山羊促甲状腺素β亚基基因(TSHB) cDNA克隆 与组织表达研究

促甲状腺素β亚基基因(TSHB)主要表达于动物垂体腺,其表达受到光照周期调控并且与动物季节性繁殖活动密切相关.本实验以济宁青山羊和辽宁绒山羊为研究对象,运用RT-PCR方法克隆获得山羊TSHB基因部分cDNA序列(GenBank No.:JQ937288),并使用RT-PCR与荧光定量PCR技术检测TSHB基因在济宁青山羊与辽宁绒山羊下丘脑-垂体-卵巢繁殖轴及其他组织的表达分布情况.结果表明,山羊TSHB基因编码区417bp,编码含有138个氨基酸的蛋白质;各哺乳动物间TSHB基因高度保守,山羊与绵羊、牛TSHB基因同源性最高,达99％;另外,两品种山羊TSHB基因均在垂体中高表达,在济宁青山羊下丘脑、卵巢及海马等组织低度表达,而在辽宁绒山羊下丘脑低度表达,两品种其他组织均没有表达.非繁殖季节济宁青山羊垂体TSHB基因表达水平是辽宁绒山羊的1.6倍(P=0.061),其对季节性繁殖的调控功能值得进一步研究.本研究首次对山羊TSHB基因cDNA序列进行了克隆和表达分析,研究结果对山羊繁殖调控具有重要意义.     

KiSS-1基因序列分析及其与山羊产羔数关系

设计3对引物克隆山羊KiSS-1基因并扫描其序列多态性,4对引物用于在性早熟和性晚熟山羊品种中检测多态性.获得一个4 118 bp的DNA片段,含有长408 bp的ORF,编码135个氨基酸,其中羧基端17个氨基酸组成信号肽.该多肽和其他哺乳动物具有很高的同源性.在内含子1中发现3个突变位点(G296C、G454T和T505A),外显子2中没有发现突变位点,内含子2中发现1个18 bp缺失(-)/插入(+)突变(1960-1977),外显子3中发现两个突变位点(G3433A[A86T]和C3688A).这些突变位点在性早熟和性晚熟品种之间的基因型分布没有明显差异.296位点CC型济宁青山羊产羔数比GG、GC型分别多0.80只(P<0.01)和0.77只(P<0.01),GG与GC基因型个体间产羔数差异不显著(P>0.05).对于1960-1977位点,-/-个体比+/+、+/-个体产羔数分别多0.77只(P<0.01)和0.73只(P<0.01),+/+与+/-基因型个体间差异不显著(P>0.05).其他4个位点基因型间产羔数差异均不显著(P>0.05).研究初步表明山羊KiSS-1基因296位点C等位基因和1960-1977位点的(-)等位基因与济宁青山羊的高产羔数有关.     

英文文献研读、概念图和翻转课堂在表观遗传学课程教学中的综合应用

在动物科学专业本科表观遗传学教学过程中引入英文文献研读、概念图和翻转课堂的混合教学模式,提高了学生主动学习的积极性,培养了学生英文阅读能力和归纳总结能力,取得了较好的教学效果。就英文文献研读、概念图和翻转课堂在表观遗传学课程中的应用方法进行总结,以期优化表观遗传学课程教学效果,为其他生物学课程的教学提供参考。     

山羊生长分化因子9基因FecTT突变检测

本研究采用PCR-RFLP方法检测生长分化因子9(growth differentiation factor 9, GDF9)基因FecTT突变在济宁青山羊、贵州白山羊、大足黑山羊、陕南白山羊、古蔺马羊、马头山羊、波尔山羊、成都麻羊、萨能奶山羊、文登奶山羊、板角山羊、金堂黑山羊、关中奶山羊、川东白山羊、安哥拉山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊等17个山羊品种中的分布。结果表明,在17个山羊品种中都未检测到FecTT突变,提示,GDF9基因影响Thoka绵羊高繁殖力的FecTT突变对以上17个山羊品种的繁殖力均没有显著影响。     

山羊Dkk1基因的结构、启动子区的多态性及其与生产性状的关联分析

本研究拟克隆山羊的Dkk1基因并对其多态性及其与山羊产绒量的关系进行分析,寻找与山羊产绒量有关的DNA标记。山羊Dkk1基因的获得采用同源克隆的方法,根据产绒量的高低混成2个基因组DNA池,PCR扩增测序寻找差异的核苷酸,然后采用PCR-SSCP方法检测Dkk1基因的多态性。结果,获得了山羊Dkk1基因3491bp的序列,由4个外显子和3个内含子组成,编码265个氨基酸残基,与其它哺乳动物的对应序列有较高的同源性。共发现33处单核苷酸替代和一处内含子2中四碱基的插入。对启动子区2个邻近的多态性位点(T593C-C603A)的分析表明,在所检测的5个山羊群体中,A均为优势等位基因,在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05);不同基因型的白绒山羊个体在产绒量、单位体表面积产绒量、初生体质量、出生到断奶体增质量上差异不显著(P0.1),但A等位基因(T593-603C)对产绒量较为有利。结果表明,山羊Dkk1基因与其它哺乳动物相应序列高度同源,非编码区具有较高的多态性,启动子区的2个多态性与绒山羊的生产性状无显著关联。     

动物科学和动物医学专业实验教学课程体系的改革与创新

文章从实验教学理念、实验教学规划及定位、实验教学改革方案、考核方式改革四个方面对地方性综合大学动物科学和动物医学专业开展实验课程体系的改革与探索进行了总结。通过改革,提高学生学习的积极性和创新意识,使学生掌握实验设计的方法,培养他们分析问题和解决问题的能力,为培养合格的动物科学和动物医学专业应用性人才打下坚实基础。     

山羊美臀突变基因（CLPG）的多态性鉴定及其与生产性能的关系

Callipyge绵羊的臀部肌肉明显肥大,呈极性超显性遗传。研究克隆了山羊（Capra hircas）美臀突变基因(CLPG) 250 bp的序列(GenBank登录号：EU753362), 对其多态性及其与山羊生产性能的关系进行了分析。结果表明,所扩增片段与绵羊和猪相应片段的同源性分别为96.04%和88.65%。PCR-SSCP分析表明,在该DNA区段存在多态性。测序结果显示,在对应于绵羊（Ovis aries）的CLPG基因没有发现A→G的突变,但在该位点下游147 bp处检测到一个A→C的颠换,记为SNP216。对波尔山羊(n　=63)、莱芜黑山羊(n　=70)、鲁波杂交山羊(n　=40)、鲁北白山羊(n　=29)和内蒙古阿拉善白绒山羊(n　=115)共5个群体的多态性进行了检测,结果表明：除鲁北白山羊以外,A等位基因均为优势等位基因;波尔山羊、莱芜黑山羊、鲁北白山羊和鲁波杂交山羊群体均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P　＞0.05）,而内蒙古阿拉善白绒山羊群体显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态（P　＜0.01）;不同基因型的内蒙古阿拉善白绒山羊的初生重、从出生到断奶时的增重及产绒量的最小二乘均值差异不显著（P　＞0.5）。     

Lin28调控let-7 microRNA合成机制的研究进展

Lin28是在胚胎干细胞中广泛表达的RNA结合蛋白,参与分化、发育、肿瘤发生、葡萄糖代谢等多个生命过程。Lin28执行这些功能主要是通过抑制let-7 miRNA的生物合成,并且主要依赖Lin28氨基端冷休克结构域和羧基端锌指结构域。最近一些结构学研究揭示了Lin28调控let-7合成机制,Lin28结合在pri-let-7和pre-let-7的末端loop上,从而阻断Drosha和Dicer的加工,这些互作的特异性主要由锌指结构域和保守的GGAG模体介导。本文就Lin28如何通过其结构域与let-7miRNA前体特异性结合,特异性结合的结构基础等进行了综述,以期为相关研究提供借鉴。     

山羊UBA52基因多态性及其与繁殖性能的关系

根据牛UBA52基因序列,设计3对引物(U1～U3),分别扩增随机选取的济宁青山羊和辽宁绒山羊样本,PCR产物克隆测序,序列比对结果显示仅在U3的扩增产物中发现G63A和T181C突变。设计引物U4,利用PCR-RFLP技术分别在性早熟、高繁殖力品种(济宁青山羊、南江黄羊、马头山羊)和性晚熟、低繁殖力品种(辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊)中检测上述位点的多态性,并分析2个突变位点对山羊性早熟和高繁殖力的影响。对于G63A位点,在济宁青山羊和南江黄羊中检测到GG、GA和AA3种基因型,在马头山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊中只检测到GG和GA基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间存在一定的差异;济宁青山羊GG、GA和AA基因型频率分别为0.53、0.44和0.03,AA型和GA型母羊平均产羔数分别比GG型多0.85只(P0.05)和0.49只(P0.05),AA型与GA型之间差异不显著(P0.05)。对于T181C位点,在南江黄羊和内蒙古绒山羊中检测到CC、CT和TT 3种基因型,在济宁青山羊、马头山羊、辽宁绒山羊、太行山羊中只检测到CC和CT两种基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间没有明显差异;济宁青山羊CC和CT基因型频率分别为0.91和0.09,两种基因型个体间产羔数差异不显著(P0.05)。本研究结果初步表明,UBA52基因63位点与山羊的性早熟可能存在一定关联,A等位基因可能是提高山羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记。     

绵羊GDF9基因FecTT突变检测

FecTT是冰岛Thoka绵羊GDF9基因外显子2编码区1279位发生的A→C突变(A1279C),导致编码GDF9蛋白C末端成熟肽第109位丝氨酸改变为精氨酸(S109R),该突变纯合子母羊不育,杂合子母羊产羔数比野生型多0.6只。本研究采用PCR-RFLP方法分析了GDF9基因FecTT突变在小尾寒羊、洼地绵羊、湖羊、考力代、白萨福克、黑萨福克、东弗里生、杜泊绵羊、特克塞尔、多赛特和中国美利奴11个绵羊品种中的分布。结果表明在11个绵羊品种中都没有检测到GDF9基因的FecTT突变,提示GDF9基因影响Thoka绵羊高繁殖力的FecTT突变对以上11个绵羊品种的繁殖力均没有显著影响。