单克隆抗体捕获ELISA检测鸡多杀性巴氏杆菌IgM抗体

应用抗鸡ＩｇＭ单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）血清中特异性ＩｇＭ抗体的单克隆抗体捕获ＥＬＩＳＡ,其敏感性、特异性、重复性优于间接ＥＬＩＳＡ。用于检测鸡抗Ｐ．ｍ．的特异性ＩｇＭ抗体发现：鸡在注射免疫Ｐ．ｍ．灭活苗后第４天即可检测到ＩｇＭ抗体,并且上升较快,峰值在第２周为１：５１２０;鸡在口服免疫Ｐ．ｍ．弱毒活苗后ＩｇＭ抗体上升缓慢,峰值在第４周左右,滴度较低为１：３２０;鸡在由不同途径感染不同的Ｐ．ｍ．强毒后第８天时,ＩｇＭ抗体滴度都明显上升。同时应用间接ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ抗体滴度进行比较。本项研究对建立检测鸡抗其它病原微生物特异性ＩｇＭ抗体方法具有借鉴意义。     

禽多杀性巴氏杆菌单克隆抗体的制备及其基本性状研究

将多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）Ｃ４８－１株（Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ１型；Ｃａｒｔｅｒ分型５：Ａ）灭活后全菌免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ／０骨髓瘤细胞在ＰＥＧ１０００作用下融合。用全菌包被的间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体，获得了２３株能稳定分泌抗Ｐ．ｍ．１型单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养２个月和冻存３个月后复苏培养，均能稳定分泌特异性单克隆抗体。２３株腹水ＥＬＩＳＡ效价分别从１０－３—１０－１１，无免疫沉淀性，也无凝集性。Ｉｇ类型鉴定表明，３株属于ＩｇＭ，２０株属于ＩｇＧ。间接ＥＬＩＳＡ检测结果表明：２３株单抗只与Ｐ．ｍ．１型起反应，而不与Ｐ．ｍ．３、４、１６型起反应，也不与禽类易感的鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李氏杆菌起反应，具有型的特异性。用ＩＣ８Ｈ９腹水建立的夹心ＥＬＩＳＡ方法检定Ｐ．ｍ．１型菌株，其敏感性高，特异性强，也更为方便。     

新城疫病毒接种鸡血中IgM,IgC的动态变化

将１６只ＳＰＦ鸡分成４组，每组４只，分别接种新城疫油乳剂苗，新城疫，传染性支气管炎，传染性法氏囊病三联油乳剂苗，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗。接种后每隔２ｄ采血１次，用ＥＬＩＳＡ测定新城疫特异性ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体，结果：油乳剂灭活苗接种组均无特异性ＩｇＭ抗体出现，特异性ＩｇＧ抗体高峰期出现在接种后２２ｄ，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗接种组均有特异性ＩｇＭ抗体出现，高峰期为接     

新城疫病毒接种鸡血清中IgM、IgG的动态变化

将１６只ＳＰＦ鸡分成４组，每组４只，分别接种新城疫油乳剂苗，新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂苗，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗。接种后每隔２ｄ采血１次，用ＥＬＩＳＡ测定新城疫特异性ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。结果：油乳剂灭活苗接种组均无特异性ＩｇＭ抗体出现，特异性ＩｇＧ抗体高峰期出现在接种后２２ｄ，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗接种组均有特异性ＩｇＭ抗体出现，高峰期为接种后第９ｄ。各接种组经强毒攻击后，均出现ＩｇＭ反应，ＩｂＧ呈典型的回忆反应。进一步试验用ＬａＳｏｔａ灭活苗经肌肉、静脉接种和加氢氧化铝胶佐剂后肌肉接种，经测定，接种鸡均无或仅有很低水平的特异性ＩｇＭ抗体产生。     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体（ＭＯ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株．以有限稀释法克隆１～２次，得到６株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株．选择抗体分泌较高的１４Ａ６、７Ａ２７、Ｂ３８进行了较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９４～９６．抗体属性是：１株为ＩｇＧ２ａ、２株为ＩｇＧ１．用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ作符异性分析、该ＭｃＡｂ只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应，而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应．将杂交瘤细胞注射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水．其抗体效价提高１００倍．杂交瘤细胞在液氮中保存１～２年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体ＭｃＡｂ。     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的 Ａ 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠后， 取小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选，共获得 １ Ａ８、１ Ｃ３、１ Ｄ５、１ Ｄ８、１ Ｆ１、１ Ｈ１ 和 ２ Ｅ３ ７ 株稳定分泌单克隆抗体（ Ｍ ｃ Ａｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，７ 株 Ｍ ｃ Ａｂ 的 Ｉｇ 亚类有 Ｉｇ Ｇ１（１ Ｄ８）、 Ｉｇ Ｇ３（１ Ａ８、１ Ｃ３ 和 ２ Ｅ３）和 Ｉｇ Ｍ（１ Ｄ５、１ Ｆ１ 和 １ Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 １∶５１２～１∶１ ０２４ 和 １∶１０６ ～１∶１０８ 。尤为重要的是，２ Ｅ３ 杂交瘤细胞株分泌的 Ｍ ｃ Ａｂ 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。     

牛重组型生长激素抗独特型抗体的产生与鉴定

利用纯化的兔抗牛生长激素抗体ＩｇＧ来免疫３只绵羊以制备抗独特型血清。间接ＥＬＩＳＡ法和琼脂糖双扩散法测定抗血清滴度分别达到或超过１：１２８０００和１：６４以上。之后用硫酸铵沉淀法和亲和层析法纯化抗独特型抗体。采用间接ＥＬＩＳＡ法来研究抗独特型抗体与第一抗体ＩｇＧ成分特异性结合及生长激素与第一抗体中ＩｇＧ结合的影响,结果显示出它不但能ＩｇＧ成分特异性结合。而且能与生长激素竞争性结合第一抗体ＩｇＧ成分     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗的点眼免疫应答 Ⅰ.局部体液免疫应答

本研究采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、免疫组织化学方法、病理组织学方法对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫（ Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｎ Ｄ）疫苗点眼免疫后的局部体液免疫应答进行了研究。研究发现， Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后鸡眼区相关淋巴组织（ Ｈｅａｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍ ｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ， Ｈ Ａ Ｌ Ｔ）对 Ｎ Ｄ 疫苗可产生高效的局部体液免疫应答：①免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 抗体及哈氏腺（ Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｉａｎｄ， Ｈ Ｇ）中 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 型浆细胞出现较对照组早，且抗体滴度及浆细胞数量均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度及哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞数量也均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１），且哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞的出现早于对照组；②点眼免疫后泪液中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ抗体出现较血清中的早，且抗体滴度也显著高于血清中（ Ｐ＜ ０．０５）；③ Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ苗点眼免疫后可使结膜相关淋巴组织的形成和发育明显提前，免疫组结膜相关淋巴组织中的淋巴滤泡数量极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．     

间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

CIA抗体的间接ELISA检测方法

本试验建立了包被已知抗原，检测未知抗体的间接ＣＩＡ－ＥＬＬＩＳＡ方法。包被抗原为ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１Ｃｕｘ－１株上清，与血清样品作用，加酶联兔抗鸡ＩｇＧ后，与底物５－氨基水扬酸显色，并制定了合理的判定标准。此方法特异性好，操作简便，适于大批鸡群抗体水平检查，并为免疫监测提供可靠技术手段。     

结膜相关淋巴组织和哈氏腺免疫协同关系的研究Ⅰ．结膜相关淋巴组织缺失对哈氏腺点眼免疫应答的影响

采用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学方法、手术切除结膜相关淋巴组织（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ，ＣＡＬＴ）法对结膜相关淋巴组织和哈氏腺（Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｌａｎｄ，ＨＧ）在点眼免疫应答过程中的相互协同关系进行了研究。研究发现，采用外科手术于１日龄切除结 膜相关淋巴组织后切除组点眼免疫后泪液中ＮＤＶ－特异性ＩｇＡ、ＩｇＭ型抗体滴度及哈氏腺中ＩｇＡ、ＩｇＭ     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

CIA抗体的间接ELISA检测方法

本试验建立了包被已知抗原，检测未知抗体的间接ＣＩＡ－ＥＬＩＳＡ方法，包被抗原为ＭＤＣＣＭＳＢ１，Ｃｕｘ－株上清，与血清样品作用。加酶联兔抗鸡ＩｇＧ后，与底物５－氨基水杨酸显色，并制定了合理的判定标准，此方法特异性好，操作简便，适于大批鸡抗体水平检查，并为免疫监测可靠技术手段。     

马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究：Ⅱ.免疫亲合色谱—酶？…

本文首次报道ＩＡＣ－ＥＬＩＳＡ方法测定鸡组织中马杜霉素的残留。制备针对马杜素的特异性抗体ＩｇＧ和高容量ＩＡＣ柱（Ｉ柱动态柱容量为７１６０ｍｇ．ｍｌ＾－１ｇｅｌ,Ⅱ柱为３７５０ｎｇ．ｍｌ＾－１ｇｅｌ）。组织样品用甲醇提取,经ＩＡＣ柱分离纯化,ＥＬＩＳＡ检测,即ＩＡＣ－ＥＬＩＳＡ方法。本试验揭示,能组织样本提取纯化稀释液为介质制备扔标准曲线,其Ｉ５０值和斜率与以ＰＢＳＴ－１０％甲醇为介质的标准曲线相符     

分泌抗猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将猪细小病毒（ＰＰＶ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞在聚乙二醇作用下融合，用血凝抑制试验（ＨＩ）筛选，以有限稀释法克隆３次，得到５株分泌抗ＰＰＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ），选择抗体分泌较高的４Ｆ４、Ａ４或Ｅ８进行较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９３和８７，抗体属性为ＩｇＧ１，其中１株为Ｋ轻链，用交叉ＨＩ法对２株ＭｃＡｂ作特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＰＰＶ发生反应，而不与日本乙     

应用H—Y单克隆抗体鉴定小鼠和家兔胚胎性别

以Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠的脾细胞免疫同雌性小鼠，选择免疫应答反应较好的雌性小鼠４只，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合的杂交瘤细胞经过３次克隆，筛选出了２株能够分泌Ｈ－Ｙ抗体的杂交瘤细胞系ＨＹＡ１和ＨＹＡ２，其分泌的相应抗体分别名为ＨＹａ１和ＨＹａ２。琼脂双扩散试验表明，ＨＹａ１和ＨＹａ２分别属于ＩｇＭ和ＩｇＧ亚类。胚间接免疫荧炮分析及胚胎细胞毒试验表明，ＨＹａ１和ＨＹａ２分别属于ＩｇＭ和Ｉ     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

生物素—亲和素强化斑点试验检测口蹄疫病毒抗体的研究

常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测。ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶性检测系统，进行免疫强化斑点试验检测口蹿疫病毒抗体。用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替和二抗体，通过ＡＰ标记怕亲和素检测生物素化抗体，是后加底和ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特异性和重复性，由于引入生物系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检     

用生物素—亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测。ＨＲＰ的稳定性虽好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶（ＡＰ）检测系统，进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体，通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｖｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加入底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法操作简单，检测时间短，并具有良好的特异性和重复性。