应用免疫荧光法诊断猪流行性腹泻的研究

应用直接免疫荧光法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)人工感染仔猪的检出阳性率为91.4%(42/46),电镜观察阳性率为67.4%(31/46);对自然腹泻猪的检出阳性率为47.8%(11/23).对人工感染仔猪二十种组织器官冷冻切片的检测表明,PEDV 感染为肠道局部感染,应用肠粘膜涂片和冷冻切片对人工感染猪和自然腹泻猪检出率相同.应用间接免疫荧光法对 PED 阳性猪场血清的检出阳性率为89%(89/100);对屠宰场猪血清的检出阳性率为25.2%(51/202).PED 血清于4℃和20℃保存一个月后,用间接免疫荧光法俭测,其抗体效价分别降低2个或3个滴度;-20℃冻存10个月,未见抗体效价下降.对用间接免疫荧光法检出的 PED 阳性的52头份猪血清进行猪传染性胃肠炎中和试验,阳性率为21.2%,首次证明我国存在 PED 与 TGE 的混合感染.     

ELISA间接法检测猪瘟抗体的研究

本文介绍了以中国株猪瘟兔化弱毒乳兔组织冻干疫苗为原料提取猪瘟抗原,以酶标葡萄球菌蛋白 A(PPA)代替酶标抗猪IgG,建立ELISA间接法检测猪瘟抗体的方法。该方法与血清兔体中和试验对73份猪血清进行检测猪瘟抗体的同步试验,结果基本一致( P >0.05)。敏感性、特异性及准确性分别为100％、92.16％及94.52％。用该方法对1528头份猪血清及36头份猪扁桃体浸出液进行猪瘟抗体测定,结果稳定,重复性好。     

猪流行性腹泻病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性血清检测结果均为阴性;其批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。采用建立的ELISA方法检测了130份临床样品,其中78份血清样品为PEDV抗体阳性。表明建立的以重组N蛋白为包被抗原检测PEDV血清抗体的方法可以用于检测PEDV感染及相关的流行病学调查。     

猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种急性、高度传染性肠道疾病,给养猪业造成了严重的经济损失。本研究以纯化的PEDV 为包被抗原,通过优化 ELISA 反应条件,建立了间接 ELISA 抗体检测方法,其反应条件为：抗原最佳包被浓度为 20 μg/mL,血清标准品最佳稀释度为 1：500,包被时间为4℃过夜,5%小牛血清37℃封闭1 h,二抗 1：10 000稀释,37℃作用1 h,抗体临界值为 D_{450 nm}≥ 0.289判为阳性,D_{450 nm}≤ 0.236判为阴性,介于二者之间为可疑。检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、细小病毒和口蹄疫病毒标准血清抗体均为阴性,重复试验变异系数均小于10%,对江苏、江西、福建、广东地区74份猪血清样品进行检测,抗体阳性率达84%,表明该方法具有较好敏感性、特异性和重复性,可用于 PEDV 抗体检测和流行病学调查。     

猪流行性腹泻病毒N基因的表达及抗原性分析

为深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,结果显示总阳性率为81.7%。进一步从部分样品中对PEDV的N基因进行克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分离株之间的氨基酸同源性高达99%以上,与代表性病毒株CV777的氨基酸同源性为97.4%～98.1%,表明目前流行的PEDV其N基因仍然相对保守的。同时,构建了重组表达载体pGEX-N,经诱导表达显示该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为81 ku,western blot分析结果表明该重组蛋白能够被PEDV阳性猪血清特异性识别。将纯化后的重组N蛋白作为包被抗原,对20份已知背景的临床猪血清抗体进行ELISA检测,结果显示有9份血清为抗体阳性,11份血清呈抗体阴性,与应用RT-PCR方法鉴定抗原的结果符合率为85%。本研究表达的重组N蛋白具有良好的抗原性,可以将其作为PEDV血清学诊断的候选抗原。     

河北省邢台市及周边地区猪流行性腹泻病毒流行情况调查及S1基因序列分析

为初步调查河北省邢台市及周边地区猪流行性腹泻(PED)分子流行病学情况，试验于2022年1月—12月从河北省邢台市及周边县(市、区)采集疑似感染PED猪肠道病料或新鲜粪便共206份，采用荧光定量PCR技术检测样品猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率；同时采用RT-PCR法扩增部分PEDV阳性病料S1基因序列，根据S1基因序列特征分析毒株基因型和变异情况。结果显示：共47份样品为PEDV核酸阳性，平均阳性率为22.82%,其中腹泻仔猪、育肥猪和母猪样品PEDV检出率分别为27.05%、15.15%和20.83%;采用RT-PCR法共扩增6份PEDV阳性样品S1基因部分序列，进一步序列分析发现5个毒株属于PEDV变异株，1个毒株属于PEDV经典株。研究结果表明，河北省邢台市及周边地区PED流行情况较严重，且同时流行PEDV经典株和变异株，但PEDV变异株为优势基因型。     

酶标葡萄球菌A蛋白染色法用于猪囊尾蚴病诊断的初步研究

用自制的猪囊尾蚴头节“颗粒性抗原”,以HRP—SPA作为第二抗体,进行间接免疫酶染色诊断猪囊尾蚴病。检测61份猪囊尾蚴病血清,阳性59份,检出率为96.6％;健康猪血清69份、细颈囊尾蚴病和肺丝虫病猪血清各10份,均为阴性。此法简便易行,快速、准确,适于基层使用。     

猪流行性腹泻病毒抗体ELISA检测方法的建立

为检测猪血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平,以纯化的PEDV作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV血清IgG抗体的诊断方法:当血清OD_(450nm)值0.31时,判定阳性;当OD_(450nm)值小于0.26时,判定阴性;当OD_(450nm)值介于两者之间判定可疑。结果表明,试验建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中猪流行腹泻病毒抗体、监测猪流行腹泻病的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。     

基于PEDV N蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为了建立猪流行性腹泻(procine epidemic diarrhea,PED)快速病原学诊断方法,试验用纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合筛选阳性杂交瘤细胞,并进行间接免疫荧光试验。在此基础上,以单克隆抗体(MAb)为包被抗体,PEDV阳性猪源多克隆抗体(PcAb)为检测抗体建立检测PEDV抗原的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法,并检测了该方法的特异性、灵敏度、重复性,以及与RT-PCR方法的符合率。结果表明:试验成功筛选到一株能够稳定分泌抗PEDV的MAb 13C3A10-2;通过间接免疫荧光试验鉴定,该MAb为PEDV型特异性MAb;建立的DAS-ELISA方法针对猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒和猪轮状病毒的检测结果均为阴性;对PEDV CV777细胞毒的最低检出量为5×10~3 TCID_(50)/mL;具有良好的重复性,组内变异系数为4.57%～7.81%,组间变异系数为4.78%～7.36%;DAS-ELISA与RT-PCR比较,阳性符合率为94.7%。说明试验建立的PEDV DAS-ELISA方法可以初步用于PED病原学诊断。     

猪源HBV样病毒感染的研究

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份(56/2823),阳性率为1.98%,不同地区的检出率在1.0%～4.5%之间.对37份HBsAg阳性血清检测了抗—HBS、HBeAg、抗—HBe、抗—HBe.共检出阳性23份(23/37);100份HBsAg阴性猪血清与37份HBsAg阳性猪血清经双育试验检测谷丙转氨酶,有非常显著性差异,血清HBsAg阳性猪的肝脏有中等度到重度的病理组织学变化(11/11);用ELISA法检测HBsAg阳性猪血清中人聚合白蛋白受体(PHSA—R),21份样品中有19份阳性(19/21),而HBsAg阴性猪血清10份未检出阳性;用生物素—亲和素标记的HBV—DNA探针检测HBsAg阳性猪血清.11份样品有41份阳性(4/11);采用从人血清中提纯Dane颗粒的方法,从8份猪血清中都提纯了类似Dane颗粒的病毒粒子(8/8);提纯的病毒粒子和Dane颗粒与羊抗—HBV作免疫电泳,沉淀线基本一致;用2mL含HBV样病毒颗粒的猪血清接种10头仔猪,有3头感染(3/10).传至第3代,10头仔猪4头感染(4/10).实验证实,猪源HBV样病毒粒子是一种新发现的病毒,和HBV相比,抗原有相关性,基因有同源性.     

捕食线虫性真菌的分离鉴定

本文报道首次从我国内蒙古土壤中分离出一株捕食线虫性真菌,该菌株适宜在２０℃,ｐＨ６,玉米粉浓度０．４ｇ／Ｌ的玉米粉琼脂（ＣＭＡ）培养基中生长。通过对其菌丝、孢子及捕食性结构的形态学观察,鉴定其为节丛孢属的少孢节丛孢菌ＣＩＭＨＩ株（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ,ｓｔｒａｉｎＣＩＭＨＩ）。     

广西水牛类圆线虫病的病原体形态

类圆线虫病是广西水牛的常见寄生虫病之一,本文作者通过光镜观察,我们确认广西水牛类圆线虫病的病原体即为乳突类圆线虫。本文首次记述该虫种第四期幼虫的形态。在扫描电镜下,虫卵表面光滑,近似椭圆形。丝状蚴头端钝圆,口孔裂隙状,左右为2唇片,每唇片似分3小叶;体表两侧自劲部开始,各有2条纵嵴,延续至尾端,称为双翼膜(double alae),这是该期虫体独有的构造;丝状蚴尾端分叉。自由生活成虫具6片唇,各唇上有1个唇乳突;口孔内沿有一排锥状齿,共9枚;头端两侧各具1个半球形的头感器;头端背腹面的两侧各具1个头乳突,共4个,锥形。自由生活雄虫的泄殖腔处明显地突出于虫体表面,其周围有7对性乳突。自由生活雌虫的阴门横裂,肛门呈半月形。寄生生活雌虫头端截平,4个唇片由口缘伸向口孔,唇片近口孔中央向上翻卷,唇片上各有1个唇乳突;口孔呈倾斜(45°)的马耳他“十”字形;头感器1对,头乳突4个;阴门横裂,阴门部有1对阴侧感觉窝和1对阴后乳突;肛门横裂,突起;尾部自肛门后突然收缩,呈指状。在宿主体内未见到寄生生活雄虫。     

鸡胚法氏囊的组织发育

本试验通过对孵化至１３－２１日龄的鸡胚法氏囊进行组织学的连续性动态观察,较为详细地描述了早日龄鸡胚法氏囊的组织学分化发育过程。实验结果显示,直至出壳胶鸡胚法氏囊尚未形成较完整的能组织起 体液免疫促进作用的组织基础结构,其完善的形态结构需在后天环境中分化和发育。     

工程量清单计价模式实施探析

实行工程量清单计价是一种既符合我国市场竞争规则，又符合与国际惯例接轨的造价模式，是我国建设市场发展需要的必然结果。阐述了在我国实行工程量清单计价的重大意义，探讨了现阶段实施工程量清单计价中遇到的问题，并提出了完善措施。     

《证券法》的修改与上市公司信息披露的规范

上市公司信息披露关系到市场的健康发展，但目前上市公司信息披露存在着许多问题，如信息披露制度不完善，信息披露质量难言满意等。根据证券法修订草案中对上市公司信息披露的相应修改内容，应用XBRL技术加速上市公司信息披露规范，多管齐下改善披露质量：引入做空机制是一个优选；加重违反信息披露法律法规上市公司的法律责任；加大信息披露监管力度。     

高剂量锌促进猪生长的机理探讨

选用42头“杜长大”三元杂交猪，分为2组（每组3个重复），分别饲以添加100mg/kg和3000mg／kg锌（氧化锌）的相同饲粮，进行了为期30d的饲养试验，然后屠宰取样，研究高剂量锌促进猪生长的作用机理。结果显示：饲粮中添加300mg/kg锌显著提高了日增重（P＜0.01)和采食量（P＜0.01）；饲料干物质、粗蛋白的消化率明显上升（P＜0.01）；肝脏组织中金属硫蛋白含量增加（P＜0.01），铜，锌－超氧化物歧化酶活力增强（P＜0.01);肝脏RNA含量和RNA／DNA值显著上升（P＜0.01）；血清胰岛素、胰岛素样生长因子I水平明显升高（P＜0.01）。试验结果提示，高剂量锌似通过有效清除体内自由基的不良影响，增强DNA转录RNA，促进胰岛素、胰岛素样生长因子I的合成和分泌，加强合成代谢，而产生促生长效果。     

家兔四肢动脉解剖

家兔四肢动脉的分布情况,国内外文献均十分简单,特别是缺少一张完整的图。前、后足部的血管图,大部分文献中均略去。本文对此进行了研究,绘出了完整的模式图,可供参考。