羊传染性脓疱皮炎耐热性活疫苗冻干曲线的筛选试验报告

为了进一步筛选羊传染性脓疱皮炎耐热性活疫苗,本次试验共设置了3条不同的冻干曲线,通过培养羊传染性脓疱皮炎弱毒为对象,通过对疫苗的冻型、色泽、质地、水分含量、真空度、冻干时间长短,冻干前后病毒损失量为主要试验内容,筛选羊传染性脓疱皮炎耐热性活疫苗的最佳冻干曲线。结果证明,选择不同的冻干曲线所制备的活疫苗均表现出很好的耐热保护性能,虽然在冻干前后损失适量,存在一定差异,但差异性不明显。最终结合冻型好、冻干时间短,冻干前后病毒损失量小,选择曲线1为本次试验的最佳冻干曲线。     

羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护剂初步优化筛选试验研究

试验以羊传染性脓疱皮炎弱毒活疫苗为对象,依据冻干保护剂的保护功能,对耐热保护剂的组成、混合比例进行了初步筛选。通过反复试验,对其物理性状观察、水分含量测定、冻干前后病毒损失量、经37℃处理、25℃保存后病毒损失量等指标的比较进行筛选,优选出了符合要求的A3、A6、C4三个耐热保护剂配方。试验结果表明,使用保护剂的羊口疮疫苗在37℃保存20 d,病毒含量下降0.5~0.7个滴度,常规疫苗下降2.3个滴度;25℃保存60d,病毒含量下降0.3~0.6个滴度,常规疫苗下降2.5个滴度。从而证明了羊orf耐热活疫苗耐热效果优于常规疫苗。     

羊传染性脓疱病毒耐热冻干保护剂筛选及冻干曲线优化

采用冻干试验筛选出保护剂基础配方,再通过Plackett-Burman设计法筛选主要保护剂基质,然后通过Box-Behnken响应面分析法对羊传染性脓疱病毒(ORFV)耐热保护剂配方进一步优化,用冻干试验进一步验证筛选出1种针对ORFV保护效果最好的耐热冻干保护剂作为疫苗用候选配方。同时,依据前期试验获得的活疫苗冻干曲线,通过进一步优化,获得疫苗最佳冻干曲线。利用该冻干工艺冻干的疫苗,保护剂的保护率可达95.3%,且疫苗各项指标均达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》要求。经37℃保存7,15,30d病毒滴度分别下降0.46,0.70,1.00;2~8℃保存3,6,12,24个月病毒滴度分别下降0.10,0.10,0.40,0.60,证明此配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。本试验解决了ORFV细胞弱毒疫苗仅能在低温条件下保存和运输的瓶颈技术问题,使疫苗的储存、运输更为方便。     

猪瘟病毒-猪圆环病毒2型疫苗联合免疫效果的评价

为建立一种既有效又简便的猪瘟和猪圆环病毒病疫苗联合免疫方法,通过细胞感染试验和动物免疫试验,评价了猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗和猪瘟病毒(CSFV)冻干活疫苗联合免疫的可行性.通过细胞感染试验证明了PCV2灭活疫苗稀释CSFV冻干活疫苗不影响CSFV疫苗的病毒活性;将PCV2灭活疫苗稀释的CSFV冻干活疫苗免疫试...     

猪瘟无明胶无蛋白耐热活疫苗的研制及冻干工艺

为提高猪瘟(CSF)活疫苗的耐热性能,同时避免明胶和蛋白对猪只产生的免疫副反应,用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、氨基酸等成分设计无明胶无蛋白耐热保护剂,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对猪瘟活疫苗效价的影响。结果表明,猪瘟病毒采用无明胶无蛋白耐热保护剂配方A冻干后具有较好的耐热性能,37℃保存10,15d,病毒的耐热损失分别为0.6lg和0.9lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对猪瘟病毒冻干损失由大到小依次为:退火慢冻快冻,而耐热损失则相反;与传统的含明胶含蛋白耐热疫苗相比,猪瘟无明胶无蛋白耐热疫苗耐热效果更好,可在2~8℃长期保存30个月,动物试验表明该疫苗对猪只安全、无副反应。     

耐热冻干保护剂在兽用冻干活疫苗中的初步研究

耐热冻干保护剂在兽用冻干活疫苗中的研究和应用是当前国内兽用生物制品行业的一个热门话题。耐热冻干保护剂的配制及冻干充分考虑了活疫苗在较高温度和较长保存时间情况下，冻干物质可能发生的物理和化学变化对疫苗存活的影响，因而其保护性能（尤其在较高温度环境里）要比传统保护剂更为优良，使活疫苗在储存、运输、使用等方面更方便，更经济。     

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的研究

通过对不同保护剂基质与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT)相溶性的研究及冻干曲线的优化,成功研制出一种适宜HVT的耐热冻干保护剂。用其与相匹配的48h自然回温冻干曲线冻干的HVT耐热活疫苗,其病毒冻干损失比SPGA常规疫苗减少约50%,在2~8℃条件下可保存24个月,37℃保存10d病毒存活率达50.5%,而SPGA规程苗仅为31.6%。经约50万羽份的田间试验,证明安全有效并显示出良好的耐热性能,达到国外同类产品水平。     

猪瘟活疫苗耐热保护剂冷冻干燥技术研究

摘　要：随着猪瘟活疫苗耐热保护剂的不断应用,冻干技术的要求也越来越高。通过对冻干工艺的不断研究,采取预冻阶段快速和慢速降温,一期升华阶段选取不同温度等方法,筛选一条合适的冻干曲线,不仅缩短冻干时间,降低生产能耗,而且有利产品质量稳定,为今后耐热保护剂的冷冻干燥提供了研究方向。     

禽偏肺病毒病（B亚型）活疫苗（LN16-A株）冻干保护剂筛选和冻干工艺的优化

通过调整蔗糖明胶保护剂中蔗糖和明胶的比例、调整病毒液和冻干保护剂的添加比例,确定蔗糖添加量为40%、明胶添加量为8%配制的保护剂,病毒液与其按7∶1的比例冻干的制品性状较好,病毒含量较高。同时进行了禽偏肺病毒病（B亚型）LN16-A株不同装量最佳冻干曲线优化,对预冻时间、升华阶段（一期干燥）温度和时间、解析干燥（二期干燥）最高许可温度及时间进行了优化,结果表明,1.5 m L/瓶装量的预冻时间2 h、升华温度为5～10℃、升华时间为11 h、干燥温度为30℃维持6 h;2.0 m L/瓶装量的预冻时间h、升华温度为5～10℃、升华时间为14 h、干燥温度为30℃维持6 h;3.0 m L/瓶装量的预冻时间4 h、升华温度为5～10℃、升华时间为17 h、干燥温度为30℃维持6 h,为最优冻干曲线。     

仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗C500株生产工艺的优化

为优化仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗生产工艺,对细菌生长曲线、耐热保护剂和冻干曲线进行了研究,建立了发酵体积1%、2%和3%的二级种子接种量下分别发酵12 h~20 h的细菌生长曲线,检测3个配苗比例、4种耐热保护剂和3条冻干曲线下成品疫苗的冻干菌存率、活菌存活率和安全性,确定了接种3%二级种子液发酵培养17 h为最佳发酵培养条件,发酵菌数达到428×108CFU/m L;最佳配苗比例为菌液︰耐热保护剂1∶1(V∶V),优化保护剂B作为最佳耐热保护剂,设定冻干程序3#作为最佳冻干曲线。基于此,仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗抗原含量达到40头份/瓶,冻干菌存率和活菌存活率均达到95%以上,大幅度降低了猪体免疫副反应,极大提升了疫苗的产品品质。     

耐热冻干保护挤及其在兽用冻干活疫苗中的应用

耐热冻干保护剂的组成和配方对冻干活疫苗的质量起着重要作用。本文对耐热冻干保护剂的种类与组成和在兽用冻干活疫苗中的应用进行了介绍。     

猪伪狂犬病活疫苗（TP株）冻干保护剂筛选和冻干工艺的优化

通过调整蔗糖明胶保护剂中蔗糖和明胶的比例、调整病毒液和冻干保护剂的添加比例,确定蔗糖添加量为40%、明胶添加量为8%配制的保护剂,病毒液与其按8∶1的比例冻干的制品性状较好,病毒含量较高。分别采用速冻法和慢冻法对制品进行冻干,结果表明,速冻法冻干后样品性状较好,病毒含量较高,因此确定采用速冻法对样品进行冻干。对预冻时间、一期干燥第一步干燥温度、干燥时间、加热的最高许可温度及时间进行了优化,结果表明,预冻时间1 h、一期干燥第一步干燥温度为5～10℃、干燥时间为14 h、干燥温度25℃维持4 h,为最优的冻干曲线。     

氮气用于兽用疫苗的保存试验

为达到延长兽用弱毒冻干疫苗保存期的目的,进行了用安瓿分装冻干疫苗并充氮气后熔封的试验。将鸡新城疫低毒力活疫苗和猪瘟活疫苗用安瓿分装冻干,安瓿拉丝灌封机充盈氮气后熔封。同等条件冻干的疫苗,分别对充氮气安瓿和抽真空安瓿进行了病毒含量测定,结果显示：鸡新城疫低毒力活疫苗（La Sota株）25℃放置14 d,检测病毒含量（EID50）,抽真空的安瓿病毒含量为106.545,充氮气的安瓿病毒含量为106.625;2℃～8℃放置17 d,抽真空的安瓿病毒含量107.68,充氮气的安瓿病毒含量107.5。猪瘟活疫苗（Ι）在25℃和37℃最长放置7 d,抽真空和充氮气安瓿均能达到合格的判定标准。说明在较高温度条件下,抽真空与充氮气保存的样品病毒含量基本一致,充氮气对兽用活疫苗冻干保存效果与真空保存的效果基本相同。使用充氮气方法保存疫苗,不仅避开了兽用疫苗管制玻璃瓶由于保存几年后部分胶塞变形造成失真空的问题,而且使用机械对安瓿充氮气和熔封,免去人工熔封安瓿的麻烦。     

氮气用于兽用疫苗制品的保存试验

为达到延长兽用弱毒冻干疫苗保存期的目的,进行了用安瓿分装冻干疫苗并充氮气后熔封的试验.将鸡新城疫低毒力活疫苗和猪瘟活疫苗用安瓿分装冻干,安瓿拉丝灌封机充盈氮气后熔封.同等条件冻干的疫苗,分别对充氮气安瓿和抽真空安瓿进行了病毒含量测定,结果显示:鸡新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)25℃放置14 d,检测病毒含量(EID50),抽真空的安瓿病毒含量为106.545,充氮气的安瓿病毒含量为106.625;2℃～8℃放置17 d,抽真空的安瓿病毒含量107.68,充氮气的安瓿病毒含量107.5.猪瘟活疫苗(Ⅰ)在25℃和37℃最长放置7 d,抽真空和充氮气安瓿均能达到合格的判定标准.说明在较高温度条件下,抽真空与充氮气保存的样品病毒含量基本一致,充氮气对兽用活疫苗冻干保存效果与真空保存的效果基本相同.使用充氮气方法保存疫苗,不仅避开了兽用疫苗管制玻璃瓶由于保存几年后部分胶塞变形造成失真空的问题,而且使用机械对安瓿充氮气和熔封,免去人工熔封安瓿的麻烦.     

动物用冻干活疫苗及其制备工艺

动物冻干活疫苗包括活疫苗抗原和冻干保护剂,冻干保护剂包括防冻剂、抗氧剂和填充剂,防冻剂减少冻干过程中结晶水的形成,抗氧剂减少动物冻干活疫苗贮存过程中的氧化;硫酸软骨素与活疫苗抗原结合保护活疫苗抗原;纤连蛋白连接或包被在活疫苗抗原上,进一步保护活疫苗抗原,达到稳定性好、耐热性好、保存时间长、便于运输和保存的效果.     

鸡传染性支气管炎耐热活疫苗的研究

应用鸡传染性支气管炎病毒(H52株)与不同耐热保护剂配方和冻干曲线进行筛选.结果表明:采用冻干曲线2和耐热保护剂WXS冻干鸡传染性支气管炎病毒H52弱毒疫苗效果最佳.试制耐热活疫苗3批,其各项检验均符合要求.耐老化试验表明:经过37℃放置10d的每羽份病毒含量下降0.6～0.8个滴度,每羽份病毒含量达104.7～105.1EID50.保存期试验表明:2～8℃保存24个月疫苗每羽份病毒含量下降0.4～0.6个滴度,每羽份病毒达104.1～104.3EID50.疫苗2～8 ℃保存24个月后效检抗体水平达到1:16～1:32.免疫持续期试验表明:免疫21日龄SPF鸡,6个月后血清中和抗体效价达到1:32～1:64.田间试验表明临床观察无不良反应,安全有效.特异性试验表明耐热活疫苗抗原性不变.耐热保护剂生物学和理化特性表明保护剂安全、稳定,室温保存期达3个月.     

解析"犬四联"弱毒疫苗质量与最佳冷冻干燥曲线的关系

依据4种病毒生化指标设计了3种不同冻干曲线，配制10批“犬四联”弱毒疫苗分别进行冷冻干燥比较试验。结果表明：采用16h和22h冻干曲线冻干后的疫苗效价比冻干前下降1～2个滴度，抗原损失较大；采用20h冻干曲线冻干后的疫苗效价仅降低0．5个滴度，而且CPV和CPIV的血清抗体滴度(SN)也略高于用前两种冻干曲线冻干的制品，其冻干产品外观优于应用前两种冻干曲线的产品。因此选择总冻干时间20h的冻干曲线为“犬四联疫苗”较理想的冻干曲线。     

布氏菌病活疫苗（Rev.1株）冻干保护剂工艺的研究

布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺借鉴、采纳布氏菌病活疫苗(S2株)成熟的冻干工艺及菌液的配比,对冻干保护剂的选择进行了优化。我们选择蔗糖明胶保护剂和蔗糖脱脂乳保护剂,保护剂与布鲁氏菌Rev.1株菌液以16的比例混合,冻干后测定其活菌含量。结果显示,3批使用蔗糖脱脂乳保护剂的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12×10^9CFUmL、12.44×10^9CFUmL、12.65×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶再加入终浓度约1%硫脲的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.34×10^9CFUmL、12.62×10^9CFUmL、12.91×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.22×10^9CFUmL、12.64×10^9CFUmL、12.8×10^9CFUmL。3种冻干保护剂对冻干疫苗的活菌含量影响无明显差异,但使用蔗糖明胶保护剂制备冻干疫苗时加入适量硫脲可适当增加冻干疫苗的耐热性,因此我们选择10%明胶、20%蔗糖冻干保护剂与菌液以1∶6配比比例混合,再加入终浓度约为1%的硫脲作为布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺。     

羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护剂的筛选优化

旨在筛选出羊传染性脓疱皮炎弱毒苗的最佳耐热保护剂。通过初步筛选,选出符合本试验设计要求的3组保护剂A3、A6、C4,以羊传染性脓疱皮炎弱毒为对象,以保存环境、保存期长短、病毒损失量为参数,采用单因子试验对3组耐热保护剂进行优化,优选出对羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护效果最好、且经济实用的耐热保护剂A6组。试验结果显示,使用A6保护剂的羊传染性脓疱皮炎疫苗在37℃保存3周,病毒含量下降0.4个滴度,常规疫苗下降2.4个滴度;25℃保存60 d,病毒含量下降0.3个滴度,常规疫苗下降2.2个滴度;4℃保存9个月,病毒含量下降0.4个滴度,常规疫苗下降3.8个滴度,说明A6可作为羊传染性脓疱皮炎弱毒苗良好的耐热保护剂。     

鸡痘耐热保护剂活疫苗的研究

选择不同基质组成保护剂与鸡痘抗原进行冻干试验，试制一种适宜鸡痘弱毒株的耐热冻干保护剂。应用耐热冻干保护剂和专用的冻干曲线，制成鸡痘耐热保护剂活疫苗，经37℃保存10d的耐老化试验，每羽份病毒含量下降0．2—0．4个滴度；疫苗在2—8℃保存24个月后，每羽份病毒含量下降0．2-0．4个滴度，且均≥10^3.0EID50／羽，具有良好的热稳定性。19万羽的田间试验证明，鸡痘耐热保护剂活疫苗安全、有效。