大白菜离体再生体系的建立及其不定芽对抗生素的敏感性

以大白菜纯合自交系92S105为试材,对激素、外植体类型、苗龄等再生因素进行优化,研究大白菜再生芽对抑菌抗生素及其筛选抗生素的敏感性。结果显示,在MS附加0.3 mg.L-1TDZ和0.5 mg.L-1NAA的再生培养基上,92S105再生率最高,可达到76.19%。生根培养基为1/2MS附加1.0 mg.L-1IBA或1.0 mg.L-1IAA,生根率都达到100%。在遗传转化中,以5 mg.L-1潮霉素作为筛选抗生素,来筛选抗性芽和抗性植株。用头孢噻肟钠和羧苄青霉素作为抑菌剂,均抑制不定芽的分化,但羧苄青霉素对不定芽分化影响较小,所以使用羧苄青霉素作为抑菌剂。     

抗生素对剑麻愈伤组织生长和植株再生的影响

研究卡那霉素、潮霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对剑麻愈伤组织生长、不定芽分化及生根的影响,并确定抑制农杆菌生长的头孢霉素、羧苄青霉素的质量浓度。结果表明:潮霉素明显抑制剑麻愈伤组织生长和不定芽分化,卡那霉素次之,头孢霉素和羧苄青霉素相对较小;4种抗生素均能抑制剑麻生根,其抑制效果依次为头孢霉素>卡那霉素>羧苄青霉素>潮霉素。头孢霉素和羧苄青霉素的浓度大于200 mg/L时,农杆菌生长完全被抑制。在筛选剑麻转化体时,卡那霉素和潮霉素的使用浓度分别以100、50 mg/L为宜,羧苄青霉素和头孢霉素的使用浓度均为200 mg/L。     

抗生素对2个越橘品种叶片再生的影响

以Sunrise和Geo组培苗幼叶为试材,研究了卡那霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对越橘叶片再生不定芽的影响.用继代约20 d的新梢顶部新展开叶片制备外植体,Sunrise接种在WPM+ZT 4.0 mg/L+TDZ1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+蔗糖20.0 g/L+琼脂6.0 g/L的再生培养基上,Geo接种在WPM+ZT4.0 ms/L+IBA 0.3 mg/L+蔗糖20.0 S/L+琼脂6.0 g/L的再生培养基上,添加不同浓度的抗生素.结果表明:10 mg/L卡那霉素能极显著地抑制越橘叶片再生,600 mg/L头孢霉素能完全抑制叶片再生,500 mg/L羧苄青霉素能完全抑制叶片再生.     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

鄂梨2号叶片高效再生体系的建立

以早熟砂梨品种鄂梨2号组培苗叶片为外植体,建立叶片再生体系。结果表明,鄂梨2号叶片再生不定芽最佳培养基为NN69+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA,愈伤组织再生率达到100%,不定芽再生率为36.67%;不定芽增殖最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,增殖系数为2.19;不定芽在1 000mg/L ABT中浸蘸5 s后接种在添加500 mg/L活性炭的1/2MS培养基上,生根率最高,为66.67%;试管苗移栽成活率为84.44%。     

贡菊再生体系建立及羧苄青霉素浓度筛选

以贡菊试管苗叶片为外植体,研究了影响不定芽分化和生根的因素,旨在建立贡菊高效的再生体系,同时探究了羧苄青霉素浓度对叶片不定芽分化的影响,为贡菊育种奠定基础。结果表明:在MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.6 mg/L的培养基中,贡菊试管苗叶龄为25 d的叶片中愈伤组织诱导和不定芽分化率达到最高(88.4%),每个叶盘平均分化4.6个不定芽。当MS培养基中的IBA浓度为0.25 mg/L时,最适合贡菊试管苗根的生长,根长为4.5 cm,根数达15条,同时地上部茎叶生长也较好。低于250 mg/L的羧苄青霉素不影响不定芽愈伤组织中的诱导,但浓度高于500 mg/L时,抑制不定芽的分化。     

红香椿组织培养和快速繁殖研究

以"红香椿一号"的茎段为外植体进行植物组织培养,采用四因素三水平正交设计法试验筛选出生根、快繁的适宜培养基.以不同培养基的生根数为鉴定指标,筛选出适宜红香椿一号茎分化苗生根的培养基,以不同培养基的芽增殖数为鉴定指标.筛选出适宜"红香椿一号"茎分化丛生芽的培养基,进而掌握不同生长素之间的适宜配比.通过试验研究表明:在9个培养基中生根最佳的培养基是(MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+ZT 0.2 mg/L);增殖适宜的培养基是(MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA O.1 mg/L+IBA 0.1 mg/L+ZT 0.1 mg/L).     

结球甘蓝的离体再生及基因转化研究初报

以下胚轴为外植体 ,通过根癌农杆菌介导法将抗虫基因 (CpTI)导入结球甘蓝品种北早。共培养 2天后 ,转到MS +1 0mg/L 6 -BA +0 2mg/LNAA +4 0mg/LAgNO3 +10mg/L卡那霉素 +5 0 0mg/L羧苄青霉素的分化选择培养基上进行筛选。将筛选出的绿色抗性芽苗培养生根 ,移栽成活 ,获得了抗性再生植株     

洋葱雄性不育系再生体系的建立及优化

以茎尖为材料,对洋葱雄性不育系再生体系的建立及优化进行研究.利用茎尖培养诱导芽,一般继代培养2～3次,即可得到大量丛生芽.结果表明,芽增殖的最佳培养基是MS+4mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA,增殖系数为5.3,芽诱导率为100％.筛选出2个适合生根的培养基是1/2MS+0.1 mg/L PP333+1.5 mg/L IBA和1/2 MS+1.0 mg/L IBA,生根率均为100％.     

青杂5号甘蓝型油菜的高效再生及农杆菌侵染转化体系的建立

以甘蓝型油菜(Brassica napus L.)品种青杂5号的子叶、下胚轴外植体为受体,分别对芽分化培养基、芽生长培养基、生根培养基进行激素组合优化研究,建立甘蓝型油菜下胚轴高效再生系统。结果表明,青杂5号下胚轴分化率最高为子叶的3倍,可达90%左右;优化的分化培养基为MSB+5 mg/L噻二唑苯基脲(thidiazuron,TDZ)+7.5 mg/L Ag NO3+0.1 mg/L NAA+2 mg/L脯氨酸(proline,L-Pro)+250 mg/L酸水解酪蛋白(casein acid hydrolysate,CH)+3%蔗糖;生长培养基为1/2 MSB+1 mg/L IBA+2 mg/L L-Pro+250 mg/L CH+1.5%蔗糖;生根培养基为1/2 MSB+0.2 mg/L IAA+1.5%蔗糖。在此基础上,构建模拟Bt的抗虫基因B12的双元表达载体,采用农杆菌介导的方法转化油菜下胚轴,并利用潮霉素及羧苄青霉素对再生植株进行筛选;通过对转基因植株叶片基因组DNA的PCR检测及叶片GUS组织化学染色的分析,发现抗虫基因已整合到油菜植株的细胞核基因组中,并能正常表达;通过小菜蛾接种试验对该抗虫基因进行杀虫效果评价。     

中华补血草的组织培养和快速繁殖体系的优化

以中华补血草为试材,通过优化激素配比证明:适宜补血草诱导植株再生的一次成芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1mg/L;对诱导再生植株生根激素的筛选结果表明,最适生根激素为IBA,其适宜浓度为0.1 mg/L;生根培养基为MS+IBA 0.1 mg/L。     

导入抗逆基因的转双抗虫基因741杨的获得

为培育更多抗非生物胁迫的转基因杨树,以转双抗虫基因741杨(P.alba×(P.davidaiana×P.sirnonii)×P.tomentosa)为材料,建立了叶片诱导的转双抗虫基因741杨的高频再生体系,并采用根癌农杆菌介导法,探索了影响其遗传转化效率的主要因子。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA;继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA,最佳生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L IBA。对影响转化因子的研究结果表明,共培养时间为3 d时,不定芽诱导率最高;共培养培养基加入乙酰丁香酮、pH值调到5.2时,诱导潮霉素抗性芽效果最显著;最佳潮霉素筛选质量浓度为3 mg/L;将抗逆基因AtNDPK2通过农杆菌导入到转基因741杨中,经PCR检测,在抗性植株DNA中扩增出与目的基因大小相同的片断,初步确认目的基因已经整合到转基因741毛白杨基因组中。     

人参植株再生体系的建立和优化

以人参种子、芽胞、茎、叶为外植体,通过器官发生途径建立人参高效再生体系.筛选出不定芽诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L BA+0.2 mg/L IBA,继代培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L IBA和MS+2.5 mg/L BA+0.2 mg/L IBA,生根培养基为1/2 MA+1.0 mg/L NAA;16 h光照/8 h黑暗培养.移栽获得再生植株.     

甘薯愈伤组织分化及抗生素耐受性研究

为研究不同甘薯品种愈伤组织对抗生素的耐受性,以及在不同激素配合使用时的分化情况,为甘薯转基因工程奠定基础,将不同浓度的羧苄青霉素、卡那霉素和潮霉素以及不同浓度和组合的NAA、BAP和2,4-D添加到MS培养基,接种不同来源的甘薯愈伤组织并进行观察.不同甘薯品种对3种抗生素耐受性表现出一定差异,在较低羧苄青霉素浓度(100mg/L)的MS固体培养基中,所有品种愈伤组织生长良好.在较高羧苄青霉素浓度(≥500 mg/L)的MS固体培养基中,南薯99和绵粉7号表现出较强的抗生素耐受性.NAA(0.1 mg/L)与较高浓度BAP(≥1.0 mg/L)配合使用,不同品种愈伤组织分化率为100%,较低浓度BAP(0.1 mg/L)与不同浓度NAA配合使用,分化率极低.     

若光梨叶片诱导不定芽的研究

以NN69为基本培养基,附加TDZ 1.0 mg/L、IBA0.15 mg/L、AgNO30.1 mg/L,处理若光梨叶片,暗培养21 d,再于光照条件下培养30 d,获得不定芽和再生植株,再生频率为63.2%.     

中国野生毛葡萄叶盘法遗传转化中抗生素种类及体积质量分数的筛选

为获得毛葡萄遗传转化体系中合适的抗生素种类和体积质量分数,以毛葡萄单株“花溪-4”为试材,研究了选择抗生素潮霉素(Hygromycin,Hyg)、卡纳霉素(Kanamycin,Kan)和抑菌抗生素羧苄青霉素(Carbenicillin,Carb)及头孢霉素(Cefotaxime,Cef)对其离体叶片再生和再生芽成苗的影响.结果表明:0.1 mg/L的Hyg和10 mg/L的Kan可完全抑制不定芽再生,适合遗传转化中转基因再生芽筛选;再生芽在添加5 mg/L Hyg和40 mg/L Kan培养基中表现黄化致死,不能成苗,可用于转基因苗选择.300 mg/L的Cef或400 mg/L的Carb均可促进花溪-4不定芽再生,同时对根癌农杆菌抑制效果良好,适宜于毛葡萄遗传转化中抑制农杆菌生长.     

番茄宝大906高频再生系统的建立及其潮霉素选择压的测定

以番茄宝大906品种为试材,通过对其子叶、下胚轴的离体培养,研究了不同6-BA/NAA植物生长物质浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽再生及生根的影响.另外,还测定了潮霉素选择压.结果表明:以子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织的最适培养基分别是MS+ 2.0 mg,/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA和MS+ 2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA;诱导芽分化的最适培养基均为:MS+ 2.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,子叶的芽分化率高达93.5％;不定芽适宜的生根培养基为MS+0.1 m g/L NAA;子叶、下胚轴的潮霉素选择压分别以20、40 mg/L为宜.     

葡萄风信子基因转化受体系统的建立

以葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)品种"紫葡萄"(Cantat)的鳞茎和叶片为外植体,通过植物组织培养再生系统的建立和抗生素敏感性试验,建立了稳定的葡萄风信子基因转化受体系统。结果表明,葡萄风信子的鳞茎和叶片均可被诱导形成大量的愈伤组织;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA,其诱导频率可达100%;鳞茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA,其诱导频率达91.2%;愈伤组织分化不定芽的最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,生根最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1%AC;筛选卡那霉素的临界质量浓度为60 mg/L,羧苄青霉素的适宜质量浓度为300 mg/L。     

抗生素对油葵不定芽产生率的影响

研究了卡那霉素和羧苄青霉素对油葵不定芽的诱导及生长的影响.在以卡那霉素为抗性选择标记时,对油葵不定芽起完全抑制作用的Km临界浓度在75～100 mg/L;在以羧苄青霉素为抑菌剂用于油葵遗传转化试验时,其浓度为300 mg/L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对不定芽的诱导及生长产生明显的伤害作用.试验结果表明,卡那霉素及羧苄青霉素均可作为油葵转化植株的有效筛选、抑菌剂.     

重瓣大岩桐离体培养的两种途径

以大岩桐的茎段、叶片、茎尖为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的激素组合进行离体培养研究。结果表明:适宜外植体灭菌的方法为先用75%的乙醇表面消毒10 s后再用0.1%Hg Cl2灭菌4⁵ min,或者先用75%的乙醇表面消毒5 s后再用0.1%Hg Cl2灭菌6 min。3种外植体均可获得组培苗,叶片通过愈伤组织诱导途径可获得组培小苗;茎段和茎尖通过不定芽途径可获得组培小苗。最适宜的愈伤分化培养基为MS+6-BA 0.50 mg/L+IBA 1.00 mg/L,适宜的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.50 mg/L或者MS+6-BA 0.50 mg/L+IBA 1.00 mg/L,适宜的生根培养基为MS+IBA1.005 min,或者先用75%的乙醇表面消毒5 s后再用0.1%Hg Cl2灭菌6 min。3种外植体均可获得组培苗,叶片通过愈伤组织诱导途径可获得组培小苗;茎段和茎尖通过不定芽途径可获得组培小苗。最适宜的愈伤分化培养基为MS+6-BA 0.50 mg/L+IBA 1.00 mg/L,适宜的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.50 mg/L或者MS+6-BA 0.50 mg/L+IBA 1.00 mg/L,适宜的生根培养基为MS+IBA1.00².00 mg/L,降低蔗糖含量有利于生根。MS+IBA 2.00 mg/L+AC 0.10 g/L有利于生根培养。