蚯蚓纤溶酶基因番茄表达载体的构建

为研究蚯蚓纤溶酶的番茄表达,构建EFE基因的番茄表达载体pF和pEF,并导入农杆菌。采用PCR法在EFE基因DNA序列上添加了表达调控元件和酶切位点后,得到新EFE基因片段,将该片段与切去GUS基因的pBI121载体相连,以构建CaMV35S驱动的EFE组成型表达载体pF;用PCR克隆得到的E8启动子片段替换pF上的35S启动子,以构建番茄成熟果实特异性表达载体pEF;最后,采用三亲交配法用重组质粒转化根癌农杆菌EHA105;结果表明:经过酶切、PCR和测序鉴定,EFE基因、E8启动子序列已重组到表达载体上,植物表达载体构建正确,并且已经转化进农杆菌EHA105中。     

蚯蚓纤溶酶的研究进展

蚯蚓纤溶酶是近年发现的一种新型溶栓物质,该酶具有纤溶活性和溶栓活性,故其研究受到了极大的关注。文章概述了蚯蚓纤溶酶结构特点、药用价值、酶学活性、基因获取与表达、开发利用等方面近10年以来的研究进展。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化

用硫酸铵分级盐析, 透析除盐及 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ—纤维素、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－ ２５ 和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ ５０ 三种柱层析方法从蚯蚓组织提取液中分离纯化一种单一组分的纤溶酶。     

对蚯蚓纤溶酶的性质和纤溶活性的研究

从蚯蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶。研究表明,其最适pH值为80,最适温度为57℃,热稳定性较好,金属离子Na+,K+,Mg2+等可提高此酶的活力,而Hg2+,Ca2+等对此酶有一定的抑制作用。采用平板法测定此酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性。     

蚯蚓在食品中的应用

现代研究表明,蚯蚓体内可分泌能分解蛋白质、脂肪和木质纤维的特殊酶,主要是纤溶酶、蚓激酶、蛋白酶,可将各种有机物转化为丰富的蛋白质,供其生存并快速繁衍。将蚯蚓体内提取出的蛋白酶、蚓激酶、纤溶酶,可制成溶栓、地龙注射液等药品,用于治疗高血脂、动脉硬化、支气管哮喘、溃疡等疾病。     

Bacillus subtilis Z-3菌株纤溶酶的分离纯化研究

为获取微生物源溶栓药物,从土壤中获得产纤溶酶活性较高的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Z-3。从Z-3菌株的发酵液中提取纤溶酶,利用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和聚丙烯酰凝胶电泳等方法,对纤溶酶进行分离纯化。分离纯化得到1个单一组分(BSFE-1),SDS-PAGE电泳检测为单一条带,BSFE-1表观分子量为48 kDa,等电点为10.5,属丝氨酸蛋白酶类,纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性BSFE-1的比活力为4 494.099 U/mg,BSFE-1在4~50℃和pH 4~11之间活性较稳定。     

蚯蚓体内营养和药物有效成分的研究进展

在简介了蚯蚓生物学功能的基础上，着重介绍了蚯蚓体内的有效营养成分及几种重要酶（系），对蚓纤溶酶，蚓激酶等的分离纯化，酶学性质，药理作用和临床研究以及蚯蚓对净化环境，保护自然生态平衡的作用等进行了详细的综述。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺研究

对人工饲养的北星二号蚯蚓纤溶酶的分离纯化表明，其较佳工艺为磷酸缓冲液保温或匀浆提取，Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＡ－９０４或ＤＥＡＥ－纤维素柱层析，Ｓｅｐｈａｄｅｓ Ｇ－１００凝胶过滤，真空冷冻干燥，按此工艺可得到纤溶化活力为８３７００ｍｍ＾２／ｍｇ。蛋白的蚯蚓纤溶酶。     

对蚯吲纤溶酶的性质和纤溶活性的研究

从蚯蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶。研究表明,其最适pＨ的值为８．０,最适温度为５ ．７℃,热稳定性较好,金属离子Ｎa＾＋,Ｋ＾＋,Ｍg＾２＋等可提高此酶的活力,而Ｈg＾２＋,Ｃa＾２＋等对此酶有一定的抑制作用。采用平板法测定此酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性。     

地鳖虫纤溶酶的三维结构模拟与序列分析

为了研究地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)纤溶酶的溶栓机理,根据地鳖虫纤溶酶成熟肽编码序列,利用生物信息学方法,对地鳖虫纤溶酶进行了结构分析,用Biosun软件的同源模建技术,模拟了其三维结构。利用GOLDKEY软件,对地鳖虫纤溶酶的氨基酸序列进行了分析,讨论了其等电点、亲水性、柔性与催化活性之间的关系。结果表明,地鳖虫纤溶酶的活性中心是组氨酸、丝氨酸和天冬氨酸3个氨基酸残基,位于球蛋白中心凹穴处,底物结合部位是丝氨酸、天冬氨酸和甘氨酸,该类酶水解纤维蛋白的机理是催化精氨酸-赖氨酸之间的肽键水解。     

番茄乙烯形成酶基因的克隆及其反义基因的表达载体构建

从成熟的番茄果实中提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成乙烯形成酶ｃＤＮＡ,并将其克隆至载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ的ＥｃｏＲＶ位点,经限制酶谱分析,构建亚克隆进行全序列测定和序列分析。将所克隆基因以反义基因的形式定向重组到载体ｐＳＰＲＯＫ上,同时将带有完整启动子和终止子的标记基因ＢＡＲ基因引入ｐＳＰＲＯＫ中,最终获得表达乙烯形成酶反义基因和ＢＡＲ基因的植物表达载体ｐＢＡＲ－ＥＦＥ。     

蚯蚓的药用活性成分研究

综述了蚯蚓的药用活性成分的研究。     

常温贮藏对苹果生理及品质变化的影响

研究了常温贮藏苹果的６种处理①０．０５ｍｍ聚乙烯薄膜袋＝保鲜剂ＫＭｎＯ４;（②）０．０２５ｍｍ聚乙烯薄膜袋＋保鲜剂ＫＭｎｏ４,;③０．０５ｍｍ聚乙烯薄膜袋;④０．０２５ｍｍ聚乙烯薄膜⑤０．０２５ｍｍ聚乙烯袋＋ＫＭｎＯ５４,密封贮藏的苹果其硬度,固形物,总糖,总酸,ＶＣ含量等都优于其它处理,且腐烂率低,其１－所基环丙烷－１－羧酸含量,乙烯释放量,呼吸强度,乙烯合成酶活性等生理指标都最低。     

呋喃丹对赤子爱胜蚓体内蛋白含量、SOD和TChE活性的影响

选用杀虫剂呋喃丹对赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)进行染毒试验,研究农药污染对赤子爱胜蚓的致死率和体内蛋白含量、SOD和TChE活力的影响。结果表明:当蚯蚓受到低浓度呋喃丹胁迫时,其体内蛋白含量和TChE的活性均表现为升高趋势,SOD活性表现为降低;当受到高浓度呋喃丹胁迫时,其体内蛋白含量和TChE活性表现为不同程度的降低,SOD却表现为升高;其剂量-效应关系曲线均为抛物线型。可利用蛋白含量、SOD和TChE活性的变化来指示呋喃丹对赤子爱胜蚓的毒性作用。     

不同季节蚯蚓活动对土壤微生物类群数量的影响

采用人工培养的蚯蚓和野生环毛蚓在试验土壤中进行接种,跟踪测量不同季节中蚯蚓-微生物交互作用下土壤微生物类群数量的变化,探讨了蚯蚓活动对土壤中不同微生物类群数量的影响。结果表明,接种蚯蚓后土壤中微生物类群的数量都有不同程度的增加,细菌数量的增加比放线菌和真菌明显一些。春季接种蚯蚓土壤中的细菌、放线菌和真菌数量的增加程度要比其他季节高。人工培养的蚯蚓和野生环毛蚓对土壤中不同季节微生物类群数量影响的差异程度不显著。