卡介菌多糖核酸体外抗病毒活性试验

为探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)的抗病毒效果,对离体培养的鸡胚成纤维(CEF)细胞进行水疱口炎病毒(VSV)感染,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BCG-PSN对CEF细胞活性的影响;用细胞病变法(CPE)检测BCG-PSN对VSV的抑制作用,并在安全浓度范围内筛选BCG-PSN抑制VSV的最佳作用时间和作用剂量。试验结果表明:BCG-PSN能显著抑制VSV在CEF细胞上的生长,但抑制作用并非随着其剂量的增加和作用时间的延长而增强,质量浓度为144.0μg/mL的BCG-PSN在CEF细胞上作用24 h后,产生的抗病毒活性最强;当BCG-PSN质量浓度大于800μg/mL时则对CEF细胞具有明显的毒性作用。BCG-PSN可诱导CEF细胞产生IFN-α和IFN-β,研究结果显示:BCG-PSN的抗病毒作用与其诱导的干扰素有关。     

硫酸化黄芪多糖对CEF生长及抵抗IBDV感染的影响

采取一步醇沉和分步醇沉法提取4种黄芪多糖APS,、APS10、APS50和APS50,用氯磺酸-吡啶法进行硫酸化修饰,得到4种硫酸化黄芪多糖(sAPS) sAPSt、sAPS40、sAPS50和sAPS60,用MTT法比较了4种硫酸化黄芪多糖对鸩胚成纤维细胞(CEF) 的生长及抵抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV) 感染的影响,以末修饰的APSt为对照.结果显示,APS1显著促进CEF生长,细胞毒性较低,但抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染细胞的作用较弱;sAPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染的作用显著增强,显效浓度降低,但安全浓度也降低.表明通过硫酸化修饰可以提高黄芪多糖的抗病毒活性,但高浓度sAPS的细胞毒性增强.     

长春碱纳米粒的细胞毒性和急性毒性研究

【目的】探讨长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(VLB-PBCA-NP)对正常细胞的毒性及其急性毒性。【方法】采用MTT法并结合形态学观察,比较了VLB-PBCA-NP和VLB原料药对原代大鼠星形胶质细胞和小鼠成纤维细胞L929的毒性;用相同剂量的VLB-PBCA-NP和VLB原料药溶液对小鼠进行尾静脉注射,每日观察小鼠死亡情况,并计算半数致死量(LD50)。【结果】在质量浓度为0.5~50 ng/mL时,VLB-PBCA-NP和VLB原料药对星形胶质细胞增殖抑制率的影响无显著性差异,当质量浓度达到500和5000 ng/mL时,VLB-PBCA-NP对大鼠星形胶质细胞的毒性显著低于VLB原料药(P<0.05)。5000 ng/mL的VLB-PBCA-NP对小鼠成纤维细胞L929的毒性为3级,极显著降低了VLB原料药的毒性(P<0.01)。VLB-PBCA-NP和VLB原料药的LD50分别为26.38和22.7mg/kg,前者较后者提高了16.21%。【结论】VLB-PBCA-NP对小鼠的急性毒性和对非肿瘤细胞的毒性均显著低于VLB原料药。     

羊软骨II型胶原蛋白对鸡胚成纤维细胞生长的影响

采用体外细胞培养检测自制羊软骨II型胶原蛋白(Type II collagen from sheep,CII)的细胞毒性,将材料与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,观察其对生长的影响,确定鸡胚成纤维细胞对羊软骨CII的最大安全浓度,以及在安全浓度范围内有效促进鸡胚成纤维细胞生长的浓度。结果显示,羊软骨CII对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为400μg/mL,当羊软骨CII浓度在25μg/mL时,可以极显著的促进鸡胚成纤维细胞的生长。     

转化型桔梗皂甙抗IBDV、AIV和NDV的研究

为探索中药桔梗的主要活性成分桔梗总皂甙及其转化型桔梗皂甙的生物学活性和抗IBDV、A IV(H9)、NDV的作用,采用M TT法和间接免疫荧光检测试验,分别研究桔梗总皂甙与转化型桔梗皂甙的细胞毒性、对CEF生长和活性的影响以及抗病毒活性。结果表明:桔梗总皂甙和转化型桔梗皂甙对细胞毒性作用的IC50分别为128.74和53.48μg.mL-1,对CEF细胞生长和活性具有最大促进作用的浓度分别为80和25μg.mL-1。桔梗总皂甙阻断IBDV、A IV(H9)、NDV感染CEF细胞的作用分别为66.3%、55.4%和36.9%,抑制三者增殖的作用分别为69.4%、60.8%和26.2%;转化型桔梗皂甙阻断三者感染CEF细胞的作用分别为84.7%、63.5%和45.5%,抑制三者增殖的作用分别为77.8%、63.5%和41.9%,表明桔梗总皂甙经化学处理转变成转化型桔梗皂甙,可明显提高其生物学活性和抗病毒用。     

几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响

为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。     

紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞体系中安全浓度的测定

采用体外细胞培养法,将紫苏叶注射液与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,测定紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞培养体系中的最大安全浓度,检测紫苏叶注射液的细胞毒性。结果表明,紫苏叶注射液对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为488.281μg/mL。     

人参水溶性蛋白对几种细胞增殖的影响

采用缓冲液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性蛋白,以MTT法检测其对非洲绿猴肾细胞Vero、小鼠成纤维细胞L929及人胚肺二倍体细胞2BS增殖的影响.结果表明:人参水溶性蛋白对Vero细胞增殖具有明显的抑制作用;在低浓度时,对L929细胞增殖具有一定促进作用,其中1μg/mL促进作用最明显(P＜0.001),但当蛋白质浓度达到500μg/mL时,则具有抑制作用(P＜0.01);对2BS细胞增殖无明显影响.     

茶树油及其主要组分对树突状细胞体外生长的影响

研究了茶树油及其组分干预树突状细胞后,采用MTT法检测药物对树突状细胞活力的抑制,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,以探讨茶树油及其主要组分对小鼠骨髓来源树突状细胞体外生长的影响。结果表明:茶树油、Terpin-4-ol、1.8-Cineole和Terpinolene在实验浓度范围内(0.002～1.000μL/mL)对树突状细胞活力均有不同程度的抑制,抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系,其中,茶树油对树突状细胞活力抑制率为25.60%(1.000μL/mL),而同等浓度下的Terpinene-4-ol抑制率为97.20%(P<0.01),表明Terpinene-4-ol对树突状细胞有较强的细胞毒性;结果还表明,在进行茶树油对树突状细胞活性评价研究时,应控制安全实验浓度在0.310μL/mL以下。     

不同染发膏对蚕豆根尖细胞的遗传毒性效应

为了考察染发膏对蚕豆(Vicia faba L.)根尖细胞的遗传毒性效应,用不同浓度的3种不同品牌染发膏(T、S、H)毒染蚕豆根尖细胞,测定其微核率和染色体畸变率,并计算微核指数。结果表明,在一定浓度范围内,3种染发膏浓度与微核率都具有明显的剂量-效应关系,在高于一定浓度后微核率均呈下降趋势,其最大微核率对应的浓度依次为0.10 g/L(T染发膏)、1.00 g/L(S染发膏)、4.00 g/L(H染发膏)。说明3种染发膏均有一定诱变作用和遗传毒性,且3种染发膏染色体畸变率与微核率均呈正相关。     

氯化镉对不同倍性泥鳅鳍细胞系的毒性效应

旨在研究不同浓度氯化镉对60~80 代二倍体和三倍体泥鳅鳍细胞系（DIMF和TRMF）的毒性效应,比较不同倍性细胞系间的敏感性差异。采用MTT比色法测定半致死浓度,采用酶活力测定法、微核试验和实时定量PCR法测定了氯化镉对2 种细胞系的细胞毒性和遗传毒性。结果表明：氯化镉处理下DIMF、TRMF细胞系半致死浓度分别为(24.0±0.7)、(27.3±1.3) μmol/L。2 种细胞系的SOD、GSH-Px活性随着氯化镉浓度的增加,呈现先升高后降低的趋势,而GST活性则表现为逐渐降低。随着氯化镉浓度的增加微核率先升高后降低,DIMF、TRMF最大微核率分别为(7.33±0.33)‰、(8.33±0.67)‰。经氯化镉处理的细胞金属硫蛋白(MT)表达量显著增加,30 μmol/L 浓度组表达量最大,分别为对照组的55.6 和57.6 倍。研究表明,氯化镉对泥鳅二倍体和三倍体细胞系具有细胞毒性和遗传毒性,且二倍体细胞系较三倍体细胞系对氯化镉更为敏感。     

葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性研究

[目的]研究葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性。[方法]采用二甲基四氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,形态学法观察凋亡的特征性变化,AnnexinV/PI双染及PI单染流式细胞术法检测凋亡率。[结果]经不同浓度提取物作用后,HepG2细胞的生长受到显著抑制,并呈现时间-浓度依赖关系趋势。观察细胞形态,发现有凋亡特征性变化。AnnexinV/PI双染结果显示,癌细胞早期凋亡率随提取物浓度的升高而显著增高,最高可达79.2%。PI法同样显示凋亡的发生,其凋亡峰最大比率为9.6%,显著高于对照组。[结论]葛仙米甲醇提取物能够诱导肝癌细胞HepG2的凋亡。     

蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测

[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。     

16种四川道地药材对鸡胚成纤维细胞生长的影响

该实验通过MTT法观察丹参、川木香、菊花、川郁金、川黄柏、川佛手、川牛膝、川莪术、川明参、川续断、川麦冬、川白芷、川芎、杜仲、川党参和乌梅等16种四川产道地药材对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全体积质量分数,并观察各种中药提取液对CEF增殖的影响.结果表明以上各种药材的最大安全体积质量分数:川黄柏为3.907mg/L,丹参、川木香、川续断和川党参均为7.813mg/L,菊花为15.625mg/L,杜仲、川佛手、川麦冬、川芎和白芷均为31.25mg/L,川郁金、杜仲、川乌梅和川牛膝均为62.5mg/L,川明参为1 000mg/L.当川郁金在1.954～31.25mg/L,川牛膝在3.907～31.25mg/L,川明参在1.954～500mg/L,川续断在1.954～3.907mg/L,川麦冬在1.954～15.625mg/L,杜仲在1.954～31.25mg/L的体积质量分数范围内可显著促进细胞生长.     

红景天多糖体外抑制IBDV感染CEF活性试验

[目的]探讨红景天多糖（Rhodiola sachalinensis polysaccaride,RSP）体外抑制鸡传染性法氏囊病毒（Infectious brusal disease virus,IBDV）感染鸡胚成纤维细胞（Chick Embryo Fibroblast,CEF）活性,为筛选抗IBDV活性物质奠定基础。[方法]采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测RSP对IBDV感染CEF的抑制作用。[结果]RSP抑制IBDV感染CEF的半数抑制浓度（50%concentration of inhibition,IC50）为0.38 mg/ml,治疗指数（Treatment Index,TI）为4.34。[结论]红景天多糖体外有较显著的抑制IBDV感染CEF活性。     

"病毒克"颗粒剂对NDV在鸡胚成纤维细胞中增殖的影响

为评价中药“病毒克”颗粒剂体外抗新城疫病毒(NDV)的活性,采用细胞培养技术,通过细胞病变抑制法和MTT比色法检测“病毒克”颗粒剂在鸡胚成纤维细胞(CEF)中对新城疫病毒增殖的影响。结果表明“病毒克”颗粒剂对CEF的半数中毒质量浓度(TC50)为61.35 mg/mL,抗NDV的半数有效质量浓度(EC50)为3.2 mg/mL,治疗指数(TI)为19.2,“病毒克”颗粒剂对新城疫病毒具有直接灭活作用和阻断其感染CEF的作用,并存在明显的量效关系(P<0.01);在感染后9 h内以14 mg/mL剂量给予“病毒克”颗粒剂,对新城疫病毒复制的抑制率为42.8%~76.5%。说明“病毒克”颗粒剂对新城疫病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖具有明显的抑制作用。     

Extracts from Chinese Seabuckthorn Berry Have Antimicrobial Activity in vitro

Chinese seabuckthorn berry contains functional components. The berry was extracted by ethanol-water solution. MTT assay and growth rate method were applied to determine antibacterial ability in vitro of the extract solution. The antibacterial and antifungal assay indicated that the extract exhibited different degree of inhibitory activity. The result showed that the extract at a concentration of 1 250 mg/L had the maximum inhibitory effect against Escherichia coli, Bacillus subtilis, and Staphylococcus aureus. Inhibitory effect against B. subtilis was much larger than that against the other two bacterial species. MIC values(minimum inhibitory concentration) of the extract on three bacterial species were 5 000, 1 250, and 1 000 mg/L respectively. IC_(50)(50% inhibiting concentration) evaluation of Trichoderma viride, Rhizopus stolonifer, Aspergillus niger, Penicillium expansum, and Vintage Red indicated that the berry had the strongest inhibitory effect against P. expansum(5 520 mg/L), while it had the weakest inhibitory effect against R. stolonifer(18 870 mg/L). The results proved that seabuckthorn berry had highly effective and comprehensive antimicrobial function.     

金线莲提取物体外抑菌及抑制鸡新城疫病毒在CEF上的增殖

采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较强抑制作用,表现为高敏;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌表现为中敏;对酵母菌和普通变形杆菌的抑制作用不明显,表现为低敏.最小抑菌浓度均不高于12.5 g.L-1.药物与病毒混合组对NDV的抑制率显著高于先病毒后药物组和先药物后病毒组(P<0.05).药物浓度与NDV抑制率存在明显的正相关(P<0.05).在先药物后病毒组和药物与病毒混合组中,15.62-31.25 g.L-1金线莲水提取物具有显著的抗NDV效果;1.95-3.90 g.L-1金线莲水提取物抗NDV效果不明显.