狐狸传染性脑炎的诊断与防控

正狐狸传染性脑炎,是由犬传染性肝炎病毒(犬腺病毒Ⅰ型,ICHV-1)引起的一种接触性、败血性传染病,以精神高度兴奋、肌肉痉挛、共济失调、呕吐便血为主要特征,本病具有发病急、传染快、危害严重等特点~([1-2])。狐狸脑炎首先在美国的银狐养殖场被发现,以后德国、法国、苏联、挪威、波兰、加拿大等国也都进行了报道,1949年证明与犬传染性肝炎病毒是同一种病毒。目前此病已广泛存在于世界各地,我国近年在一些养狐场也发现了此病。     

犬细小病毒的分离与鉴定

采用细胞培养法对疑似犬细小病毒的粪便和内脏进行了分离和鉴定,并对分离到的病毒进行生物学特性鉴定和动物回归试验。结果共分离到3株CPV,分离株在猫肾细胞F81产生明显细胞病变,血凝效价达1∶27～1∶210,细胞病变能被犬细小病毒阳性血清所抑制,接种幼犬后,分离株3可以引起试验犬发病死亡。     

表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定

利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变。电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72ku。在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性。     

犬腺病毒Ⅱ型病毒株的致弱及狐狸脑炎弱毒苗的研究

 将犬腺病毒Ⅱ型（CAV-2）病毒株用PK#-15细胞继代53代后毒力减弱，然后用A#-72细胞继续继代20代。经对继代毒的毒力测定和抗原稳定性试验证明，53-73代毒对狐无致病性，而且毒力稳定。我们选用60-69代毒做制苗种毒，成功地研制出狐狸脑炎弱毒苗。试验表明，该苗具有使用安全、免疫原性好等优点。狐免疫接种10#+(4、5)TCID50/ml疫苗，保护率可达100%，该苗免疫21天后狐狸能耐受10#+2CAV-1强毒的攻击，免疫期为一年。现场应用26754头份均取得良好的免疫效果。     

禽腺病毒4型的分离与初步鉴定

从疑似心包积液综合征的病死鸡组织中分离获得1株病毒,该病毒无血凝活性,提取其核酸经禽流感病毒、新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病毒、禽偏肺病毒和包涵体肝炎病毒特异引物扩增均为阴性,而经禽腺病毒4型特异性引物检测为阳性,则将其暂命名为禽腺病毒4型FJ1674株。将其扩增产物回收后克隆,经序列测定分析表明该株病毒与国内外禽腺病毒4型毒株的同源率为99.4%~100%;经遗传进化分析表明,其与禽腺病毒4型关系密切,共处同一分支。     

狐狸脑炎活疫苗(CAV-2C株)规模化生产工艺

开展了狐狸脑炎活疫苗(CAV-2C株)生产用毒种的制备与鉴定、狐狸脑炎活疫苗的制备,进行了狐狸脑炎活疫苗生产中关键工艺参数的优化和验证,建立了狐狸脑炎活疫苗规模化生产工艺。     

犬冠状病毒的分离及鉴定

为有效防治犬冠状病毒病,促进养犬业的健康发展。从疑似犬冠状病毒(CCV)症状病犬粪便中分离出1株病毒,从形态学、理化学、生物学等方面对该病毒进行了鉴定。细胞培养证实该病毒有致细胞病变效应。物理化学鉴定表明该分离病毒核酸类型为RNA,有囊膜,对氯仿和乙醚敏感,对1%胰蛋白酶不敏感,耐酸性较强,具有一定的耐热性,最高耐受限是50℃,无血凝性和红细胞吸附特性,符合犬冠状病毒的特点。中和试验进一步证明该分离病毒是一种犬冠状病毒;牧羊犬接种1 d后就出现了临床症状,所有攻毒犬扑杀后都有肠以及肠系膜淋巴结病变。该分离病毒是一种RNA病毒,可以引起试验犬出现典型犬冠状病毒病症状,是犬冠状病毒。     

犬腺病毒间接免疫荧光检测方法的建立

用犬腺病毒制作的抗原玻片,通过确定最佳一抗和荧光抗体浓度,特异性试验和敏感性试验,建立了犬腺病毒间接免疫荧光方法,可用于狐狸脑炎的诊断.     

Ⅱ型犬腺病毒C株E1、E3区克隆测序及E3区标记载体瞬时表达

设计4对引物，对犬Ⅱ型腺病毒2C（CAV-2C）株E1、E3区进行了扩增，将片段进行T克隆、测序，并构建了E3区缺失、标记EGFP的转移载体，在MDCK和293-T细胞上成功表达，但在MDCK细胞中的转染效率较低。本研究为犬腺病毒活病毒载体构建的研究提供基础。     

牛传染性鼻气管炎病毒XA株的分离与鉴定

【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增并测序。【结果】分离病毒在MDBK细胞上产生了明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,偶见含有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRV gB特异性引物进行PCR,可扩增出1 182 bp的特异性条带,目的序列与已发表的IBRV基因组序列一致。【结论】该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV XA株。     

犬腺病毒2型的致弱和狐脑炎弱毒疫苗的研究

将犬腺病毒2型(CAV—2),用PK_(15)细胞继代53代后毒力减弱,然后用A_(72)细胞继续继代20代。经对继代毒的毒力测定和稳定性试验证明,53—73代毒对狐无致病性,而且毒力稳定,我们选用60—69代毒作制苗种毒成功地研制出狐狸脑炎弱毒苗。试验表明,该苗具有制造技术先进、使用安全、免疫原性好等优点。狐免疫10~(4.5)TCID_(50)/ml接种疫苗,保护率可达100％。该苗免疫21天后能耐受10~(-2)CAV—l强毒的攻击,免疫期为一年。现场应用26754头份均取得良好的免疫效果.     

一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Shanghai/Y20/2006的全基因组序列测定及遗传演化分析

为了解鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Shanghai/Y20/2006(DK/SH/Y20/06)的来源、特征及其分子演化规律,进一步丰富水禽流感病毒的基因库,对该病毒8个基因片段分别进行了扩增和序列测定,利用分子生物学软件对测序结果进行序列分析,并与GenBank登录的相关病毒进行了遗传演化分析。结果表明,DK/SH/Y20/06的HA基因切割位点附近的氨基酸序列(PEKASR↓GLF)符合低致病力AIV的特征,其分子遗传演化关系属于欧亚分支;NA基因与A/mallard/Yanchen/2005(H4N6)在同一分支内,核苷酸序列同源性为98.3%;而PB2、PB1、NP、PA基因与目前在国内流行的H6亚型禽流感病毒关系密切;M基因与A/environment/Korea/CSM05/2004(H3N1)处于同一分支;而NS基因与A/wild duck/Korea/YS44/2004(H1N2)同源性最高。且DK/SH/Y20/06的8个基因与美洲H4N6亚型AIV分离株均不处在同一遗传进化分支上,相互之间遗传关系较远。可见,DK/SH/Y20/06可能是由H4N6、H6N2、H6N5、H3N1和H1N2等不同亚型来源的基因在鸭体内经过复杂重组演变的一株重组病毒。     

狐狸脑炎的免疫效果监测(英文)

[目的]检测昌黎地区狐狸脑炎的免疫效果。[方法]从昌黎县泥井一养殖小区随机选择4个养殖户,85份取狐狸全血,制备血清,利用ELISA方法检测狐狸脑炎抗体,根据ELISA结果,计算样品实际浓度并判定其(CAV-1)抗体的存在与否。[结果]通过对85份血清样品的检测,4户养殖户狐狸脑炎免疫情况分别为:养殖户1的15份血清中,14例阳性,1例阴性,免疫合格率达93%;养殖户2的14份血清中,12例阳性,2例阴性,免疫合格率达到86%;养殖户3的30份血清中,29例阳性,1例阴性,免疫合格率达到97%;养殖户4的26份血清中,24例阳性,2例阴性,免疫合格率达到92%。该次检测免疫总合格率为93%。[结论]昌黎地区狐狸脑炎免疫效果良好,个别狐狸需要加强免疫。     

不同苜蓿品种引种筛选研究初报

对引自国内外17个苜蓿品种的耐寒性、抗病性与生产性能等主要生物学形状,于2002 ～2004年进行了田间栽培比较试验研究,结果表明:在耐寒性的表现上,17个品种中,在冬季地表具有厚积雪的条件下,除了霍普兰德和WL323越冬率低于85;外,其它品种均在90;以上;新牧1号杂花苜蓿和阿尔冈金在其它品种染病均严重的情况下,表现出较强的抗病能力 ,受害面积比例低于20;以下;王后、DK120、霍普兰德、WL323、DK134、新牧1号、德宝和三得利,其生长和再生生长速度表现较快;从各品种的干草产量来看,多数品种表现出具有较高的生产性能,年可收4茬草,DK124、DK120、德宝、亮牧2号、霍普兰德5个品种第一年就均超过了10 000 kg/hm2.从生育期、生长特性、抗病性、干草产量等方面综合评价,以新牧1号杂花苜蓿表现最为优秀,其次为DK124、亮牧2号和霍普兰德.     

耐盐丰产小麦品种德抗961的耐盐生理机制

以山农215953(SN215953)为对照,室内200 mmol/L NaCl模拟盐胁迫条件,从幼苗生长和光合机构两个方面研究了德抗961的耐盐生理特性。结果表明:盐胁迫条件下德抗961(DK961)地上部生物量(鲜重、干重)、相对含水量均高于SN215953,而其株高显著大于SN215953,这有助于对细胞内的盐分进行稀释,即“稀盐”性,保护细胞质不受离子毒害。同时,德抗961叶片的希尔反应活力和Ca2+-ATPase活性受抑制的程度较小,光合能力相对较高。分析认为,以上两个方面可能是德抗961抗盐性强的重要原因。     

5株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因的序列分析

为了从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒（AIV）在广西的遗传变异情况,对5株不同年代的广西H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行克隆测序及同源性、遗传进化分析。结果表明,5株分离株均为低致病性AIV（LPAIV）,HA、NA基因均属于欧亚谱系中的DK/HK/Y280/97（第I亚群）,与我国代表株CK/BJ/1/94HA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.5%～95.9%,NA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.8%～95.8%。分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05HA基因第226位氨基酸由谷氨酰胺（Gln）突变为亮氨酸（Leu）,具备人类流感病毒的受体特征,而在糖基化位点方面,除了CK/GX/6/00HA基因的第218位发生变异以外,5株分离株HA基因上其余各糖基化位点均未发生变异;分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05、QA/GX/B1/06NA基因均缺失第63、64、65位3个氨基酸,导致1个糖基化位点缺失,而CK/GX/6/00、WB/GX/A1/06NA基因则未发生缺失。     

VP3基因突变鸡传染性贫血病毒的构建

以含CAV标准毒CuX-1株VP3突变体的pTCAVM阳性质粒为基础,通过重叠PCR在基因组位点nt682、nt808、nt829处进行定点突变,构建pTCAVM1、pTCAVM2、pTCAVM3突变体;在此基础上,对上述3个位点进行组合定点突变,构建成功pTCAVMa、pTCAVMb、pTCAVMc突变体;此外,成功构建克隆出3个位点均发生突变的pTCAVMd突变体。所有的突变体都保证VP3定点突变位点的碱基变化,同时不引起VP2蛋白的氨基酸残基序列发生变化,保证了突变体和原始病毒抗原性的一致;将得到的突变体转染易感细胞MSB1,获得具有复制特性的病毒,将病毒接种1日龄的SPF雏鸡,发现病毒可以在鸡体内复制,并引起CAV感染的病理学变化。本研究成功获得了多株感染性克隆毒株,为研究CAV病毒致病性以及开发鸡贫血弱毒活疫苗奠定了坚实的基础。     

CaCl_2对盐胁迫下小麦种子萌发及生理效应的影响

研究了盐胁迫对2种不同基因型冬小麦萌芽的影响及CaCl2对盐胁迫的缓解效应。结果表明,盐胁迫下,德抗961(抗盐)和济南17(盐敏感)小麦种子的发芽率、芽长、根长、α-淀粉酶活性、游离氨基酸含量均下降,济南17下降幅度大于德抗961;CaCl2处理均能提高小麦种子发芽率、α-淀粉酶活性、游离氨基酸含量,促进芽和根生长,缓解盐胁迫对小麦种子萌发的抑制作用;对济南17的缓解作用显著好于德抗961。