液相色谱-串联质谱法测定猪肉中四环素类药物残留量的不确定度评定

评定液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定猪肉中四环素类药物残留量的不确定度。依据GB/T 21317-2007《动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》,建立相关数学模型,对实验过程中的不确定度来源进行分析与评定。当采用LC-MS/MS法测定猪肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的残留量分别为50.05、42.81、42.45、41.60μg/kg时,扩展不确定度分别为 5.44、6.72、2.86、4.80μg/kg (k=2)。检测结果的不确定度主要受回收率、标准溶液配制、工作曲线拟合的影响。     

微生物发酵床不同垫料粪臭素含量的比较分析

为了研究微生物发酵床中粪臭素的分布规律,对不同深度的饲料微生物发酵床垫料样品和不同地理位置的垫料样品中粪臭素含量进行测定,并分析样本间的差异。分别称取2 g猪粪和垫料样品,采用甲醇提取猪粪和垫料样品的粪臭素,利用反相高效液相色谱法对各样品进行粪臭素检测。新鲜猪粪、育肥猪舍垫料、母猪舍垫料和仔猪舍表层垫料的粪臭素含量分别为4.2、0.93、1.6和0.7μg/g。垫料中的粪臭素含量低于猪粪,仔猪舍垫料粪臭素含量最低。采集于育肥猪舍发酵床表层的垫料样本,粪臭素的平均含量为0.93μg/g,内层垫料样本粪臭素平均含量为4.20μg/g,表层垫料粪臭素含量低于内层垫料。微生物发酵床垫料环境中的粪臭素含量低于猪粪,保障养殖环境健康,减少养殖空气污染,实现资源充分利用。     

异位生物发酵床技术在猪场粪污水处理上的应用

正江山市石明畜业有限公司成立于2015年10月,位于江山市石门镇琚家岗村周家山,主要养殖生猪,建有猪舍12000 m~2,贮粪池950 m~2。现存栏生猪5500头,年出栏10000头。公司采用"生猪+异位生物发酵技术+有机肥+种植专业户(果苗茶牧草)"的技术模式,建有异位发酵床1560 m~2,有机肥生产车间4200 m~2,利用翻抛机对发酵床垫料进行翻抛,实现猪场粪污零排放。     

胶体金试纸条法和液相色谱-串联质谱法检测牛奶中四环素类药物残留比较

采用胶体金试纸条与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）两种方法检测牛奶中残留的四环素类药物。结果表明：胶体金试纸条的检测限为四环素40μg/L、强力霉素40μg/L、金霉素40μg/L、土霉素80μg/L;LC-MS/MS法在牛奶中四环素、强力霉素、金霉素、土霉素的检测限为50μg/L。采用两种方法对实际样品检测,检测结果一致。与液相色谱-串联质谱法相比,胶体金试纸条具有操作简便、快速、直观的特点,可作为筛选法对样品进行定性筛查,LC-MS/MS法进行阳性样品的确证和精确定量。     

规模养殖场兽用抗菌药物使用减量化养殖模式初探

兽用抗菌药物减量化三年试点工作落下帷幕,本市6家养殖场顺利通过评价,先后被列入兽用抗菌药使用减量化行动试点达标养殖场名单。本文以试点养殖场为调研对象,从制度建设、环境控制、疫病防控、饲养管理、替抗方案等五个方面总结了各养殖场在抗菌药物减量化试点工作中的取得的经验及减抗成效,以期为养殖场在开展兽用抗菌药物使用减量化行动过程中提供可复制、可操作的经验,推动建立兽用抗菌药使用减量化管理长效机制。     

生猪养殖场异位发酵床建设与运行操作技术

广西在畜牧业全面推进绿色发展、生态发展过程中,探索出了"异位发酵床+益生菌"的粪污全量化处理新模式。本文从异位发酵床建设、运行操作、日常管理、发酵物利用、注意事项等方面介绍了生猪养殖场异位发酵床建设与运行操作技术,以期提高异位发酵床的生产效能,真正实现养猪场粪污"零排放"和全量化资源化利用。     

干法和湿法猪发酵床垫料中磷的变化规律研究

为完善猪发酵床养殖技术及促进土壤对垫料中磷的利用,研究分析同等时间干法发酵床和湿法发酵床表层垫料、中层垫料和底层垫料中磷的变化情况。结果表明：（1）湿法发酵床垫料水分含量、温度极显著高于干法发酵床（35.54%＆31.49%、34.87℃＆31.91℃）,垫料深度对水分含量、pH、温度有极显著影响（P〈0.01）,垫料中层温度最高;（2）湿法发酵床和干法发酵床总磷含量无差异（3.00%＆3.43%）;植酸磷极显著低于干法发酵床（21.04mg/kg＆27.59mg/kg）,有效磷极显著高于干法发酵床（94.22mg/kg＆91.16mg/kg）,垫料深度对总磷、植酸磷、有效磷有极显著影响（P〈0.01）;（3）湿法发酵床植酸酶、中性磷酸酶、脲酶活性高于干法发酵床（2.98U/L＆2.56U/L、25.83mg/g＆21.77mg/g、1.93U/L＆1.88U/L）,垫料深度对该三种酶活性有极显著影响（P〈0.01）;垫料中层总磷、植酸磷、有效磷含量及该三种酶活性最高。发酵床种类和垫料深度对垫料pH、植酸磷、植酸酶活性的互作极显著（P〈0.01）。研究表明,发酵床中磷的降解主要发生在垫料中层,湿法发酵床更有利于垫料中磷的降解,干法发酵床在养殖过程中需增加垫料的湿度。     

ELISA与LC-MS/MS检测喹诺酮类药物残留的比较

分别采用间接竞争酶联免疫法(ELI SA)与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法对罗非鱼肉中喹诺酮类药物残留量进行检测,对得出的检测结果进行比较分析。结果显示:ELISA方法样本添加回收率在73.4%～89.5%之间,变异系数在5.6%～14.3%之间,检测时间为45mi n,适合于罗非鱼肉中喹诺酮类药物残留的快速筛选;LC-MS/MS方法,样本添加回收率为77.1%～85.7%,变异系数在5.5%～11.2%之间,检测结果准确,变异系数较小,但检测费用较高,适用于喹诺酮类药物残留的确证。     

笼养鸡场异位发酵床处理技术的应用

正异位发酵床处理粪污技术起源于生猪原位发酵床养殖,在生猪养殖粪污处理上得到广泛应用,并取得一定成效。鸡粪中氮和有机物质含量高,层叠式笼养数量多,鸡粪产量大,处理和利用难度高,如果处理不及时,就会迅速液化,产生恶臭,并影响周边环境。安徽省宣城市部分规模养殖场探索利用微生物异位发酵床处理层叠式笼养鸡场的鸡粪,取得良好效果。本文简要介绍层叠式笼养鸡场异位发酵床的选址和布局、建设和处理机械配置、基本原理、工艺流     

深槽异位发酵床处理规模猪场粪污案例分析

<正>引言异位发酵床处理猪粪污技术由猪场原位发酵床处理猪粪污技术基础上发展而来,2018年被农业农村部推选为十项重大引领性农业技术。遵义市播州区在2016年引进广东温氏食品有限公司发展温氏生猪一体化养殖项目时,由温氏公司引进在2017年温氏一体化生猪养殖场开始建设,但在后期近3年的建设运行过程中发现,该发酵床不适应遵义市播州区环境,无一例外均出现了死床,导致建设的异位发酵床几乎全部停止运行。     

异位发酵床垫料利用期限及微生物组成差异分析

异位发酵床处理猪粪污时的床体利用期限是影响其大面积推广使用的限制性因素,该研究旨在通过连续测定床体温度,科学判定垫料利用期限,同时分析垫料熟化时的床体微生物组成差异,为生产中高效管理异位发酵床垫料提供科学依据。结果显示:采用木屑15%、稻壳15%和菌糠70%混合组成垫料高度为1 m的异位发酵床处理猪粪污、不额外添加垫料情况下,床体垫料熟化时间约为90 d;不同高度下异位发酵床熟化垫料中细菌与真菌微生物OTU数量测定结果为:离床体底部50 cm、30 cm、10 cm处细菌OTU数量与真菌相比,分别增加135.75%,180.96%和112.26%;离床体底部50 cm处与离床体底部30 cm及10 cm处细菌OTU数量相比,分别增加34.13%和110.64%;离床体底部50 cm处与离床体底部30 cm及10 cm处真菌OTU数量相比,分别增加59.67%和89.66%。异位发酵床“死床”时,上层熟化垫料中细菌以瘤胃菌科的产己酸菌属为主,属于厌氧菌,放线菌属更多聚集于床体中下层部位。这一结果提示在使用异位发酵床处理猪粪污过程中,应注意提高翻抛效率,增加床体内部氧含量,从而增加微生物种类,提高微生物丰富度,加速粪污降解速率,减少因床体内氧气含量不足而造成的死床现象发生。     

五种抗菌药物从猪、鸡饲料至有机肥中的药物残留迁移规律研究

为研究抗菌药物从饲料向畜禽粪肥转移的残留迁移规律,将40头猪和200羽鸡分为饲喂组和空白对照组进行饲喂对照实验和粪便堆肥发酵实验,其中空白对照组使用普通全价饲料,饲喂组在饲料中加入盐酸金霉素50 mg/kg、磷酸泰乐菌素50 mg/kg、磺胺对甲氧嘧啶各50 mg/kg、恩诺沙星150 mg/kg、二甲氧苄啶10 mg/kg,每日及时对各组实验动物粪便进行采集,样品经提取和净化后使用液相色谱-串联质谱进行分析定量。所得结果表明,猪、鸡饲喂含多种抗生素饲料后粪便中可以检出抗菌药物原型,其可能进入有机肥料发酵制作的环节。参照猪、鸡粪便中排出抗菌药物含量峰值建立模型对发酵期间粪肥中抗菌药物含量进行采样测定,结果显示,恩诺沙星、泰乐菌素和二甲氧苄啶在堆肥过程中会由于温度升高和氧化作用发生降解,其半衰期在5周左右,到10周后其含量低于检测限;但金霉素和磺胺对甲氧嘧啶被少量降解,残留迁移风险较高。     

液相色谱-串联质谱法测定猪肉中3种β-受体激动剂类药物残留

试验建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测猪肉中的克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺残留的方法,并对方法进行了优化。样品经0.2 mol/L的乙酸铵缓冲液提取,加入β-葡萄糖醛苷酶进行酶解,提取液经PCX柱进行净化,液相色谱-串联质谱进行测定,内标法定量。结果显示,猪肉中3种β-受体激动剂残留浓度在0.2~10 μg/kg范围线性关系良好,线性相关系数分别为0.9997、0.9999和0.9993,定量检出限均为0.5 μg/kg,回收率分别为93.57%~96.63%、92.35%~96.01%和91.66%~96.54%,该方法灵敏度高、重现性强,适用于猪肉组织样品中克仑特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的确证检测。     

猪粪厌氧发酵产气的优化条件研究

研究猪粪发酵液厌氧消化过程的温度、接种率和原料添加量的优化条件,为猪粪废水的资源化利用提供参考。猪粪发酵液厌氧消化试验选择环境温度、接种率和原料添加量作为三因子,每因子设三水平进行正交试验。研究表明．温度对猪粪发酵液厌氧产气有显著影响,温度能影响物料水解过程,从而影响发酵液的pH值和氨氮值,二者关系到产气过程。猪粪发酵液厌氧产气优选组合是温度55℃、接种率30％、原料添加量100g,20d累积产气量达8899mL;TS降解率最好的组合为温度55℃、接种率30％、原料添加量80g,降解率达85．54％。     

猪粪干、湿法厌氧发酵过程中碳、氮的流失

试验以新鲜猪粪为发酵原料,研究湿法和干法两种不同厌氧发酵过程的碳、氮排放量。湿发酵和干发酵组发酵料液的总固体(TS)含量分别为8%和20%,发酵液pH为6.8~7.4,发酵温度为35℃,体积为1.2 L,周期为21 d。试验期间每天测产气量,每4天取发酵样,测其全氮含量和TS降解率。结果表明,湿法和干法发酵组的CH4总产气量分别为9114 mL和12537 mL;CO2的总产气量分别为251.90 mmol和343.67 mmol;TS降解率分别为52.5%和29%。湿发酵的碳流失率和全氮流失率极显著高于干发酵(P<0.05)。     

液相色谱-串联质谱法研究地克珠利在家兔组织中残留及消除规律

[目的]建立一种检测家兔组织中地克珠利含量的液相色谱-串联质谱法（LC—MS／MS）,研究地克珠利在家兔组织中的残留及消除规律。[方法]选择48只家兔（雌雄各半）,在饲料中加入10g／1000kg地克珠利混饲,连续饲喂30d。分别于休药后的第0、1、2、3、4、5、6天,每个时间点随机处死6只家兔（雌雄各半）,取肌肉、肝脏、肾脏组织,DMF,乙腈沉淀法提取并用LC—MS,MS法检测地克珠利残留量。[结果]地克珠利在肾脏中的残留量最高（休药0d为912．6μg／kg）,肝脏次之（休药0d为156．μg／kg）,肌肉最低（休药0d为43．1μg／kg）,在肾脏中的消除速度最快。[结论]该方法适于检测家免组织中的地克珠利含量。休药0d即可满足欧盟要求     

胶体金免疫层析法测定牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留

应用胶体金免疫层析法对牛奶中的β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留进行检测,考察该法的灵敏度、假阳性率、假阴性率、特异性及准确性。结果表明：用胶体金免疫层析法测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺,检测限分别为青霉素G 2μg/L、氨苄青霉素3μg/L、阿莫西林4μg/L、苯唑青霉素6μg/L、邻氯青霉素6μg/L、双氯青霉素6μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢哌酮40μg/L、头孢曲松50μg/L、头孢噻呋90μg/L、头孢洛宁10μg/L、三聚氰胺50μg/L,假阳性率不大于5%,假阴性率为0;方法特异性较好,与牛奶中常见的其他抗生素无交叉反应;结果准确可靠,对实际样本的检测结果与液相色谱-质谱/质谱法基本一致。该方法简便、快速、准确、稳定,可作为牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留现场快速检测的一种有效手段。     

Isolation and Identification of E. coli in the Microbial-fermentation Bed of Piggery

To investigate the distribution and characteristic of E. coli in the microbial-fermentation bed of piggery, litters with different levels of fermentation were used for the isolation, identification and drug sensitivity test of E. coli, to analyze the pathogenicity and drug susceptibility of E. coli in the microbial-fermentation bed of piggery. The results showed that, E. coli could be isolated only from litters with low degree of fermentation (0<△E≤7.63), and totally 41 strains were isolated from litters with 10^-5 dilution, but none from litters with higher degree of fermentation (△E>7.63). The number of E. coli reduced along with the fermentation of litters. Among the 41 strains of E. coli, 15 were intestinal pathogenic strains, 9 of which had astA gene (22%), and 2 strains had sepA gene (4.8%). 11 strains were resistant to doxycycline, accounted for 27% of the total.The two strains containing sepA gene had strong resistance to doxycycline. In conclusion, the microbial-fermentation bed fermentation bed had a inhibitory effect on E. coli which promoted the application of fermentation bed and reusing of litters.     

微生物发酵床猪舍不同发酵等级垫料中大肠杆菌的分离鉴定

为了研究微生物发酵床不同发酵等级垫料中大肠杆菌的分布及其特性,试验采集了微生物发酵床猪舍不同发酵程度的垫料,进行大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验,分析了发酵床中大肠杆菌的致病性和抗生素抗性。试验结果表明,在10^-5稀释倍数下,仅在垫料发酵级别为一级的垫料中,即垫料使用时间较短、发酵程度较低（0<△E≤7.63）的条件下,分离到41株大肠杆菌;而在发酵程度较高的垫料中,即垫料发酵程度二级以上（△E>7.63）的环境中未分离到大肠杆菌。随着发酵的进行,发酵床中大肠杆菌数量逐渐减少。41株大肠杆菌中含有致泻性大肠杆菌15株,其中具有热稳定肠毒素（astA）基因的大肠杆菌9株,占总数的22%,含耐药性因子（sepA）基因的大肠杆菌2株,占总数的4.8%;耐强力霉素的大肠杆菌11株,占总数的27%。含有sepA基因的大肠杆菌具有强耐药性。从以上结果来看,微生物发酵床对猪舍大肠杆菌具有抑制作用,可为发酵床的推广应用及垫料再利用提供一定依据。     

固相萃取-液相色谱串联质谱法测定猪尿中的巴氯芬

为了建立用固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物尿液中巴氯芬药物残留的检测方法,试验采用叔丁醇-叔丁基甲醚对猪尿样品进行提取,提取液经混合型阳离子固相萃取小柱（MCX）净化、富集后,以液相色谱串联质谱测定,外标法定量。结果表明,该方法检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.8 ng/mL,巴氯芬在0.8~20 ng/mL的添加浓度范围内线性良好,线性相关系数大于0.9997,在低、中、高（0.8、1.6、5.0 ng/mL）三个浓度的添加水平回收率在80%~120%之间,批内、批间精密度均小于10%。该方法灵敏度高,定性、定量准确,可用于猪尿中巴氯芬药物残留的定性、定量检测。