妊娠中期猪羊水来源干细胞EGFP基因转化及体外分化

本研究旨在获得妊娠中期猪羊水来源千细胞,并通过用EGFP对干细胞进行标记,为以EGFP作为示踪标记对干细胞进行体内移植研究奠定基础.利用羊水来源干细胞培养技术体系,从胎龄60 d猪胎儿羊水中分离获得干细胞,通过脂质体介导转染将EGFP基因导入干细胞,诱导转基因干细胞向肌细胞和神经细胞分化,观察其分化特点.采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因.结果成功分离培养出妊娠中期猪羊水来源干细胞,并获得转EGFP基因干细胞.干细胞在表达EGFP的同时仍具有分化潜能.干细胞中Oct4、CD-90和Sox2表达阳性;体外诱导的干细胞能分化为肌细胞(表达myf-6和myoD)、星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2).研究表明,从妊娠中期猪胎儿羊水中分离干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因干细胞具有自我更新、增殖和分化潜能,可以用EGFP对羊水来源干细胞进行标记、追踪,为EGFP作为示踪标记对干细胞用于体内移植研究奠定了基础.     

羊水干细胞研究进展

以干细胞为基础的研究为众多疾病的治疗开辟了新的途径。近年来,从羊水中获得的细胞被诱导成了多功能性干细胞(induced pluripotent stem cells,ips),并且在体外具有很大的应用前景。羊水干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFScs)具有向3个胚层分化的能力,且避免了胚胎干细胞(embryonicstem cells,EScs)涉及的伦理道德问题,其来源广泛及应用上的安全性等特点使其成为了生命科学领域研究的热点。但目前对AFScs的来源和特性还不是很清楚。现就AFScs的分离培养和生物学特性作了综述,并对其所面临的问题作了进一步分析。     

荷斯坦牛羊水来源干细胞分离培养及其表面标志检测

利用羊水来源干细胞培养技术体系,从胎龄285 d荷斯坦奶牛胎儿羊水中分离培养干细胞;采用RT-PCR技术检测干细胞表面标志或相关基因。成功分离培养出奶牛羊水来源干细胞,干细胞中CD-90、Nanog、Oct4、TERT、Sox2、Desmin和HES1表达阳性。从奶牛胎儿羊水中分离干细胞具有可行性和有效性,为进行转基因研究提供靶细胞奠定了基础。     

羊水来源干细胞基因组特征的研究进展

人和动物存在羊水来源的多潜能干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFSCs)。AFSCs被公认为是介于胚胎干细胞和成体干细胞之间的一种特殊的细胞类型,因此,AFSCs同时具有成体干细胞和胚胎干细胞的生物学特性。AFSCs干细胞特性的保持是以其标志基因以及基因组的整体特异表达为基础。目前,已经有相关研究对不同胎龄时期的AFSCs的标志基因Oct4、Sox2、Nanog、SSEA系列以及Tra-1-60和Tra-1-81等在基因组中的表达特征进行了分析。对AFSCs的相关研究进展进行综述,以期为羊水干细胞的进一步系统、深入研究提供理论依据。     

绵羊羊水、胎儿肾脏组织中表达Oct-4细胞的分离培养及其分子学特性研究简

试验旨在建立从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离培养表达Oct-4细胞的新方法,同时,通过实时荧光定量PCR（Real-time PCR）初步探索二者在分子生物学特性方面的联系及差异。采用0.01%胰酶培养液,从同一只受孕中期绵羊的羊水和胎儿肾脏组织中各分离1株细胞。Real-time PCR分析结果表明,从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离的细胞均表达胚胎干细胞相关标志基因Oct-4、胚胎生殖细胞标志基因SSEA-1、主要组织相容性抗原MHC-Ⅱ、细胞凋亡基因Bax及抑制细胞凋亡基因Bcl-2,不表达MHC-Ⅰ、Nanog及TERT,因此,将羊水中表达Oct-4的细胞暂命名为羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid stem cells,AFSC),胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞暂命名为肾脏组织干细胞(renal tissue stem cells,RTSC)。相对定量分析结果显示,二者的Oct-4、Bax及Bcl-2基因的相对表达量存在明显差异。绵羊羊水中表达Oct-4的细胞（AFSC）和胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞（RTSC）体外悬浮培养7 d均能形成类胚体。试验成功建立了从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离培养表达Oct-4细胞的新方法,实时荧光定量PCR分析初步显示绵羊羊水中表达Oct-4的细胞和胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞具有相同的起源,并在体内处于一种动态的变化之中。     

蒙古羊羊水源干细胞分离培养及其成骨分化研究

试验旨在建立羊水源干细胞系并对其诱导形成成骨细胞的潜能进行研究。在胎牛血清浓度为15%的条件下对羊水源干细胞进行建系,并检测其类胚体形成能力;检测不同代数细胞的干细胞标志基因Oct-4、SH2、SSEA-1、Nanog、HLA-ABC、CD117的表达情况;利用地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸等因子进行诱导。结果表明,羊水源干细胞在体外可以持续增殖,悬浮培养形成的类胚体表达三胚层相关标记基因,经诱导可形成成骨细胞。试验成功分离了蒙古羊的羊水源干细胞并建系,且其具有向成骨细胞分化的潜能。     

肺干细胞的研究进展

干细胞是一类具有分化潜能的细胞,具有自我更新和高度增殖能力。肺干细胞是一类重要的成体干细胞,对维持肺脏稳态、损伤后的修复发挥着关键作用。近年来,肺干细胞的研究发展迅速,现对肺干细胞的分类来源、分化增殖、分离策略、表面标记、分化信号通路及病理学机理综述如下,并对其存在的问题作出了分析与展望。     

犬脂肪间充质干细胞的分离培养及分化潜能研究

为获得犬脂肪间充质干细胞,本试验取犬腹股沟皮下脂肪组织,分别利用组织培养法和酶消化法分离犬脂肪来源间充质干细胞,对比观察不同来源细胞的形态和增殖特征,并通过诱导液促进细胞向成骨细胞和成脂细胞方向分化,检测其分化潜能。结果表明,通过组织培养法培养的青年犬脂肪组织,可获得大量脂肪间充质干细胞,该细胞生长旺盛,形态均一,可分化为碱性磷酸酶染色阳性的成骨细胞和油红O染色阳性成脂细胞。组织培养法分离培养犬脂肪间充质干细胞操作简单,可为细胞移植治疗等研究提供充足的细胞来源。     

哺乳动物神经干细胞研究进展

神经干细胞是神经系统内保持持续增值和分化能力的细胞，目前对神经干细胞的来源、分布、增殖、分化都有较清楚的认识，但是还有许多问题有待解决。研究表明神经干细胞在治疗多种神经系统疾病方面有很大的应用价值，细胞移植是神经干细胞在临床应用中的一个十分有效的途径。     

骨髓间质干细胞的研究进展

由于骨髓间质干细胞具有多方面的优势,越来越受到人们的关注,人类对骨髓间质干细胞的研究也取得了重大进展。文章就骨髓间质干细胞的来源、研究历史、细胞形态、分离方法、分化潜能及其应用前景作一综述,旨在为相关研究提供参考。     

真皮间充质干细胞的研究进展

皮肤指位于体表包在肌肉外面的组织,是人体最大的一个器官。皮肤覆盖全身,承担着多种生理机能,是人体免疫的第一道防线。间充质干细胞是一种能够自我复制、多向分化、在体外能够扩增培养的成体干细胞。现已证明,皮肤组织中存在丰富的间充质干细胞,且皮肤在机体的更新速度较快,具有位于体表、易于取材、来源丰富等优点,解决了自体移植细胞来源不足、取材不便的难题。此外,在接受移植时,间充质干细胞会受到机体微环境的影响,成长为机体所需的细胞,对受损的组织进行及时修复。皮肤中存在的间充质干细胞的这一特点为有关皮肤疾病的治疗提供了新的解决思路,有良好的应用前景,近年来逐渐成为研究热点。     

类器官的研究进展及应用前景

类器官（organoids）来源于自组织和自我更新的干细胞，是利用干细胞的自组织特性进行体外3D培养后形成的细胞团，与来源器官密切相关，再现了来源器官的三维细胞结构，并为探索来源器官的发病机制提供了新的模型。类器官系统是由自分泌、旁分泌或邻分泌信号调节下的细胞，或者外源性添加的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）底物、小分子和生长因子等衍生而来，这些因素的相互作用创造了一个动态的环境，指导干细胞的自我更新和分化，以及细胞在类器官中的自我组装。诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）重编程方法结合3D类器官工具，使患者来源的类器官作为动物模型和人类临床试验之间的桥梁，是对细胞研究和在体试验的补充。在研究来源器官发育、生物学和病理生理学方面，类器官不仅是一种比传统细胞培养更具生理相关性的体外模型，而且还是再生医学和个性化医学领域中的新模型，有望成为研究营养素、药物、毒物及毒素等的作用机制及药物的筛选、再生医学等领域的重要模型。总之，类器官技术的发展增强了人们对器官和组织生理生化功能的认知。作者对肠、脑、肺脏、肝脏、子宫、卵巢等类器官培养和应用的研究进展进行综述，以期为类器官相关科研及应用提供参考。     

干细胞的研究和利用

干细胞是指分化程度低、多潜能的细胞 ,主要指胚胎细胞和幼稚细胞。人们对干细胞的研究和利用是基于细胞发育的全能性以及干细胞分化多潜能的特性。目前 ,对干细胞的研究引起各方面的强烈关注。有关胚胎干细胞及干细胞疗法得到了普遍重视 ,其中 ,造血干细胞被成功应用于临床疾病治疗。在对干细胞的研究和利用中取得了实质性突破的同时 ,也暴露出一些有关道德和伦理方面的社会问题。但是 ,随着对干细胞研究的深入 ,对干细胞的利用已展现出广阔的前景和产业化的可能。     

大鼠胰腺间充质干细胞的分离鉴定及体外诱导成脂和成骨研究

从新生大鼠胰腺中分离出间充质干细胞(MSCs),研究其分化潜能,为胰腺疾病的干细胞移植治疗探寻新的细胞来源。无菌条件取出新生3 d的大鼠胰腺,通过Ⅴ型胶原酶消化获得细胞,常规培养传代、贴壁筛选法纯化细胞、吉姆萨染色观察细胞形态、流式细胞仪测定表面标志CD34和CD44;用成骨、成脂诱导剂鉴定其分化潜能。结果显示,纯化细胞在成骨诱导剂作用下被诱导成成骨细胞,在成脂诱导剂作用下被诱导成脂肪细胞。证明所纯化的细胞为尚未分化的基质细胞,而不是组织的成体细胞,它具有多向分化潜能。     

精原干细胞研究进展

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)具有自我更新和分化产生子代的能力,并且SSCs本身就是生殖细胞,能将遗传信息传递给下一代,是雄性成体内唯一可复制的二倍体的永生细胞。SSCs在有限时间内可在体外培养扩增,并且能定向诱导为特异性细胞,可以为探讨精子的发生机制,治疗雄性不育和胚胎干细胞建系提供一条新的途径。通过对SSCs的体外培养,为细胞移植提供足够的来源,再植入受体内,达到修复损伤、治疗疾病的目的,是临床医学、干细胞生物工程库和组织工程理想的种子细胞之一,在干细胞生物学、医学、畜牧业等领域具有重要价值。本文对SSCs的生物学特性、分离培养、分化潜能和移植技术等做一概述。     

脂肪间充质干细胞的研究进展

干细胞(stem cells)不同于成熟细胞。首先是因为它能够在长时间内保持自我更新和扩增的能力。干细胞是未成熟的细胞,不具有组织特性,不发挥与组织相关的细胞功能。其次干细胞能够向多种细胞系分化。干细胞的这些特点使其成为良好的种子细胞来源。胚胎干细胞(ESC)是能够向各种细胞系分     

禽类胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)是一种具有无限增殖能力和全向分化潜能的细胞系,在胚胎发育分化、组织工程、转基因研究等方面具有重要的应用价值,是目前生命科学研究的热点之一.禽类产品是人类重要的蛋白质食物来源,开展禽类的胚胎干细胞研究,并将其用于生产实践,具有极其重要的意义.禽类ES细胞研究起步较晚,但进展较为迅速,许多学者已投入到禽类ES细胞的研究工作中.本文就禽类胚胎干细胞的建系、特征与鉴定及转基因操作等作一综述.     

胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化方法的研究进展

胚胎干细胞具有自我更新和多向分化潜能,有望成为治疗神经系统疾病重要的种子细胞来源。如何高效地诱导胚胎干细胞向特定神经细胞分化是目前研究的热点。本文就胚胎干细胞定向分化成神经细胞的3种方法:RA诱导法、谱系选择法和SDIA法及其移植研究做一综述。     

昆虫干细胞研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,按照其来源可分为胚胎干细胞和成年干细胞。昆虫中也同样存在多种干细胞。开展昆虫干细胞自我更新、发育命运决定、分化潜能等特性以及其与周围微环境相互关系的研究,对农林害虫的生物防治、经济昆虫的遗传育种以及一些生物反应器材料的利用,甚至对于人类疾病的治疗等都具有重要意义。以模式生物果蝇为主,介绍了昆虫干细胞的相关研究进展,重点集中在果蝇各种组织干细胞的鉴定与识别方面,包括研究较成熟的生殖腺内干细胞、中肠干细胞、马氏管干细胞、神经母细胞和造血干细胞。同时介绍了对干细胞维持起重要调控作用的各种信号途径的研究进展。这些昆虫干细胞的研究成果将为开展家蚕等鳞翅目昆虫的干细胞研究提供启示。     

小鼠胚胎干细胞向骨骼肌细胞分化的研究进展

近年来,胚胎干细胞的应用越来越广泛,在体外将小鼠胚胎干细胞诱导分化为肌肉细胞,并且利用这些分化得来的肌肉细胞治疗肌肉退行性疾病,一直是胚胎干细胞研究领域的热点,而胚胎干细胞的分化机制更是其中的难点。目前,用于诱导小鼠胚胎干细胞分化为骨骼肌细胞的方法很多,但分化的效率并不是很高,所以研究胚胎干细胞向骨骼肌细胞方向分化的机制显得尤为重要。文章仅就最近几年对小鼠胚胎干细胞向骨骼肌细胞方向分化的一些方法及其机制作一综述。