几种不同提取方法对小麦叶片总蛋白双向电泳的影响

为探索小麦叶片蛋白质提取的最优方法,以普通小麦品种石4185的叶片为材料,研究了三氯乙酸/丙酮法、裂解液法、尿素/硫脲法、KCl-醋酸铵甲醇法等四种不同蛋白质提取方法对小麦叶片蛋白双向电泳图谱的影响.结果表明,三氯乙酸/丙酮法获得的蛋白点形状规则、清晰,且重复性好;裂解液法拖尾现象较轻,但蛋白点数少且欠清晰,重复性也不如前者;尿素/硫脲法的蛋白点数很少,也较为弥散,且有明显的拖尾现象;KCl-醋酸铵甲醇法使大量蛋白丢失,蛋白点数非常少,且上部竖纹干扰较重.因此,三氯乙酸/丙酮法是提取小麦叶片蛋白的较优方法.     

不同沉淀剂对酚抽法提取植物蛋白质效果比较分析

酚抽法已经逐渐成为植物蛋白质组研究中通用的蛋白质提取方法,但在各种改进酚抽法中,应用到的沉淀试剂各不相同,致使蛋白沉淀得率、纯度和沉淀时间也各异,本研究以热带植物橡胶树叶片、胶乳和海马齿叶片为研究材料,在过饱和硫酸铵甲醇溶液、醋酸氨甲醇溶液和丙酮溶液沉淀剂下对比蛋白提取的效果,通过单向电泳检测、胶图质量分析、质谱鉴定、蛋白沉淀时间和得率比较,发现3种沉淀剂提取的蛋白样品1-DE图谱显示的蛋白条带数量均较多,但醋酸铵沉淀法提取蛋白图谱有条纹不清晰现象。得出结论：丙酮沉淀法对橡胶树叶片和胶乳蛋白质的提取率较高,硫酸铵沉淀法对海马齿叶片蛋白质提取率较高。过饱和硫酸铵甲醇溶液和丙酮沉淀剂提取的蛋白质质量较高,所得蛋白图谱背景清晰,质谱鉴定蛋白质信息量大。研究结果可优化提取高质量植物蛋白质的方法,并有望为顽拗类植物蛋白质组学研究提供参考。     

适用于大豆叶片蛋白质组分析的双向电泳最佳条件研究

针对大豆叶片中蛋白含量较低,含有大量色素、酚类、醌类等次生代谢产物干扰蛋白质双向电泳分离效果的问题,以大豆叶片为材料,对样品制备、蛋白质裂解液组分、等电聚焦(IEF)参数等条件进行研究.结果表明:采用TCA/丙酮法提取大豆叶片总蛋白,裂解缓冲液为9 mol·L-1尿素,2 mol·L-1硫脲,4%CHAPS.100 mmol·L-1DTT,0.5%Bio-Lyte,IEF等电聚焦条件为24 000Vh时,2-DE图谱分离到的蛋白点效果最好.初步建立了一套适用于大豆叶片蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)体系.     

适于蛋白质组研究的大豆种子蛋白双向电泳技术的改进

以大豆种子为材料,通过对样品制备、电泳条件以及染色方法等关键步骤进行改进,在大豆种子蛋白分析研究中获得了质量较高的双向电泳图谱,为大豆种子蛋白质组研究提供一较好的实验方法.     

茶树蛋白质双向电泳样品制备技术研究

为探索一种适用于茶树蛋白质双向电泳的样品制备方法,研究比较了TCA/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl抽提法,以及酚-甲醇/醋酸铵沉淀法3种植物蛋白质样品制备方法。结果表明,改良的Tris-HCl抽提法较适合于茶树蛋白质双向电泳的样品制备。该改良方法制备的茶树蛋白质样品经双向电泳分离,可获得1117±9.89个蛋白质点,其中大部分蛋白质的等电点集中在pI5~7之间,相对分子质量集中在15.00~95.00kD之间,背景清晰且蛋白质得率较高,能满足茶树蛋白质组学研究的需要。     

利用Native-PAGE鉴定大豆Lox同工酶

以Lox缺失体五星1号、3号、4号和非缺失类型大豆中黄13种子为材料,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE),通过改变分离胶浓度、电泳电压、样品浓度、电泳时间和染色方法等,探索大豆Lox同工酶电泳最佳条件。结果表明:浓缩胶浓度5%,分离胶浓度13%,浓缩胶电泳电压90 V、分离胶电泳电压190 V,样品浓度40%,电泳时间7 h,采用pH8.0、pH6.5两种不同的酶染液结合热考马斯亮蓝染色,4种Lox同工酶(Lox1、Lox2、Lox3a和Lox3b)的分辨清晰度最高。该方法简便安全、经济有效,可用于大豆种质资源Lox缺失体的筛选鉴定。     

复硝酚钠及其组分对大豆种子萌发的影响

采用复硝酚钠及其有效组分邻硝基苯酚钠、对硝基苯酚钠和5-硝基愈创木酚钠对大豆浸种,通过研究发芽第1、3、5、7 天的大豆种子蛋白质含量、脂肪含量、可溶性糖含量和种子发芽情况,探讨复硝酚钠及其组分对大豆种子萌发的影响.结果表明:5 mg·L-1的5-硝基愈创木酚钠和10 mg·L-1复硝酚钠浸种均使大豆的芽重、发芽势、发芽率、发芽指数和种子活力增加,达到了5%的显著水平.同时使种子中的储藏蛋白质从第3天分解加速,脂肪的转化速率从第5天明显加快,可溶性糖含量始终低于其它处理.以上结果表明,5-硝基愈创木酚钠在大豆种子萌发中起主要作用.     

油菜种子蛋白质提取方法研究

通过对比改进的Tris-HCl法、酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法、TCA/丙酮沉淀法和DTT/丙酮法4种方法提取油菜未成熟种子蛋白质,以期找到合适的蛋白质提取方法。结果表明,TCA/丙酮沉淀法和DTT/丙酮法所得蛋白质沉淀较多,颜色亮白,效果较好。进一步通过定量分析及双向电泳图谱的比较分析表明,TCA/丙酮沉淀法在2-DE图谱上蛋白质点较多,分布均匀,图像清晰,而DTT/丙酮法相对于本实验中TCA/丙酮法检测到较少的蛋白质点外,2-DE图谱上有明显的纵条纹。因此TCA/丙酮沉淀法为提取油菜种子中蛋白质的最优方法。     

品种登记中普通小麦品种的麦胶蛋白电泳图谱及其对小麦品种鉴定的检索表

导言小麦品种有时可根据籽粒的形态特征进行鉴定.但是,许多品种的质量属性难以辨别.电泳便是解决这一问题的一种方法.采用电泳方法进行品种鉴定是以麦胶蛋白的分析为基础的.麦胶蛋白是醇溶蛋白质的一个异质组,大约占小麦种子贮藏蛋白质的一半.电泳分析,首先要用乙醇将麦胶蛋白从种子或面粉中提取出来,并将提取物纯化,然后将提取液置于聚丙烯酰胺凝胶上,电流通过凝胶即可使麦胶蛋白分离,形成一系列条带.在电泳所用的     

玉米蛋白质凝胶电泳中易出现的问题分析

玉米盐溶蛋白电泳法是快速鉴定玉米种子纯度的一种方法。其原理是从玉米种子中提取盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下．得到良好的分离．通过染色显示蛋白质谱带类型。不同玉米品种,由于遗传组成的不同,种子内所含的蛋白质种类有差异．这种差异可利用电泳图谱加以鉴别．     

A chromatographic survey of methods for extracting long‐chain grass fructans

To optimize yields of long‐chain fructans extracted from herbage, fructan concentrations and chromatographic profiles were compared in four cool‐season grasses extracted by different methods. In a preliminary study, extraction temperatures, pH prior to extract concentration, numbers of extractions, and tissue coarseness were varied to evaluate their effects on chromatographic profiles and quantities of total long‐chain fructan (degree of polymerization (DP) of ～7 or higher). Fructans were separated by anion‐exchange high‐performance liquid chromatography (HPLC) with pulsed amperometric detection (PAD). The identity of the putative fructan peaks was confirmed by acid hydrolysis of fructans to fructose. Tall fescue and bluegrass fructans were below the detection limits used in this study. Pooled timothy and cocksfoot data indicated that two or three extractions at the same temperature yielded similar amounts of fructans and that adjusting pH from 6 to 7 did not affect recovery. Replicated extractions of cocksfoot by four methods chosen from the preliminary study demonstrated that the least fructan was extracted from chopped cocksfoot at ambient temperature (P = 0·019). One C₁₈ solid‐phase extraction cleanup step sufficed for analysis. The extraction method recommended is two boiling water extractions of either chopped or ground material. However, ground material extracted at ambient temperature is comparable in total fructan concentration and maximum DP.     

不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较

从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA.     

云南省适宜与玉米间作大豆品种的筛选与鉴定

为了筛选和鉴定适宜云南省与玉米间作的大豆品种,本研究在玉米与大豆间作条件下,采用灰色关联度和系统聚类分析方法对44个大豆品种(系)的10个农艺及产量性状进行综合分析及评价。结果表明:参试品种各性状的变异系数的变异范围为7.3%~51.2%,说明各地大豆资源的表型多样性比较丰富。灰色关联分析表明影响间作大豆产量的性状依次为单株粒数、主茎节数、百粒重、单株荚数、分枝数、倒伏性、株高、节间长度、每荚粒数。利用系统聚类法将44个大豆品种分为了3大类,各类群性状之间的差异较明显,其中单株荚多、单株粒多、分枝多、百粒重适中的第一类是比较适宜与玉米间作的大豆品种(系)。     

醋制对黑豆蛋白含量及多肽ACE抑制活性的影响

为考察醋制对黑豆蛋白含量及多肽ACE抑制活性的影响,为对黑豆醋浸过程中蛋白组分及含量变化进行分析,并对相应ACE抑制肽活性进行测定。黑豆经醋浸不同时间后,采用顺序抽提法提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,并采用凯氏定氮法及SDS-PAGE电泳进行定量和定性分析;各蛋白组分经胃蛋白酶水解,经超滤(截留分子量3 k D)后收集滤液,获得多肽组分,RP-HPLC法进行ACE抑制活性评价。结果表明:经醋浸14 d后,黑豆总蛋白含量变化幅度小于±0.5%;清蛋白含量由55.13%(0 d)降低至9.61%(14 d);球蛋白由7.04%(0 d)增加到20.34%(14 d);醇溶蛋白由0.81%(0 d)增加到1.72(14 d);谷蛋白由21.11%(0 d)增加到59.45%(14 d),含量最高。醋浸处理降低了清蛋白源多肽的ACE抑制活性,但提高了球蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白多肽的ACE抑制活性,其中,谷蛋白多肽抑制率由18.18%(0 d)增加至37.58%(14 d),抑制活性升高。醋浸可改变黑豆各蛋白组分的含量和对应多肽的ACE抑制活性,其中,谷蛋白含量及其多肽ACE抑制活性均有增加。研究结果表明可进一步采用分离纯化技术从谷蛋白多肽中获得高活性降压肽。     

Development and validation of a GC–MS method for soybean organ-specific metabolomics

Field mold (FM) can easily deteriorate the preharvest soybean in the field, and Fusarium moniliforme is demonstrated as the dominant pathogenic fungi. Metabolomics is a powerful tool to reveal the resistance mechanism in response to microbial infection. Therefore, in this research, the Design of Experiment (DOE) model was developed to optimize the extraction solvent combinations for metabolomic study of soybean seed and pod based on gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS). Combined with the number of extracted peaks and the peak area of common substances, the extraction efficiency of different solvent was analyzed by multivariate statistical analysis. The result showed that isopropanol/water/methanol (1:1:1 and 1:1:4, v/v/v) mixture was highly efficient for metabolites extractions of soybean seed and pod, respectively. Additionally, the potential metabolites and pathways concerned in FM resistance were explored by the optimized extraction solvent system based on metabolomics analysis. Amino acid metabolism in soybean seed was disturbed by F. moniliforme and metabolic pathways related to energy conversion in soybean pod strongly responded to fungal infection. This study constructs a GC–MS-based metabonomic method for soybean metabolites; comparative analysis of organ-specific metabolomics for soybean fruit could be further applied in soybean metabolomics researches.     

大豆、花生及粮油中56种农药残留量的检测方法

为研究高油脂植物源性样品粮谷和粮油中的农药残留量,本研究建立了气相色谱/串联三重四级杆质谱法(GC/MS/MS)能够快速、简单、同时测定大豆、花生及其粮油中56种农药残留,并对MS/MS检测参数及样品前处理方式进行了优化。样品经乙腈提取后,冷冻、离心,串联C18/PSA固相萃取柱净化,采用气相色谱/串联三重四级杆质谱仪检测,56种农药在线性范围内均呈现良好的线性关系,线性系数大于0.99。本检测方法的检出限(LOD)为0.001~0.005 mg·kg~(-1),方法验证试验结果表明,该类化合物的平均回收率为62%~116%,相对标准偏差(RSD)为0.82%~14.5%。本方法重现性好,精密度高,操作简单,适用于大豆、花生及其粮油类高油脂植物源性食品中多种农药残留的检测。     

Extraction and characterization of water-extractable and water-unextractable arabinoxylans from spelt bran: Study of the hydrolysis conditions for monosaccharides analysis

Monosaccharide analyses were performed, statistically treated and adopted for spelt bran fractions; with regard to the arabinoxylan content. The AX content of the initial spelt bran reached 9.2% with an A/X ratio of 0.39. The initial spelt bran was rich in starch (41.2%) and protein (18.9%). WE- and WU-AXs from micronised spelt bran were extracted after improved enzymic destarching and deproteinisation treatments. WU-AXs were obtained by two successive extractions with 2% alkaline hydrogen peroxide at 60 °C during 4 h. 55% of the AX present in spelt bran was extracted by using the three extraction steps (WE- and WU-AXs), among AX, 13% were WE and 87% were WU. A/X ratios were different depending on the extraction process. WE-AXs were less rich in arabinose than WU-AXs. Each fraction contained two populations of AX. The first one consisted of low MW AX (7–8 kDa). The second population had a higher MW, 310–415 kDa for WU-AXs and 28 kDa for WE-AXs. The extracts had to be purified in order to improve the AX content. Results were compared to those obtained with wheat bran in the literature. This research was, to the best of our knowledge, the first study on AX extraction from spelt bran.     

橡胶林土壤微生物2种DNA提取方法的比较

比较了橡胶林土壤微生物CTAB-SDS提取法和SDS提取法的效果。结果表明,2种提取方法均获得约 23.1kb的DNA片段,2种提取方法在颜色、提取量和纯度上存在较大差异。CTAB-SDS提取法提取DNA的纯度较好,不需要纯化可以直接用于PCR扩增、酶切等后续操作;SDS提取法提取的纯度低,不能直接用于PCR扩增。2种方法都适合橡胶林土壤DNA的提取,如果要求获得纯度高的DNA,CTAB-SDS提取法是最佳选择。橡胶林土壤微生物DNA的提取,推荐使用CTAB-SDS提取法。