皮下注射布氏菌活疫苗免疫持久性观察

以小鼠为动物模型,通过检测皮下注射布氏菌活疫苗后小鼠产生长期的体液免疫、细胞免疫应答及保护力,对其进行免疫学评价。将120只小鼠随机分为3组,皮下注射免疫布氏菌活疫苗,分别在免疫后1,3,6,12个月,采血分离血清及脾脏淋巴细胞。ELISA法检测免疫动物血清中抗Br-PPD Ig G抗体;ELISPOT法检测分泌IFN-γ、IL-4的脾脏淋巴细胞数目,以及用ELISA方法检测体外再刺激后小鼠脾细胞分泌细胞因子水平;用羊布氏菌弱毒株M5攻击免疫动物,通过脾脏细菌计数评价布氏菌活疫苗的免疫保护力。皮下注射免疫布氏菌活疫苗,免疫1,3,6和12个月,均能产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,体液免疫、细胞免疫及保护力呈先增强后减弱趋势,免疫3个月效果最佳。通过皮下注射方式免疫小鼠布氏菌活疫苗显示了很好的免疫原性,免疫后能诱导长期的体液免疫、细胞免疫及保护力。     

应用酶联免疫吸附试验检测牛肺疫血清抗体的研究

本文用普通ELISA和BA--ELISA检测牛肺疫血清抗体并与间接血凝试验和补体结合试验作比较,结果表明阳性检出率BA--ELISA(86.7%,13/15)>普通ELISA(80%,12/15)>间接血凝(53.3%,8/15)>补反试验(40%,6/15)。8种类症鉴别血清中6种呈现ELISA阴性。故认为ELISA是一种特异、敏感、快速、简便的血清学检测牛肺疫的方法,适于在现地检验时应用。     

γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用

【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况,为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查,共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头,阳性检出率分别为1.15％和1.08％,总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测,发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应,且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时,先以变态反应检疫牛群,再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断,更有利于牛结核病的检测与净化。     

玫瑰茄多糖对小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响

玫瑰茄多糖设置低、中、高3个剂量组和1个对照组,给(SPF)小鼠连续灌胃4周,以脾淋巴细胞转化功能、迟发性变态反应(DTH)、溶血空斑数、半数溶血值(HC50)等为指标,观察瑰茄多糖对小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。结果表明:与对照组比较,脾淋巴细胞转化功能、迟发性变态反应(DTH)、溶血空斑数、半数溶血值(HC50)测定实验均有显著提高作用。其中,高剂量组对小鼠迟发型变态反应能力(DTH)影响、半数溶血值(HC50)达到极显著水平(P0.01),高剂量组对小鼠溶血空斑数的影响达到显著水平(P0.05)。说明玫瑰茄多糖具有增强小鼠体液免疫功能和细胞免疫功能的作用。     

蒙药组方“花艽-6”对小鼠特异性免疫功能的影响

目的:本文旨在研究抗类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)蒙药组方(简称花艽-6)对正常小鼠和免疫低下模型小鼠特异性免疫功能的影响.方法:分别利用环磷酰胺( Cyclophosphamide,CTX)、环孢素A(Cyclosporin A,CsA)两种药复制了体液、细胞免疫功能低下的动物模型.采用分光光度法测定血清溶血素HClgM,ELISA法测定血清中抗体水平(IgG、IgM),观察花艽-6对正常鼠和免疫低下鼠体液免疫功能的影响.采用迟发型变态反应法测定小鼠耳壳肿胀度,流式细胞术测定小鼠外周血中T淋巴细胞亚群百分含量,观察花艽-6对正常鼠和免疫低下鼠细胞免疫功能的影响.结果:花艽-6能显著抑制正常小鼠和加强CTX致体液免疫功能低下小鼠血清中抗体水平的含量;能显著抑制正常小鼠的DTH反应并加强CsA对细胞免疫功能低下小鼠的DTH反应的抑制作用,能显著提高正常鼠和CsA致细胞免疫功能低下小鼠外周血CD3+含量,但显著降低CD4+和CD8+及CD4 +/CD8+含量.结论:花艽-6可显著抑制正常鼠和加强CTX致免疫功能低下鼠的体液免疫功能,对正常鼠和CsA致免疫功能低下鼠的细胞免疫功能具有调节作用.     

鹿源牛病毒性腹泻病毒核酸疫苗免疫实验研究

试验应用间接ELISA方法检测鹿源牛病毒性腹泻分离株CCSYD核酸疫苗体液免疫效果,应用淋巴细胞转化实验检测其细胞免疫效果,并与鹿源牛病毒性腹泻分离株CCSYD灭活苗和标准株C24V灭活苗进行比较。结果表明:鹿源牛病毒性腹泻分离株CCSYD核酸疫苗产生了较好的体液和细胞免疫应答,免疫前后免疫应答水平差异均显著(P<0.05)。     

布氏菌活疫苗皮内与皮下接种的免疫效果评价

将布氏减毒活疫苗通过皮内注射和皮下注射方式免疫小鼠,比较2种方式的免疫效果。用布氏菌活疫苗,通过皮内和皮下注射免疫小鼠,免疫4周后分离血清及脾脏淋巴细胞。ELISA法检测免疫动物血清中总IgG抗体;ELISPOT法检测分泌IFN-γ、IL-4的脾脏淋巴细胞数目,同时用ELISA方法检测体外再刺激后小鼠脾细胞分泌IFN-γ、IL-4的水平;用流式细胞仪对T淋巴细胞亚群进行分类;用羊布鲁氏菌弱毒株M5攻击免疫动物,通过脾脏细菌计数评价布氏活疫苗的免疫保护作用。ELISA、ELISPOT和T淋巴细胞亚群分类结果显示,2种免疫途径均能诱导较强的体液免疫和细胞免疫应答,但两者间无显著差异;BALB/c小鼠攻毒试验显示皮内注射组脾脏中布氏菌数量的对数值为0,皮下注射组为2.27±0.21,阴性对照组为5.13±0.16。由此可知,2种免疫方法均能诱导较强的体液免疫和细胞免疫应答,但皮内注射组的免疫保护作用显著优于皮下注射组,提示通过皮内注射布氏疫苗可能是安全、高效的免疫途径。     

抗副溶血弧菌IgY的提纯及检测副溶血弧菌的间接ELISA的建立

分离纯化抗副溶血弧菌IgY,并建立一种快速检测副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附法(indirect ELISA),分析了该方法的敏感性、特异性和重复性. 将水稀释法、乙醇沉淀法和DEAE-Sepharose FF离子交换层析联用以分离纯化抗副溶血弧菌IgY,然后以纯化的IgY为一抗,辣根过氧化物酶标兔抗鸡IgY为二抗,建立检测副溶血弧菌的间接ELISA方法. 结果表明:建立的间接ELISA方法,一抗的最佳工作质量浓度为15 μg/mL,二抗的最佳稀释度为1∶ 10 000,副溶血弧菌培养液的检出限为1.0×105 cfu/mL,该方法对测定的其他8种菌株没有交叉反应. 建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、特异性和稳定性,能够快速、准确地对副溶血弧菌进行检测.     

PRRSV对仔猪免疫力的影响试验

对当前国内的生产实际调查发现,猪繁殖与呼吸综合症病毒和猪瘟病毒双感染的情况越来越多,PRRS病毒感染对于猪瘟疫苗免疫应答的影响将直接关系到临床生产中免疫程序的实施和疾病的控制策略。本文通过MTT、ELISA方法 ,检测人工攻毒后,试验仔猪猪瘟抗体滴度和淋巴细胞转化率的动态变化,从细胞免疫和体液免疫角度探讨PRRSV感染后对仔猪免疫力的影响。     

排除牛结核变态反应中禽结核干扰的研究

以牛型结核菌素和禽型结核菌素对黑龙江省部分地区300头牛进行牛结核病检测,按OIE、中国和欧共体对皮内变态反应判定标准进行结果判定,同时以ELISA方法对牛血清进行检测。不同方法不同标准检测结果的比较分析结果表明:在牛结核的检疫中存在禽结核的干扰,采用牛型结核菌素和禽型结核菌素皮内变态反应结合ELISA方法进行检疫可排除禽结核的干扰。     

BA-Dot-ELISA检测牛结核乳清抗体的研究

本研究建立了快速检测牛乳中结核病抗体的ＢＡ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。用该法检测２８份结核变反阳性牛乳清，阳性率为７８．５７％，比常规ＥＬＩＳＡ（６４．２８％）高。用该法检测布鲁氏菌病牛乳清无交叉反应，但对５份副结核变反阳性牛乳清出现了一定的交叉反应。     

几种牛副结核琼扩抗原的比较

利用免疫学方法制备了牛副结核细胞浆抗原、细胞壁声波粉碎抗原、Sephadex-G200层析抗原和草柱亲和抗原，分别与牛副结核阳性、弱阳性及阴性血清进行琼扩散试验。结果表明：细胞浆抗原、细胞壁超声波粉碎抗原与阳性、弱阳性血清之间，以及层析抗原和草柱亲和抗原与阳性血清之间有沉淀线出现，而其它的均无沉淀线出现。12个月后，重复该试验，结果细胞浆抗原、细胞壁超声波粉碎抗原阳性血清之间有沉淀线出现，而与弱阳性血清之间以及层析抗原和草柱亲和抗原与阳性血清之间均推动了沉淀线。结果显示：细胞浆抗原和细胞壁声波粉碎抗原在用作牛副结核琼护抗原时，优化层析抗原和草柱亲和抗原。     

副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用

从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(100倍)和抗原包被浓度(4.4μg.mL-1),该方法具有较好的特异性和敏感性。     

应用竞争性酶联免疫吸附试验检测鸡产蛋下降综合症抗体

用鸡产蛋下降综合症(Egg Drop Syndrome-76,EDS-76)灭活油佐剂苗,免疫30周龄产蛋鸡,获取高免血清。提取特异性免疫球蛋白后,用辣根过氧化酶标记,制备成酶标抗体,建立了竞争性酶联免疫吸附试验。该法与血凝抑制试验的平行测定的比较结果为,前者的阳性检出率为71.8%,而后者为59.0%,所以前者明显地优于后者。而且该试验敏感性高,特异性强,具有快速、准确的优点,适用于大规模的检测和检疫。     

禽白血病检测方法的建立和比较

提纯的禽成骨髓细胞增生病病毒(AMV)经用吐温-80和乙醚裂解后免疫兔,能获得抗禽白血病病毒(ALV)群特异性(gs)抗原的高特异性抗体,试验结果表明这种抗体能满意和有效地用于各种检测方法中。葡萄球菌 A 蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA),酶联免疫吸附访验(ELISA),免疫酶组化法(IHCA)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)四种方法的比较结果为:PPA-ELISA 的检出率最高,ELISA 的检出率为略低,其次为 IHCA 的检出率,AGP 的敏感性为最低。综合评定为ELISA 是一较为理想和经济的检测方法。广东省部分鸡场抽样检查的结果表明,各鸡场的 gs 抗原的阳性率是很高的,蛋清和胚胎中 gs 抗原的阳性率也很高,显然 ALV 的先天性传递在本病的流行病学中是非常重要的。     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的提纯和鉴定

取抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体．经饱和硫酸铵盐析，透析除盐、葡聚糖凝胶过滤粗提后，经ＤＥＡＥ—２２纤维素离子交换层析，获得纯化的单抗，ＥＬＩＳＡ效价达１０（－６）以上．双向琼扩效价达１：６４以上；抗体回收率达６０％以上；最高浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ．经抗鼠全血清双向琼扩结果证明所提取物为纯一的ＩｇＧ．     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的定量检测

以免抗鼠 IgG 作为抗血清,首先验证了应用单向琼脂扩散法与酶联兔疫测法(ELISA)测定中试样品中抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)单抗浓度的相应关系;以 DEAE 纤维离子交换层析法纯化的鼠 IgG(3.8mg/ml)作标准样品,以单向琼扩法确定中试样品 F.中具有生物活性单抗含量为330uG/ml,并以 F.作为 ELISA 标准样品,作标准曲线,检测不同样品中抗 IBDV 单抗含量皆在50ug/ml(此为1:10稀稀应用的浓度标准值)以上,ELISA 效价皆在10~(-4)以上。证明了我们的中试产品 OD 值在0.050以上,都可以1:10稀释,可靠地投放市场广泛应用。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅲ、二联苗免疫鸭后抗体消长规律的测定

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗免疫不同品种成年鸭后，其血清中抗鸭瘟病毒（DPV）和鸭肝炎病毒（DHV）的ELISA抗体消长规律，从而为临床上合理地应用二联苗提供理论依据．试验结果表明，二联苗免疫鸭后抗体的消长与鸭的免疫力密切相关。并可以通过检测二联苗免疫鸭后的血清中抗DHV和DPV的ELISA抗体滴度来确定种鸭是否要进行加强免疫。当二联苗免疫鸭后血清中抗DHV的ELISA抗体滴度在1：512以下时或抗DPV的ELISA抗体商度在1：64以下时，需要进行DVH或DP的免疫．     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

乳酸菌发酵骨泥后上清液免疫增强作用的研究

本试验通过迟发型变态反应试验(足跖增厚法)、抗体生成细胞的检测(jeme改良玻片法)、小鼠碳廓清试验，观察灌服不同剂量乳酸菌发酵骨泥的上清液后小鼠的反应。结果证明：经乳酸菌发酵鲜骨泥后的上清液可以增强小鼠的迟发型变态反应，增加小鼠的抗体细胞生成数，加强其巨噬细胞吞噬能力。因此，说明此上清液具有增强机体细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能的作用。