牛瑟氏泰勒虫吉林株ITS基因的克隆与系统进化分析

本研究根据GenBank上的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔区基因(ITS基因)设计合成1对特异性引物,以采自吉林省珲春市某养牛场的血液样本为试验材料,PCR扩增牛瑟氏泰勒虫ITS基因,克隆至pMD-18T Simple载体,进行序列测定,将该基因序列与GenBank上9种已知的泰勒虫相应序列进行比较分析,建立系统进化树。结果表明:牛瑟氏泰勒虫吉林株与美国株亲缘关系较近,其次是水牛泰勒虫,与其他泰勒虫亲缘关系较远。     

江西省高安地区牛泰勒虫病的流行病学调查

本研究用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)结合聚合酶链式反应(PCR)对我国江西省60头肉牛样品(包括血清和血液基因组)进行了牛泰勒虫病的初步调查。结果显示,该省泰勒虫血清阳性率为100%,PCR检测阳性率28.3%。其中,环形泰勒虫(Ta)阳性率为26.7%,瑟氏泰勒虫(Tser)阳性率为15%,中华泰勒虫(Tsin)阳性率为3.3%,环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫共同感染率为13.3%,环形泰勒虫和中华泰勒虫共同感染率为3.3%。结果表明,江西省牛泰勒虫病感染较为严重,本研究为该地区牛泰勒虫病的综合防治提供了数据参考。     

吉林省白山地区牛新孢子虫病流行病学调查

为了解吉林省白山地区牛新孢子虫病的流行情况,本研究应用间接ELISA方法对采自吉林省白山地区5个县区193份牛血清样品进行了检测,并对不同地区、不同养殖方式、不同品种及不同年龄段牛新孢子虫病感染情况进行了比较分析。结果显示,检测样本的总体阳性率为35.8%(69/193);经统计学分析,不同地区、不同养殖方式及不同年龄段牛新孢子虫感染率差异显著(P0.05);而不同品种牛新孢子虫感染率差异不显著(P0.05)。调查表明,吉林省白山地区是牛新孢子虫病的流行区域,此次调查为该地区牛新孢子虫病的防控提供了科学的理论依据。     

吉林省马弓形虫病分子流行病学调查

为了解吉林省马弓形虫感染情况,本试验共采集辽源、白城、通化和吉林市等地血液样本120份,利用血液基因组提取试剂盒和PCR技术对弓形虫B1基因进行检测。结果表明,弓形虫总体阳性率为9.17%(11/120)。调查的4个地区中辽源阳性率最高14.30%(5/35),其次为白城10.00%(3/30)、通化8.00%(2/25)、吉林市3.30%(1/30),除白城和通化地区间差异不显著(P0.05)外,其他各地区间差异显著(P0.05);散养马阳性率为11.10%(10/90),规模化养殖马阳性率为3.30%(1/30),差异显著(P0.05);母马弓形虫阳性率为9.47%(9/95),公马弓形虫阳性率为8.00%(2/25),性别间差异不显著(P0.05)。结果证明,吉林省马感染弓形虫的情况普遍存在。本次调查为吉林省马弓形虫病的有效防控提供了科学依据。     

牛瑟氏泰勒虫病的诊断与防治

牛瑟氏泰勒虫病(T．sergenti)是由长角血蜱(Haemaphysalis loniconis)。传播的牛血液原虫病。临床上表现为体温升高，精神不振，食欲减退，贫血和体表淋巴结肿胀等症状。近年来牛的瑟氏泰勒虫病亦呈上升趋势，尤其是对改良的新品种、外地引进的牛危害更为严重。国内对治疗牛巴贝斯虫病一。和环形泰勒虫病的药物研究较多，然而却忽视了防治牛瑟氏泰勒虫病药物的研究。目前．尚无特效药物。咪唑苯脲是目前治疗牛巴贝斯虫病的特效药物，而对牛瑟氏泰勒虫病的疗效尚无报道，     

以p33重组蛋白为抗原建立牛瑟氏泰勒虫病间接ELISA诊断方法

牛瑟氏泰勒虫病是由瑟氏泰勒虫(T.sergenti)寄生于牛红细胞、淋巴细胞内引起的一种蜱传播性血液原虫病[1]。该病发病具有明显的季节性,在本地牛中多呈带虫现象,而在引进牛和改良牛中的发病率和死亡率均较高。随着牛瑟氏泰勒虫病流行区域的不断扩大,发病率也在不断上升,严重制约     

吉林省龙井市牛东方泰勒虫的流行病学调查

牛东方泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的东方泰勒虫寄生在牛的红细胞及淋巴细胞中,从而引起的一种具有传播性的血液原虫病,以高烧、贫血、出血、异常消瘦以及体表淋巴结肿大等症状为主要临床特征。为了掌握牛东方泰勒虫病在吉林省龙井市地区的流行情况,本试验采用血涂片染色镜检与PCR检测相结合的方法对该地域的牛血液样本进行牛东方泰勒虫病的流行病学调查,并利用等位特异型引物对该病进行分型。试验结果表明,龙井地区牛东方泰勒虫PCR检测样本阳性率为32.08%(17/53),C-型的阳性率和I-型的阳性率均为13.21%(7/53),而B-型仅为7.55%(4/53),且存在两种基因型的混合感染,B型和I型混合感染率为1.87%(1/53),B型和C型混合感染率1.87%(1/53)。     

以P33重组蛋白为诊断抗原建立牛瑟氏泰勒虫病乳胶凝集试验

本试验用P33重组蛋白建立了牛瑟氏泰勒虫病乳胶凝集试验。对81份被检血清的检测结果,阳性率为44.4%,明显高于血涂片镜检法的21.0%(P<0.01),而且在该病流行地区的不同牧场、不同性别和不同年龄牛的阳性率之间未见显著差异。试验表明,以P33重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、抗原易纯化和成本低等优点。     

潍坊市牛泰勒虫病感染情况调查

本研究用血液涂片检查结合聚合酶链式反应(PCR)对潍坊市104头奶牛血液样品进行了牛泰勒虫病的初步调查。结果显示该市泰勒虫血液涂片染色阳性率为15.4%,PCR检测瑟氏泰勒虫阳性率为8.7%,环形泰勒虫阳性率为20.2%,表明潍坊市牛泰勒虫病感染率较高。本研究为该地区牛泰勒虫病的综合防治提供了数据参考。     

新疆托克逊部分地区牛环形泰勒虫感染情况调查

为了解2014-2016年托克逊县部分地区牛环形泰勒虫病的感染情况,采用血液涂片法对托克逊县4个乡疑似牛环形泰勒虫的835例进行病原学检测,并分析各年龄段和不同地区牛环形泰勒虫的感染情况。结果表明,该疫区2014-2016年牛环形泰勒虫阳性率为49.46%(413835);4个乡均不同程度感染牛环形泰勒虫,其中伊拉湖乡牛环形泰勒虫阳性率最高,为53.80%(99/184)。不同年龄段牛环形泰勒虫感染无显著性差异。调查结果为托克逊地区环形泰勒虫病的防控提供了参考。     

牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法的建立

为建立特异、敏感、快速的诊断方法,根据本实验室已测得的瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列,设计一对特异性引物,扩增出大小为499 bp的基因片断,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法,通过对75份牛血液样本检测,检出率为72%(54/75)。该方法具有特异性好、敏感性强等优点,可用于牛瑟氏泰勒虫病的诊断和流行病学调查。     

牛瑟氏泰勒虫不同靶基因PCR检测方法的比较

为筛选出检测牛瑟氏泰勒虫更为特异、敏感的PCR方法,本试验以牛瑟氏泰勒虫p23和p33基因、HSP70基因及18S rRNA基因为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,4种靶基因引物对牛瑟氏泰勒虫的检测均有较高的特异性,当牛瑟氏泰勒虫基因组DNA浓度为127 ng/μL时,p23、p33、HSP70及18S rRNA4种基因的最小检测量分别为1×105、1×105、1×104和1×106copies/μL;检测临床样本阳性检出率分别为30.19%(16/53)、39.62%(21/53)、47.17%(25/53)和54.72%(29/53)。表明以18SrRNA基因为靶基因的PCR方法从敏感性和临床检出率上明显优于其他3种基因。     

PCR检测新疆南疆部分地方品种绵羊的嗜血支原体和泰勒虫感染情况

为了解新疆南疆部分地方品种绵羊嗜血支原体和泰勒虫的感染情况,采用PCR法检测新疆南疆5个地方品种绵羊共100份血液DNA样本。结果表明:新疆南疆部分地方品种绵羊泰勒虫和嗜血支原体感染率分别为35.0%(35/100)和3.0%(3/100)。仅和田羊和多浪羊上检测到嗜血支原体感染,感染率分别为8.0%(2/25)和5.0%(1/20),不同品种羊的嗜血支原体感染率无统计学差异(P>0.05);泰勒虫感染率多浪羊最高,为60.0%(12/20),卡拉库尔羊感染率最低,为15.0%(3/20),不同品种羊泰勒虫感染率差异显著(P<0.05)。散养绵羊嗜血支原体感染率6.0%(3/50),圈养绵羊未发现感染,两者间无统计学差异(P>0.05);散养和圈养绵羊的泰勒虫感染率分别为26.0%(13/50)和44.0%(22/50),两者之间无统计学差异(P>0.05)。将PCR产物进行双向测序,对序列进行比对分析,发现3个嗜血支原体阳性样本均被鉴定为绵羊支原体,35个泰勒虫阳性样本均被签定为绵羊泰勒虫。说明新疆南疆部分地方品种绵羊的泰勒虫感染均较为普遍,而嗜血支原体的感染情况有待于进一步调查。     

中国不同地区羊吕氏泰勒虫分子流行病学调查及遗传进化分析

为了解吕氏泰勒虫在中国不同地区山羊和绵羊中的流行情况,本研究应用基于吕氏泰勒虫18S rRNA基因位点的PCR检测方法,对采自中国河南、甘肃、陕西、山西、贵州、云南、新疆7个地区的281份羊血液样品进行检测,并对阳性样品测序以进行序列分析。结果显示,羊吕氏泰勒虫总感染率为35.23%(99/281)。不同采样点羊吕氏泰勒虫感染率差异极显著(P0.01),其中河南省羊吕氏泰勒虫感染率最高(98%,49/50),新疆最低(0)。绵羊和山羊吕氏泰勒虫感染率分别为51.67%(31/60)和30.77%(68/221),差异极显著(P0.01);放牧羊吕氏泰勒虫感染率(41.55%,86/207)极显著高于舍饲羊(17.57%,13/74)(P0.01);羊吕氏泰勒虫感染率在春、夏、秋及冬四季分别为56.00%(28/50)、42.75%(59/138)、9.43%(5/53)和17.50%(7/40),差异极显著(P0.01);≥12月龄和12月龄羊吕氏泰勒虫感染率分别为33.50%(67/200)和39.51%(32/81),差异不显著(P0.05)。此外,遗传进化分析表明,本研究获得的羊吕氏泰勒虫分离株与中国流行的吕氏泰勒虫分离株同源性高达99.60%以上,且位于同一分支上。本研究为进一步了解中国不同地区羊吕氏泰勒虫的流行现状及分布提供了重要参考依据。     

四川省攀西地区羊梨形虫的分子流行病学调查

为了解四川省攀西地区羊梨形虫的感染情况及种类分布,本研究采用原虫、泰勒虫18S r RNA基因通用引物和种特异性引物对采集自凉山州和攀枝花市7个县/市的497份羊血样样品进行套式PCR检测,并对阳性样品进行测序和序列分析。结果显示,攀西地区7个县/市羊梨形虫阳性率为11.27%(56/497),其中吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫阳性率分别为10.46%(52/497)、0.20%(1/497),混合感染率为0.20%(1/497),未检出绵羊泰勒虫。分歧巴贝斯虫和Babesia sp.KO1阳性率分别为0.20%(1/497)和0.80%(4/497),Babesia sp.KO1与吕氏泰勒虫混合感染率为0.20%(1/497),未检出莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫。山羊和绵羊梨形虫阳性率分别为10.35%(47/454)和20.93%(9/43)。经卡方检验,西昌市、布拖县、会理县和米易县梨形虫阳性率均与美姑县、普格县和盐边县差异显著(p0.05),山羊与绵羊梨形虫阳性率也差异显著(p0.05)。本研究结果表明攀西地区存在羊梨形虫的感染,且以单一病原感染为主,其中吕氏泰勒虫为主要虫种,该地区应加强对羊梨形虫病的防控。     

托克逊县牛环形泰勒虫媒介蜱形态鉴定及病原检测

为了解托克逊县璃眼蜱及其携带病原情况,采用形态学方法和分子生物学方法对璃眼蜱形态学及其携带病原牛环形泰勒虫的基因(Tams1)进行PCR扩增,鉴定和检测采自托克逊地区疑似牛体表璃眼蜱(473枚)及其携带牛环形泰勒虫的感染情况。结果表明:采集的硬蜱经形态学鉴定为小亚璃眼蜱(248枚)和亚洲璃眼蜱(225枚)。小亚璃眼蜱携带牛环形泰勒虫有20枚,阳性率为8.06%(20/248);亚洲璃眼蜱携带牛环形泰勒虫有16枚,阳性率为7.11%(16/225)。4个乡采集的璃眼蜱均有不同程度携带牛环形泰勒虫的情况,其中伊拉湖乡牛环形泰勒虫阳性率最高,为8.40%(11/131)。说明托克逊县的气候环境适合媒介蜱的孳生,是当地牛环形泰勒虫病广泛流行的重要因素。     

牛瑟氏泰勒虫HSP70基因的克隆及原核表达

根据GenBank(D12692.1)上发表的牛瑟氏泰勒虫HSP70基因序列设计、合成1对特异性的引物,采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫HSP70基因片段,将扩增产物与pMD18-Tsimple载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序;用pGEX-4T-1表达载体构建重组质粒pGEX-HSP70,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果表明:扩增的HSP70基因与D12692.1序列同源性为99.3%;表达的融合蛋白分子质量约为68ku,而且可与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生特异性反应。     

牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆与原核表达

构建牛瑟氏泰勒虫P23基因片段原核重组表达质粒,表达重组蛋白。采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因,将扩增产物与pMD18-T-Simple载体连接,测序,验证扩增产物。将P23基因片段克隆到载体pGEX-4T-3上,经酶切分析、PCR鉴定后,IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定表达产物。结果表明克隆的P23基因片段为684 bp,重组质粒pGEX-4T-3/P23构建成功;SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为58 ku;Western blotting分析结果显示,与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生反应,而与牛瑟氏泰勒虫阴性血清无反应,表明牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白具有良好的抗原性和特异性,提示可以利用融合蛋白来建立检测抗体的间接ELISA诊断方法。     

磷酸伯氨喹治疗牛瑟氏泰勒焦虫病的临床效果观察

牛瑟氏泰勒焦虫病是由泰勒属(Theileria)的瑟氏泰勒焦虫(T．sergenti)寄生于牛体内引起的一种血液寄生原虫病，由长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)传播。以贫血、粘膜和皮肤黄染及高热嵇留等为主要特征，具有明显的地区性和季节性。该病在河北省的玉田、丰润、遵化等县的山区广为流行。     

阿克苏地区牛环形泰勒虫病分子流行病学调查报告

为研究阿克苏地区牛感染环形泰勒虫情况,笔者采用实时荧光PCR方法对519份牛血液样品进行了检测。结果显示,牛感染环形泰勒虫病感染率为14.6%(76/519),其中舍饲和散养牛感染率分别为12.6%(11/87)和11.1%(65/432),二者差异无统计学意义(c2=0.17,P>0.05)。调查结果表明,阿克苏是牛环形泰勒虫流行地区。