口蹄疫（续）

①乳鼠中和试验(1)用已知血清鉴定未知病毒法将病畜水泡皮或肌肉、脏器等组织以生理盐水或磷酸盐缓冲液制成1.5～1:10的悬液,于4℃冰箱浸毒过夜,3 000r/min离心10min,上清液为被检病毒液.用FMDV和O、A、C、AsiaⅠ型标准毒株制备豚鼠抗血清,以1:5稀释,与等量被检病毒液混合,37℃孵育1h.后分别接种3～4 日龄乳鼠,颈背皮下注射0.2ml/只.每组接种4只,同时设健康乳鼠、生理盐水和血清对照组.每窝鼠以1只母鼠哺乳.接种后观察7d,每天记录2次.     

番鸭细小病毒病

（上接２００１年第５期P４１）４．２血清学诊断方法４．２．１中和试验：①雏番鸭中和试验：将上述被检病料的上清液，或分离的胚绒尿液毒（鹅胚或番鸭胚，须５代以内）分成２份，１份加入４倍量已知抗番鸭细小病毒血清，另１份加入４倍量灭菌生理盐水或PBS代替抗血清，混匀后置３７℃温箱作用６０min。每组分别注射６羽５日龄左右的易感雏番鸭，每雏皮下０．２ml，隔离饲养观察１０d。血清组雏番鸭健活，而对照组雏番鸭发病死亡，其临床症状及病变与自然病例相同，即可确诊为本病毒所致。②鹅胚中和试验：本法用已知番鸭细小病毒鹅胚适…     

双癸甲溴铵洗消剂对常见病毒消毒试验观察

１　材料与方法１１　动物　３～４日龄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ乳鼠,公母各半。１２　双链季铵盐洗消剂　由徐州法尔达日用化工公司赠送,有效成分双癸甲溴铵含量为１０％。１３　ＨＢｓＡｇＫｉｔ　用于常规ＥＩＡ检测ＨＢｓＡｇ,从上海科华生物技术公司购买。１４　病毒　口蹄疫０型乳鼠组织毒（ＦＭＤＶ）,滴度为１０－７ＬＤ５０／ｍｌ;猪水泡病乳鼠组织毒（ＳＶＤＶ）,滴度为１０－８ＬＤ５０／ｍｌ;鸡新城疫Ⅰ系病毒（ＮＣＶⅠ）,ＥＩＤ５０＞１０８３／ｍｌ。上述病毒均由南京农业大学提供。１５　中和剂…     

抗鸡传染性法氏囊病病毒型特异性单克隆抗体的临床治疗试验

通过琼扩试验（ＡＧＰ）和病毒中和试验（ＶＮ）检测ＩＢＤＶ单抗Ｍ１２和Ｄ２９１，其中和效价分别为１：１２＾１４×１００和１：２＾１９×１００，琼扩抗体价分别为１：１２８０和１：１６０，常规免疫血清分别为１：２＾１０×１０（ＶＮ）和１：３２（ＡＧＰ）。将Ｍ１２和Ｄ２９１应用于临床治疗，Ｍ１２（２００只／ｍｌ）保护率为９３％；Ｄ２９１（４５０只／ｍｌ）为９４％；血清（４只／ｍｌ）为９２％，对照组成活率为     

用VP7—ELISA检测牛,羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅰ：VP7—ELISA检测蓝舌病抗体方

将表达有蓝舌病毒ＶＰ７蛋白的Ｓｆ２１细胞超声波处理制备ＶＰ７抗原,建立了ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检测蓝舌病抗体的方法,确定阴性阳性判定界值及最佳反应条件：待检牛血清阳性下限为３．０,羊血清阳性下限为２．４,ＶＰ７抗原包被浓度为１：８００,用含５％健康鸡血清的磷酸盐缓冲液作封闭液,待检血清１：１００稀释,豚鼠抗牛羊ＩｇＧ－ＨＲＰ结合物１：５００稀释,３７℃避免显色４ｍｉｎ～６ｍｉｎ。试验结果表明：ＶＰ７可与２３个不同血清型ＢＴＶ抗体反应,具有较高的群特异性和敏感性。     

柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫混合感染致病性研究

材料和方法１．试验动物ＡＡ肉鸡，购自江苏省家禽研究所，出壳后运回实验室饲养在杀灭卵囊的笼具中至１５日龄，经数次粪检未见卵囊后供试验。２．球虫卵囊为本教研室分离鉴定的纯种柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫孢子化卵囊，４℃保存。３．试验分组挑选体况相近的１５日龄ＡＡ肉鸡５０羽，分成５组。第１组为不感染对照组；第２组为单种球虫感染组，每羽经口接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊１万个；第３、４和５组为混合感染组，每羽分别同时感染柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫孢子化卵囊：０．５＋５万、１＋１０万和２＋２０万个。４．…     

鸡传染性喉气管炎病毒SA2疫苗株免疫效力的研究

鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）疫苗株尿囊膜乳剂原液经点眼接种２、７和１５日龄雏，２日龄雏鸡组在接种后第７天有２０％（１／５）鸡出现眼睑肿胀和流泪等眼部反应，７日龄和１５日龄雏鸡组无明显临床变化。用该疫苗株乳剂原液点眼接种１月龄以上鸡眼部无明显反应，但通过气管接种后，２６．７％（４／１５）鸡表现出ＩＬＴ临床症状。试验用ＳＡ２株点眼接种免疫１月龄以上鸡，免疫组保护率为１００％（２０／２０），对照组发病率为１００％（１０／１０）、死亡率为４０％（４／１０）。２、７和１５日龄雏鸡点眼毒力试验的３组鸡，于接种后２１～３４天用王岗株ＩＬＴ强毒攻击，１００％得到保护，而对照组鸡１００％发病。试验结果表明，ＳＡ２疫苗株是一株毒力温和、副作用小而且免疫效力好的疫苗用毒株     

弓形虫免疫的研究：弓形虫E／SA的免疫原性和特异性淋巴细胞对小…

用弓形虫速殖子经细胞培养的排泄分泌抗原（Ｅ／ＳＡ）乳化后对小鼠免疫２次，７天后用强毒ＧＪＳ株速殖子以致死性剂量（１０＾３／只）腹腔注射攻毒效检，结果免疫鼠的存活时间明显长于对照鼠。在第二次试验中，Ｅ／ＳＡ免疫鼠通过眼眶放血致死，无菌条件下取其肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏，制成单个细胞，在３７℃５％ＣＯ２条件下培养２天，以不同剂量注射小白鼠；并同时制备健康鼠淋巴细胞注射小白鼠。注射后第二天用ＧＪ     

浏阳黑山羊消化道线虫感染情况调查

消化道线虫病是对山羊危害较大的主要寄生虫病之一，常导致羊的消化障碍、影响其生长发育和生产性能．为了促进浏阳黑山羊生产的发展，特对浏阳黑山羊消化道线虫的感染情况进行调查，现将结果报告如下：１材料和方法随机抽取９９只不同年龄段的浏阳黑山羊，逐只直肠掏粪，每只粪样５ｇ，加水搅匀，置离心管内以２０００转／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，倾去上液，加入饱和食盐水搅匀，再以２０００转／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，用自制小铁丝圈圈取表层液膜于载玻片上，在显微镜下观察。２结果２．ｌ种（类）及其感染率粪检的９９只羊中，阳性８０只…     

犬瘟热疫苗弱毒的复壮与免疫试验

将一株犬瘟热疫苗株病毒通过Ｖｅｒｏ细胞２０代（ＣＤＶ／Ｒ－２０）后又通过敏感犬的腹腔巨噬细胞，获得一株免疫原性更高的弱毒株（ＣＤＶ／Ｒ－２０／８）。接种同样剂量１０４ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８和ＣＤＶ／Ｒ－２０的犬，产生出血清中和（ＳＮ）抗体价的几何平均数分别为１：５４和１：２６。前者为后者的２倍多。接种１０５ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８能完全保护犬（１０／１０）抵抗ＣＤＶ强毒的攻击，接种１０４ＴＣＩＤ５０的保护９／１０犬，而对照犬５只全部发病，其中４只死亡。犬体内ＳＮ价可持续一年之久。冻干培养物在４和－３０℃中可分别保存９个月和１２个月而效力不减。     

牛卵泡卵母细胞冷冻保存后发育潜力的研究

对用３种不同方法（Ａ法：１．０ｍｏｌ／Ｌ甘油平衡，从２０℃开始以１℃／ｍｉｎ的速度降至－℃，植冰，１０ｍｉｎ后以０．３℃／ｍｉｎ降至－３０℃，再以０．１℃／ｍｉｎ降至－３３℃，投入液氮；Ｂ法：１．６ｍｏｌ／Ｌ丙二醇＋０．ｌｍｏ１／Ｌ蔗糖平衡，５℃冰箱中保存１５ｍｉｎ，从Ｏ℃开始按Ａ法中的程序降温；Ｃ法：即玻璃化法）冷冻保存的牛ＧＶ期卵母细胞的发育潜力进行了研究。解冻后，Ｃ组卵母细胞形态正常率显著高于Ａ、Ｂ两组。３种方法冷冻的卵母细胞成熟培养后，平均卵丘扩展率为６０％，其中Ｃ组最高（６９．９％）。卵丘扩展的卵母细胞中，７９．３％发生ＧＶＢＤ，但大多数没有达到ＭＩ期。３组冷冻卵母细胞的体外成熟率、体外受精率分别为１４．２％、８．３％、２０．０％和１０．０％、７．１％、１２．１％，其中Ａ组中有１枚卵裂。     

耕牛锥－46药物代谢动力学研究

用反相高效液相色谱法测定了黄牛肌注锥－４６１ｍｇ／ｋｇ后１０、２０、３０、４５ｍｉｎ；１、１．５、２、３、４、６、８．１２、２４ｈ血浆中锥－４６浓度。经ＰＫＢＰ－ＮＩ程序与３Ｐ８７程序拟合，锥－４６在黄牛体内的代谢符合二室开放模型。其主要动力学参数为：Ｔ１／２α１００．９ｍｉｎ，Ｔ１／２β１２９１．４ｍｉｎ，Ｔ１／２Ｋａ７．８２５ｍｉｎ，ＡＵＣ１６４．８μｇ·ｍｉｎ／ｍｌ，Ｔｐ２７．４１ｍｉｎ，Ｃｍａｘ０．３３９μｇ／ｍｌ。提示黄牛对该药物吸收迅速，消除缓慢，在血液中滞留时间较长，故对伊氏锥虫有较好的杀灭效果。     

用病料作琼扩被检抗原诊断鸡IBD

某场 ２ ０００只 ２６日龄 ＡＡ肉鸡发生疫情。病鸡精神差、嗜睡、缩头，扎堆，两翅下垂，拉白色或淡黄色稀粪。当即扑杀５只病鸡，剖检可见肌肉块状出血，法氏囊肿大，内有干酪样渗出物，肾脏肿大苍白；一例腺胃与肌胃交界处粘膜出血。疑似鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ），用病料作被检抗原进行琼脂扩散试验（ＡＧＰ）以确诊。１抗原来源ＩＢＤ标准血清和抗原均为扬州大学畜牧兽医学院畜禽传染病实验室提供。２病料及处理无菌采集扑杀的５只病鸡的脏器，将法氏囊和肾脏作Ａ组，肝、牌和胸腺作Ｂ组，分别称重、剪碎，按１：４加生理盐水浸渍２…     

脉冲血氧定量法测定新生羔羊动脉血氧饱和度

采用脉冲血氧计测定６９只羔羊出生后１，５，１０ｍｉｎ时动脉血氧合血红蛋白饱和度。并对所有羔羊进行主观活力评分，分值为１￣４，１为正常，４为死产。顺产的４２只羔羊中，在产后１，５，１０ｍｉｎ时分别对１９，２９，３４只进行测定，平均ＳｐＯ２值分别为６７％，８４％，难产的２７只羔羊中，在产后１，５，１０ｍｉｎ时分别对１６，１８，１２只进行测定，平均ＳｐＯ２值分别为６１％，６９％，６９％，难产羔羊产后５ｍ     

猪繁殖和呼吸综合征（PRRS）血清流行病学调查初报

用美国Ｈｅｒｄｃｈｅｋ猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳ）ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒对来自华北地区和华东地区８个ＰＲＲＳ可疑猪场共４７份血清进行检测。结果是：华北地区６个猪场，华东地区２个猪场ＰＲＲＳＶ抗体阳性检出率分别为５／６和０／２。８个猪场流产母猪、新生弱仔猪，有呼吸症状的育成猪及种公猪阳性检出率分别为１４／２０，５／１６，４／１０和１／１。表明ＰＲＲＳ在我国已经存在，并正在流行     

分泌抗细粒棘球蚴原头蚴抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用感染包虫的绵羊肝包囊中的活原头蚴腹腔接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，８个月后取鼠脾细胞与Ｓｐ２／ｏ骨髓瘤细胞融合。经ＩＨＡ筛选，获得１４个阳性杂交瘤细胞株，对其中３株进行了克隆和进一步研究。结果表明，５Ｃ５与细颈囊尾蚴、脑包虫和肝片吸虫抗原均不发生交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：２０４８，属ＩｇＧ２ｂ亚类：３Ｃ５和６Ｃ４与细颈囊尾蚴和脑包虫有轻度交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：１２８，均属ＩｇＭ类。     

口服狂犬病疫苗（SAG—2）对犬的免疫原性,效力和安全性

研究了ＳＡＧ－２致弱狂犬病病毒疫苗对实验小猎兔犬的免疫原性和效力。试验共分四线，每组１０只犬，分别在舌上口服接种ＳＡＧ－２１ｍｌ／只或在诱饵只在１．５ｍｌ／只，接种后１８０天，所有的犬用狂犬病毒攻击，测定各组的抗体应答，结果，疫苗直接加到舌上经用诱饵接种法效价高。但各组间差异无统计学意义，所有免疫犬都存活，而８０％对照犬死亡，证明ＳＡＧ－２经口免疫犬是安全有效的。     

山羊毛霉菌临床与病理学观察

以１０＾７个／ｍｌ微小根毛霉孢囊孢子悬液颈静脉接种２月龄山羊，每只５ｍｌ，每日１次，连续３日，经８８ｄ观察３／４只山羊死亡。病羊临床表现精神沉郁，消瘦，体温升高，腹泻，后肢瘫痪，白细胞总数及嗜中性白细胞成倍增加，全血ＧＳＨ－ＰＸ活性降低，Ｓ－ＧＯＴ、Ｓ－ＧＰＴ和ＡＫＰ活性升高，血清胆固醇值上升，但以上各项血液生化指标变化与对照羊相比差异不显著。病理变化为全身扩散性毛霉菌病，其典型病谱在肺脏，整个肺     

一种快速有效制备单克隆抗体的方法

以人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）为抗原,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠一次脾内直接注射免疫,免疫后６ｄ,取其血清进行抗体检测,结果１２８００倍稀释度仍呈阳性。取此免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１进行细胞融合。融合后,将经检测抗体阳性的细胞孔置于显微镜下,挑选单个克隆进行克隆化,得到２株单克隆抗体细胞株２Ａ８、４Ｅ６。将其分别接种于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔中,收获的腹水效价分别达１０－６和１０－５。     

一种测定猪上呼吸道中胸膜肺炎放线菌的血清学辅助方法

将从１５个猪群的４２２头健康猪鼻腔和扁桃体分离的胸膜肺炎放线菌（ＡＰ）接种于不同配方的培养基。用ＥＬＩＳＡ和补体结合试验（ＣＦ）测定血清中ＡＰ抗体。结果，有２４头猪鼻腔菌检阳性，９０头猪扁桃体菌检阳性，１１头猪２种检样均为阳性。两种检样在含有林可霉素、杆菌肽和结晶紫的ＰＰＬＯ培养基较胰酶大豆琼脂的细菌回收率高。通过二氧化碳培养也不影响检出率。分离出的ＡＰ为血清１、２、３、５ａ、５ｂ、７、８、１０和