能特别是繁殖性能的关系提供一定的理论依据。     

海门山羊多胎繁殖性能和改良利用的研究

研究了海门山羊品种特性、多胎繁殖性能、纯种繁育、波尔山羊与海门山羊杂交改良繁殖成绩、初生重、断奶重、周岁重和主要体尺。研究结果表明 ,海门山羊具有繁殖力强、产羔多、遗传性稳定等特点。海门山羊多胎遗传效应可提高杂交后代的产羔率和经济效益。挖掘海门山羊多胎资源 ,选育多胎新品系 ,对提高杂交改良效果和养羊经济效益具有重要意义。波尔山羊改良海门山羊是江苏沿江地区发展肉羊生产的有效杂交组合     

9个山羊品种微卫星DNA遗传多样性分析

为了研究湘东黑山羊、川东白山羊、云岭山羊、板角山羊、黄淮山羊、圭山山羊、贵州白山羊、安徽白山羊和波尔山羊9个山羊品种的遗传多样性,利用微卫星标记技术检测了4个微卫星座位（OarAE101、OarHH55、BM1329、BM143）的多态性。结果表明,9个山羊品种的4个微卫星座位中共检测到53个等位基因,9个山羊品种的期望杂合度（He）和观察杂合度（Ho）均在0.850以上,属于高杂合群体;9个山羊品种4个微卫星座位的PIC均值在0.820以上,属于高度多态微卫星DNA座位,可提供大量的遗传信息,具有遗传多样性评价优势,其中 PIC值最高的是圭山山羊（PIC=0.857）;主成分分析与UPGMA 聚类分析结果显示贵州白山羊、云岭山羊与圭山山羊亲缘关系较近,川东白山羊与板角山羊亲缘关系较近,湘东黑山羊、黄淮山羊与安徽白山羊亲缘关系较近,引入的波尔山羊自成一类,它与其他山羊亲缘关系较远。综上,9个山羊品种均具有较高的遗传多样性,其中圭山山羊的遗传多样性最丰富,贵州白山羊遗传多样性最低;各品种之间的亲缘关系符合不同品种的地理位置与育成史。     

贵州白山羊线粒体转录因子B2基因在组织中的表达

为探明线粒体转录因子B2(TFB2 M)基因在贵州白山羊组织中的表达规律,采用实时荧光定量PCR技术测定TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的表达量。结果表明:目的基因TFB2 M和内参基因β-actin的熔解曲线均呈单一峰形,说明所选条件可准确定量TFB2 M基因在贵州白山羊各组织中的相对表达量。TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的相对表达量分别为1、0.5092、3.9228、1.9138和0.6744,表现为脾垂体心下丘脑肝。     

海门山羊多胎繁殖性能和改良利用的研究

研究了海门山羊品种特性、多胎繁殖性能、纯种繁育、波尔山羊与海门山羊杂交改良繁殖成绩、初生重、断奶重、周岁重和主要体尺。研究结果表明，海门山羊具有繁殖力强、产羔多、遗传性稳定等特点。海门山羊多胎遗传效应可提高杂交后代的产羔率和经济效益。挖掘海门山羊多胎资源，选育多胎新品系，对提高杂交改良效果和养羊经济效益具有重要意义。波尔山羊改良海门山羊是江苏沿江地区发展肉羊生产的有效杂交组合。     

同期发情技术应用于海门山羊生长性能及繁殖特性研究

为研究同期发情技术下海门山羊的生长性能和繁殖性能,试验对特定群体的杂交山羊和海门山羊进行统一催情、人工授精,母羊统一分娩,对其各阶段生长体质量和繁殖性能进行研究。结果表明,同期发情技术下,海门山羊具有早熟(6~8月龄配种)、产多羔的繁殖优势,平均每胎产羔率234.87%。同期发情技术下,与杂交山羊比,海门山羊的各阶段体质量均稍低,但是其周岁和成年体质量均高于传统海门山羊,说明同期发情技术的应用有利于提高海门山羊的生长性能,并且海门山羊繁殖力强的品种特性没有改变,尤其是多羔率明显高于杂交山羊。     

山羊和绵羊GDF9基因FecG~E突变检测

FecGE是巴西Santa Ines绵羊生长分化因子9(GDF9)基因编码区1 034位发生的G→T突变(G1034T),能引起排卵数和产羔数的增加。采用PCR-RFLP方法检测FecGE突变在26个山羊品种(文登奶山羊、辽宁绒山羊、济宁青山羊、贵州白山羊、板角山羊、成都麻羊、金堂黑山羊、古蔺马羊、大足黑山羊、南江黄羊、马头山羊、川东白山羊、关中奶山羊、内蒙古绒山羊、陕南白山羊、太行山羊、雅安奶山羊、圭山山羊、天府肉羊、云岭黑山羊、安徽白山羊、河南奶山羊、波尔山羊、安哥拉山羊、萨能奶山羊、努比山羊)和6个绵羊品种(湖羊、小尾寒羊、洼地绵羊、杜泊绵羊、黑萨福克、白萨福克)中的分布状态。结果表明:在所检测的26个山羊品种和6个绵羊品种中均未检测到FecGE突变。     

山羊THRSP基因5'调控区与外显子Ⅰ多态性研究

以7个中国地方山羊品种和2个引入山羊品种为研究对象,采用PCR-RFLP方法检测山羊THRSP基因5’调控区和外显子1的多态性。结果表明,在THRSP基因的5’调控区发现C-233T多态位点,该位点是NF-KB转录因子的结合位点;在外显子1发现G113A和A138G位点,G113A能引起蛋白质发生Arg38Gln突变。在9个山羊品种中共检测到9种基因型,其中TCAAGG、TTGAAG和TTAAGG型的基因型频率均低于0.05;113G和138A在9个山羊品种中是优势基因,而223C和223T在不同品种中的分布体现出特异性,湘东黑山羊(0.715 5)、圭山山羊(0.649 0)和云岭山羊(0.613 6)携带233C的频率均在0.6以上。湘东黑山羊分别与其他山羊品种的遗传距离较大,而圭山山羊、云岭山羊和马头山羊之间的遗传距离则较近。     

绵羊繁殖轴相关组织TPH1和TPH2基因表达分析及TPH2基因多态性与产羔数的关系

为探讨TPH1和TPH2基因在绵羊不同繁殖状态下的表达差异及TPH2基因多态性与小尾寒羊产羔数的关系,利用实时荧光定量PCR技术检测该2个基因在不同繁殖状态下成年苏尼特羊(短光照3只,长光照3只)和小尾寒羊(卵泡期3只,黄体期3只)的大脑、小脑、下丘脑、松果体、垂体、卵巢、输卵管、子宫、肾脏和肾上腺等10种组织中的相对表达量;同时采用Sequenom MassARRAY?SNP技术检测TPH2基因单核苷酸多态位点SNP在常年发情绵羊品种(小尾寒羊、湖羊和策勒黑羊)和季节性发情绵羊品种(滩羊、苏尼特羊和草原型藏羊)的多态性,并将基因多态性与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果表明:该2个基因在2个绵羊品种各组织广泛表达,TPH1基因在苏尼特羊下丘脑和松果体中短光照表达量极显著高于长光照(P0.01),在苏尼特羊垂体中短光照表达量显著高于长光照(P0.05),在小尾寒羊垂体和卵巢中卵泡期显著低于黄体期(P0.05);TPH2基因在苏尼特羊卵巢组织长光照下的表达量显著高于短光照(P0.05),TPH2基因在小尾寒羊下丘脑组织中卵泡期的表达量极显著高于黄体期(P0.01)。小尾寒羊中TPH2基因g.107854166CT和g.1078541669CT 2个SNP位点关联分析表明,该2个位点与季节性发情性状和小尾寒羊第1、2以及第3胎产羔数均无显著关联(P0.05)。综上,TPH1和TPH2基因在苏尼特羊绵羊下丘脑和松果体中呈季节性光照节律差异表达,暗示其可能参与季节性发情上游基因的调控,而TPH2基因可能参与调控小尾寒羊下丘脑中激素分泌和卵巢发育,但g.107854166CT和g.1078541669CT不是调控季节性发情和小尾寒羊产羔数的关键位点。     

山羊抑制素α前体基因5’侧翼区及外显子的克隆和序列分析

1材料与方法 1．1材料10只海门山羊母羊血样采白海门山羊保种基地（江苏省南通市）;10只安徽白山羊母羊血样采自安徽省芜湖市。颈静脉采血,所采血样均为10ml／只,用ACD抗凝,-20℃冻存。用酚氯仿抽提法提取基因组DNA,溶于TE,4℃保存。     

PRLR基因在内蒙古绒山羊下丘脑、垂体及卵巢中的表达

许多研究已表明PRLR基因是影响山羊繁殖力的一个候选基因。课题以内蒙古阿尔巴斯绒山羊为研究对象,利用RT-PCR技术检测PRLR基因在内蒙古绒山羊生殖轴的表达。结果表明,PRLR基因在内蒙古绒山羊下丘脑、垂体、卵巢中均有表达,说明下丘脑、垂体、卵巢是催乳素作用的靶器官,同时也阐明催乳素对内蒙古绒山羊的繁殖力的影响是通过与靶器官受体基因结合来发挥其功能的,为进一步探讨催乳素对内蒙古绒山羊繁殖影响的作用途径及调控机理奠定基础。     

杂交对安徽白山羊板皮品质的影响

对安徽白山羊及其二元杂交和三元杂交的板皮品质作了比较 :无论是二元杂交或三元杂交 ,都使安徽白山羊板皮面积增大 ,毛纤维密度减小 ,但二元杂交使安徽白山羊板皮变薄 ,均匀度变好 ;三元杂交使安徽白山羊板皮变厚 ,均匀度变差     

Effects of the Crossing Method used in Anhui White Goats On Skin Quality

对安徽白山羊及其二元杂交和三元杂交的板皮品质作了比较 :无论是二元杂交或三元杂交 ,都使安徽白山羊板皮面积增大 ,毛纤维密度减小 ,但二元杂交使安徽白山羊板皮变薄 ,均匀度变好 ;三元杂交使安徽白山羊板皮变厚 ,均匀度变差     

安徽白山羊、波尔山羊GDF9和BMP15基因的RFLP分析

以绵羊高繁殖性能主效基因,生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)和骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因为候选基因,采用PCR-RFLP方法检测其在安徽白山羊、波尔山羊中的多态性。结果表明,均未能检测至GDF9基因的G8突变(C→T)及BMP15基因的B4突变(G→T)。这2个山羊群体中均为野生型,由此表明这2个候选基因检测位点在安徽白山羊、波尔山羊中没有多态性。     

山羊促甲状腺素β亚基基因(TSHB) cDNA克隆 与组织表达研究

促甲状腺素β亚基基因(TSHB)主要表达于动物垂体腺,其表达受到光照周期调控并且与动物季节性繁殖活动密切相关.本实验以济宁青山羊和辽宁绒山羊为研究对象,运用RT-PCR方法克隆获得山羊TSHB基因部分cDNA序列(GenBank No.:JQ937288),并使用RT-PCR与荧光定量PCR技术检测TSHB基因在济宁青山羊与辽宁绒山羊下丘脑-垂体-卵巢繁殖轴及其他组织的表达分布情况.结果表明,山羊TSHB基因编码区417bp,编码含有138个氨基酸的蛋白质;各哺乳动物间TSHB基因高度保守,山羊与绵羊、牛TSHB基因同源性最高,达99％;另外,两品种山羊TSHB基因均在垂体中高表达,在济宁青山羊下丘脑、卵巢及海马等组织低度表达,而在辽宁绒山羊下丘脑低度表达,两品种其他组织均没有表达.非繁殖季节济宁青山羊垂体TSHB基因表达水平是辽宁绒山羊的1.6倍(P=0.061),其对季节性繁殖的调控功能值得进一步研究.本研究首次对山羊TSHB基因cDNA序列进行了克隆和表达分析,研究结果对山羊繁殖调控具有重要意义.     

海门山羊肌肉组织学特性的研究

[目的]研究海门山羊肌肉组织学性状对肉品质的影响。[方法]以12月龄海门山羊和波尔山羊×海门山羊F1公羊为研究对象,对海门山羊不同性别与不同部位肌肉的组织学性状进行系统的研究。[结果]海门山羊母羊股四头肌肌纤维面积及肌原纤维直径、肌节、I带、A带、H带长度极显著大于公羊（P〈0.01）,而背最长肌的肌纤维面积及肌原纤维直径、肌节、I带、A带、H带长度极显著小于公羊（P〈0.01）;同一性别不同部位肌肉之间的肌纤维显微结构与超微结构特性也存在显著（P〈0.05）与极显著差异（P〈0.01）;海门山羊公羊的肌纤维内含有大量线粒体、糖原颗粒和脂肪滴,说明其氧化代谢率高,保水性能强,柔嫩多汁,肉质优良。[结论]为海门山羊的进一步选育、开发和利用以及我国地方山羊品种评估提供了理论依据。     

基于体尺指标的山羊品种SPSS判别分析方法

为了提供一种基于体尺指标的山羊不同品种和地理类型的量化分析方法,用SPSS软件对崇明白山羊、海门山羊、徐淮山羊、关中奶山羊的17个体尺指标进行了典型判别和逐步判别分析。结果表明:该方法总体判别率可达到95.5%,当要求交叉验证正确率>90%时,至少需要9个体尺指标;在品种间两两进行比较时,对判别贡献率最大的指标因品种不同而异。在本研究范围内,角型和胸宽是崇明白山羊区别于其他山羊的两个最具区分度的体尺指标。     

海门山羊肌肉组织学特性的研究

[目的]研究海门山羊肌肉组织学性状对肉品质的影响。[方法]以12月龄海门山羊和波尔山羊×海门山羊F1公羊为研究对象,对海门山羊不同性别与不同部位肌肉的组织学性状进行系统的研究。[结果]海门山羊母羊股四头肌肌纤维面积及肌原纤维直径、肌节、I带、A带、H带长度极显著大于公羊（P〈0.01）,而背最长肌的肌纤维面积和肌原纤维直径、肌节、I带、A带、H带长度极显著小于公羊（P〈0.01）;同一性别不同部位肌肉之间的肌纤维显微结构与超微结构特性也存在显著（P〈0.05）与极显著差异（P〈0.01）;海门山羊公羊的肌纤维内含有大量线粒体、糖原颗粒和脂肪滴,说明其氧化代谢率高,保水性能强,柔嫩多汁,肉质优良。[结论]为海门山羊的进一步选育、开发和利用以及我国地方山羊品种评估提供了理论依据。     

GATA-4在不同能量水平下绵羊睾丸中的表达与定位分析

为了研究GATA-4在不同能量水平下绵羊睾丸中的表达特点及定位情况,提取睾丸组织总RNA,应用Real-Time PCR方法检测睾丸中GATA-4mRNA的表达规律,利用免疫组化技术对睾丸中GATA-4进行定位分析。结果表明,GATA-4mRNA在睾丸中的表达水平由低到高依次为:35%VFI组﹤65%VFI组﹤自由采食组;免疫组化结果显示睾丸Sertoli细胞、Leydig细胞、生精细胞均有阳性产物,阳性强度分别为:35%VFI组﹤65%VFI组﹤自由采食组。GATA-4基因在不同能量水平下具有表达差异性,对绵羊的繁殖性能具有重要的调控作用。