检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１∶２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法——阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）。利用该法,血清样品只需作１∶２００倍稀释,测定其Ｐ／Ｎ值,通过回归方程（或标准曲线）即可求得ＥＴ．     

应用ABC－ELISA和SPA－ELISA检测狂犬病疫苗免疫犬后血清中的抗体水平

本文报道应用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ和ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测狂犬病疫苗免疫犬后血清中抗体的效价，比较研究了两种方法的特异性，敏感性和重复性，结果显示两种方法均适用于检测狂犬病血清抗体水平。ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ较ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ敏感性高４倍，前者的阳性检出率（１００％）高于后者（９２．８％）。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在FLISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在ELISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射，肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６），在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或２μｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密     

抗鸡IgC单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用纯化鸡血清ＩｇＣ免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，用ＥＬＩＳＡ间接法和夹心法作阳性抗体检测，经有限稀释法克隆，结果筛选出１株可持续分泌抗鸡ＩｇＣ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株３Ｅ３，其培养上清和诱生Ｂｌａｂ／ｃ小鼠腹水的ＭｃＡｂ效价分别为１：４×１０＾２－１．２８×１０＾４和１：８×１０＾５－１×１０＾１０，经染色体分析可见到两种形态的染色体，该细胞株经体连续     

抗原捕捉间接ELISA检测IBDV—vero细胞毒方法的建立

建立了检测用ｖｅｒｏ细胞增殖ＩＢＤＶＸ,Ｎ毒滴度的抗原捕卟间接ＥＬＩＳＡ法,并与常规ＴＣＩＤ５０测定法作了比较,结果表明,ＡＣＩ－ＥＬＩＳＡ法测定的Ｐ／Ｎ值与ＴＣＩＤ５０呈明显的正相关,与Ｘ,Ｎ毒的相关系数分别为０．９６６８,０．９３８。ＡＣＩ－ＥＬＩＳＡ法可用于ＩＢＤＶ－ｖｅｒｏ细胞毒的定量监测     

用双夹心法ELISA检测兔轮状病毒的研究

建立了检测兔轮状病毒抗原的夹心法ＥＬＩＳＡ（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ）。用此法检测了６７份兔腹泻粪便样品和腹泻死亡兔肠内容物样品。轮状病毒（ＲＶ）阳性检出率（３１．３４％）明显高于双抗体夹心法ＥＬＳＡ（２５．３７％）和对流免疫电泳（１６．４１％）。经阻断试验和重复性试验，证明了ＤＳ－ＥＬＩＳＡ具有特异性强和重复性好等优点。     

胰岛素样生长因子-1的放射免疫测定方法的建立

胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）分别与两种载体蛋白——牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和卵清蛋白（ＯＡ）用戊二醛连接,经紫外分光光度仪扫描确定偶联成功。以ＩＧＦ－１－ＢＳＡ作为免疫原,皮内多点注射免疫青紫兰兔,制备ＩＧＦ－１抗体,经ＥＬＩＳＡ法测定,血清效价为１∶２０００,放免工作浓度为１∶１５０００。采用氯胺－Ｔ标记ＩＧＦ－１,用酸醇抽提法处理样品,去除ＩＧＦ－１结合蛋白。所建立的ＩＧＦ－１放免标准曲线,其最小检测量为０．０６ｎｇ／ｍＬ,批内误差为４．８％,批间误差为８．２％（ｎ＝１０）。     

用SPA—ELISA检测牛结核乳清抗体的研究

从用牛ＰＰＤ皮试阳性奶牛中采取１８头份牛乳，不稀释，做ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测，进行了ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ条件优选工作，建立了检测牛乳清中结核抗体的ＥＬＩＳＡ工作程序。检测结果表明：１８份ＰＰＤ皮试阳性牛乳，经ＳＰＡ－ＥＳＩＳＡ检测阳性为１５份，阴性为３份，结果附合率为８３．３３％。     

应用ELISA检测鸭抗多杀性巴氏杆菌抗体的动态变化

应用ＥＬＩＳＡ间接法检测鸭抗多杀性巴氏杆菌抗体，具有快速及特异的优点。鸭免疫禽霍乱疫苗１周后，抗体滴度开始上升，４周后达到高峰。用巴氏杆菌Ｃ４８－１攻击不同抗体滴度的鸭只，抗体滴度为１：４００时，保护率为９０％，抗体滴度下降时，攻毒保护率也随即降低。     

葡萄扇叶病毒的ELISA检测技术

本文是关于葡萄扇叶病毒ＥＬＩＳＡ检测技术的报告。采用Ｌ．ｐｉｎｋ的方法提纯病毒，制备了兔抗血清和小鼠腹水抗体，效价分别达１：５１２００和１：５×１０￣６，特异性较强。经间接双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＧＦＶ提纯病毒最低浓度为３ｎｇ／ｍｌ。对葡萄的根、幼叶和嫩茎抽提液检测结果一致，稀释倍数１：２０。     

珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用

本试验经培养特性,形态特征,红细胞吸附试验和生长抑制试验等从８株珍禽霉形体中筛选出１株具有代表性的菌株ＭＧ－Ｐ,将ＭＧ－Ｐ和标准株ＭＧ－Ｓ０分别建立了ＨＩ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验,检测了３批１２０份共１００种珍禽动物的血清样本,ＭＧ－Ｐ的阳性检出率为ＨＩ１４．２％（１７／２０）,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ１６．７％（２０－１２０）,两法阳性符合率为８５％（１７／２０）;ＭＧ－Ｓ０的阳性检出率为ＨＩ９．２％     

草莓伪温和黄边病毒抗血清制备及血清学检测技术研究

将提纯的草莓伪温和黄边病毒（ＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｓｅｕｄｏｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓＳＰＭＹＥＶ）作抗原免疫家兔，获得效价较高的抗血清，经ＳＤＳ－对流免疫电泳测其效价为１：１２８．四点疫吸附固定法检测ＳＰＭＹＥＶ效果甚理想，可检测到微量病素，提纯病毒浓度低至０．０５μｇ／ｍｌ仍有效果．酶联免疫吸附测定法检出灵敏度也相当高，当病毒浓度为０．１μｇ／ｍｌ时及病叶汁液稀释至１０２４倍时，仍呈阳性反应．免疫电镜技术检视，ＳＰＭＹＥＶ抗血清能清晰地”捕获”同源病毒，并且有装饰作用，抗血清以稀释为１：５００时“捕获”病毒粒子最多．     

乙肝表面抗原与促黄体激素释放激素的融合基因5''''端改造及其在大肠杆菌中的表达

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５′端分别作了改造，切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基，将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ１１ＫＳ＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中，经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ３中表达，表达量占菌体总蛋白的１０％，以兔抗ＬＨＲＨ抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，出现阳性反应带。用抗ＨＢｓＡｇ抗体作ＥＬＩＳＡ检测，结果稀释１×１０－６时仍为阳性反应。     

嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究

用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过一次性杂交瘤融合，在筛选ＨＥＣ毒素单克隆抗体（ＭｃＡｂ１）的同时，用兔抗ＨＥＣ毒素血清（ＰＡｂ）包板的ＥＬＩＳＡ方法，筛选到两株抗ＨＥＣ毒素的单克隆抗独特型抗体（ＭｃＡｂ２）。两株ＭｃＡｂ２腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：２０４８０和１：５１２０，属于ＩｇＧ１亚类。ＨＥＣ毒素的模拟抗原ＭｃＡｂ２不能溶解人的Ｏ型红细胞，但能与相应的ＰＡｂ反应，并能阻断ＰＡｂ与ＨＥＣ毒素的结合。将ＭｃＡｂ２连接到同源小鼠红细胞（ＭＲＢＣ）后免疫小鼠，用ＨＥＣ毒素包板的ＥＬＩＳＡ检测其血清，呈阳性结果，说明ＭｃＡｂ２能模拟ＨＥＣ刺激机体产生抗ＨＥＣ毒素的抗体（Ａｂ３）。     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的提纯和鉴定

取抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体．经饱和硫酸铵盐析，透析除盐、葡聚糖凝胶过滤粗提后，经ＤＥＡＥ—２２纤维素离子交换层析，获得纯化的单抗，ＥＬＩＳＡ效价达１０（－６）以上．双向琼扩效价达１：６４以上；抗体回收率达６０％以上；最高浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ．经抗鼠全血清双向琼扩结果证明所提取物为纯一的ＩｇＧ．     

苹果潜隐病毒快速检测

该文以优系短枝富士为主要试材，采用木本指示植物和间接酶联免疫（ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ）两种方法，对苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）、苹果茎沟病毒（ＳＧＶ）和苹果茎痘病毒（ＳＰＶ）进行了检测．试验表明，俄罗斯苹果Ｒ１２７４０－７Ａ、司派２２７和弗吉尼亚小苹果３种指示植物可作为上述３种潜在病毒的鉴定植物．植物生长状况对鉴定结果有重大影响．间接酶联免疫检测速度快，准确度高．该试验所用最佳抗体工作浓度ＣＬＳＶ：第一抗体１／６０００，第二抗体１／２０００；ＳＧＶ：第一抗体１／５０００，第二抗体１／３０００．     

应用斑点酶联法检测柑桔溃疡病菌

用浓度为１０＾８ｃｆｕ／ｍｌ，Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ全胞活菌免疫家兔，得以效价为１／２５６０～１／１０２４０的抗血清，应用斑点酶联法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ表明，抗血清经交叉吸收后特异性高，适宜稀释倍数为１：１０＾４～１０＾６，检测灵敏度度要达１０＾４ｃｕｆ／ｍｌ。加有０．５％Ｔｗｅｅｎ２０或０．５％Ｔｗｅｅｎ８０或０．１％ｔｒｉｔｏｎＸ－１００的ＴＢＳ液为适宜封闭液，     

急性脑梗塞与血清白细胞介素—6关系的初步探讨

用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法对４６例急性脑梗塞患者血清ＩＬ－６含量作了检测，结果显示：脑梗塞急性期和恢复期两组均明显高于健康人对照组（Ｐ＜０．００５，Ｐ＜０．０１）；恢复期组略低于急性期组，但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。急性期血清ＩＬ－６含量与脑梗塞估测体积呈正相关关系（ｒ＝０．６４，Ｐ＜０．０５），而与脑梗塞发生部位无关。脑梗塞体积越大，血清ＩＬ－６值越大，提示血清ＩＬ－６含量的测定可能作为早期判断急性脑梗塞脑损害程度的指标。     

用ELISA法检测烟草种子带有赤星病菌（Alternariaalternata）的…

用烟草赤星病菌的悬浮液免疫家兔，得到效价为１：６４０的抗血清，按硫酸铵沉淀法和ＤＥＡＥ纤维素离子交换柱层析法提取抗体球蛋白ＩｇＧ，用ＥＬＩＳＡ间接法进行试验，结果表明：辣根过氧化物酶标记羊抗兔结合物的最适稀释度为１：１００，最适抗体球蛋白ＩｇＧ的浓度为Ｒ－６μｇ／ｍＬ。