辣蓼总黄酮提取工艺的筛选及优化

为了筛选辣蓼总黄酮的最佳提取工艺并优化，采用热水提取法、超声提取法、乙醇加热回流法、索氏提取法分别对辣蓼总黄酮进行提取，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法显色后，紫外-分光光度法测定总黄酮含量。最佳提取方法单因素试验基础上，采用正交试验优化提取工艺。四种提取方法总黄酮含量分别为17.97、52.90、50.97、41.80 mg/g，超声提取法优于其它几种提取方法。最佳工艺条件乙醇浓度60％，料液比1∶30，超声提取时间50 min，超声提取温度80 ℃，提取总黄酮含量53.3 mg/g。超声提取法有利于辣蓼总黄酮的溶出，该方法可为生产高质量的辣蓼提取物提供理论依据。     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。     

响应面法优化紫苏叶总黄酮提取工艺

文章以紫苏叶为研究对象，采用响应面分析法优化紫苏叶总黄酮的提取工艺。通过醇提法对紫苏叶总黄酮进行提取，首先对提取时间、提取温度、乙醇浓度和料液比4个单因素条件进行研究，然后进行响应面试验设计，优化分析紫苏叶总黄酮的提取工艺。结果表明，此方法提取紫苏叶中总黄酮的最佳工艺为：提取时间4.5 h，乙醇浓度68%，提取温度65℃，料液比1:55(g/mL)，其理论提取率为7.48%，实际提取率为7.43%，提取温度、乙醇浓度、料液比、提取时间4个单因素对提取率的影响程度由大到小。验证试验结果表明，其结果与响应面分析预测的结果一致，该模型可靠，该研究为提高紫苏叶总黄酮提取率提供了参考。     

正交试验法优化紫苏叶中总黄酮提取工艺及体外抗氧化活性研究

试验以紫苏叶为研究对象,在单因素试验基础上,通过正交试验优化紫苏叶总黄酮的提取工艺,探讨总黄酮的抗氧化活性。以紫苏叶总黄酮得率为考察指标,对乙醇浓度、液料比、提取温度和提取时间进行优化。结果表明,4个因素对紫苏叶总黄酮得率影响的主次顺序为：提取温度>乙醇浓度>液料比>提取时间。紫苏叶总黄酮最优提取工艺参数为乙醇浓度50%、液料比20 mL/g、提取温度70℃和提取时间45 min。在此条件下,紫苏叶总黄酮得率为4.05%。紫苏叶总黄酮对DPPH自由基与羟自由基具有较强的清除作用,其IC₅₀值分别为160 mg/L和196 mg/L。研究表明,紫苏叶总黄酮具有较强的抗氧化性能,是一种优质的天然抗氧化物质。     

微波辅助提取茄子根中总黄酮工艺条件研究

以烘干茄子根为原料,以茄子根中总黄酮提取率为指标,利用微波辅助提取茄子根中总黄酮。选取乙醇浓度、微波时间、微波温度、微波功率、料液比为单因素试验,在单因素试验基础上,以正交试验设计方法优化提取工艺。结果表明,最佳工艺条件为:乙醇浓度为80%、微波时间为4min、微波温度为60℃、微波功率为300W、料液比1∶20(g/mL),在此最佳条件下,茄子根总黄酮的提取率达1.652%。     

响应面法优化超声辅助提取佛手瓜总黄酮的工艺研究

本试验研究了超声辅助提取佛手瓜中总黄酮的工艺。在单因素试验基础上,考察乙醇浓度、超声温度、液料比和超声时间对佛手瓜总黄酮提取率的影响。根据Box-Benhnken中心组合试验设计原理,采用响应面法对佛手瓜总黄酮提取的关键参数进行了优化,建立了佛手瓜总黄酮提取率的数学模型。结果表明:4个因素对佛手瓜总黄酮提取率影响的大小顺序是超声温度超声时间液料比乙醇浓度。佛手瓜总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度69%、超声温度71℃、液料比25 m L/g、超声时间31 min,在此条件下总黄酮提取率为3.402%,与理论预测值相对误差为0.526%。与传统热水浸提法相比,提取率提高了12.69%。     

通江产辣木叶总黄酮的提取工艺优化及含量测定

为了考察通江产辣木叶总黄酮的提取方法和含量测定,试验采用浸渍法,以乙醇溶液作提取溶剂,分别考察乙醇浓度、料液比、温度和时间对通江产辣木叶总黄酮提取率的影响,并利用响应面法考察不同因素、不同水平对辣木叶总黄酮提取率的影响情况,筛选出辣木叶总黄酮的最佳提取工艺,测定8、9、10月通江产辣木叶总黄酮的含量。试验结果表明,辣木叶总黄酮的最佳提取条件为:料液比1∶30(g/mL)、提取时间30 min、提取温度55℃、乙醇浓度75%。在最佳提取工艺条件下,辣木叶总黄酮提取率达3.018%。利用最佳提取工艺进行8、9、10月份采摘的辣木叶总黄酮的提取,得出10月份辣木叶总黄酮的含量最高。     

超声辅助提取法对黄芩总黄酮含量的影响

为从不同超声条件中,筛选出黄芩总黄酮的最佳提取工艺。用超声波辅助技术提取黄芩总黄酮,用亚硝酸钠—硝酸铝比色法测定总黄酮含量。通过单因素和正交试验,确定了黄芩总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度为50%,超声处理时间为25 min,料液比1∶25,超声处理温度为70 ℃。在该条件下,总黄酮提取量为15.15 mg/g。     

纤维素酶辅助提取金樱子总黄酮单因素试验

为优化纤维素酶辅助提取金樱子总黄酮的提取工艺,通过单因素试验考察乙醇浓度、液料比、提取时间、纤维素酶用量、p H值、提取次数等6个因素对金樱子总黄酮得率的影响,结果其最佳提取工艺条件为:乙醇浓度40%、液料比30∶1、提取时间120 min、纤维素酶用量1.0%、p H值6、提取温度60℃、提取2次,在该提取条件下,金樱子总黄酮得率为(79.30±1.59)mg/g。提示纤维素酶辅助提取金樱子总黄酮可行、得率较高。     

超声波法提取玉米须中总黄酮的最佳条件研究

为了提高玉米须中总黄酮的得率,试验采用L9(34)正交试验,对提取温度、乙醇浓度、料液比和提取时间等影响因素进行优化,以总黄酮含量为评价指标,采用分光光度法测定其含量。结果表明:玉米须中总黄酮的最佳提取工艺为,加入料液比为1∶30的50%乙醇,在50℃下超声提取6 min,优选得到的工艺稳定、可行。     

响应面法优化牛至粉发酵工艺及其抑菌能力研究

【目的】采用复合菌发酵牛至粉,以期提升其营养品质。【方法】以牛至粉、玉米粉和豆粕粉为底物,以抑菌能力作为评价指标,依次利用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和中心复合试验等方法对复合益生菌固态发酵牛至粉的工艺条件进行优化,并测定发酵牛至粉的抑菌能力、pH、乳酸含量、抗氧化能力、蛋白含量和挥发油含量。【结果】发酵时间、发酵基质水分含量和乳酸菌接种量是影响发酵的主效应因素,优化后最佳发酵工艺为：发酵底物组成比例为牛至粉：玉米粉：豆粕粉=4：1：5,枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和酵母菌接种量均为5×10⁶ CFU/g,乳酸菌接种量为1.87×10⁷ CFU/g,发酵温度为25℃,发酵时间为130 h,水分含量46.7%。在此条件下,发酵牛至粉组合物对大肠杆菌抑菌率达99.98%。较未发酵牛至粉而言,发酵组合物pH显著降低（P<0.05）,抗氧化能力显著提高（P<0.05）,水溶蛋白和酸溶蛋白均显著提高（P<0.05）,百里香酚和香芹酚的含量显著提高40%以上（P<0.05）。与未发酵牛至粉相比,发酵牛至粉对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和副溶血弧菌的抑菌能力均显著提高（P<0.05）。【结论】响应面法优化牛至粉发酵工艺后,其有效成分百里香酚和香芹酚的含量均显著提高40%以上,且抑菌能力和营养品质均显著提高。     

发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响

试验以产气荚膜梭菌感染肉仔鸡建立坏死性肠炎模型,研究发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响。将336只1日龄爱拔益加肉仔鸡随机分成4个处理组,每个处理6个重复。4个处理组分别为对照组、感染组、感染＋LF组（日粮添加1×10⁹ CFU/kg发酵乳杆菌）、感染＋BC组（日粮添加1×10¹⁰ CFU/kg凝结芽孢杆菌）。所有感染肉鸡在14~21 d经口接种A型产气荚膜梭菌。试验期为28 d。结果显示：与对照组相比,灌服产气荚膜梭菌显著降低22~28 d肉鸡的日均采食量（P<0.05）,显著增加28 d十二指肠和空肠损伤评分（P<0.05）,显著提高21 d肉鸡盲肠的产气荚膜梭菌和大肠杆菌数量,显著降低28 d回肠产气荚膜梭菌数量（P<0.05）。与感染组相比,日粮添加发酵乳杆菌显著提高21 d肉鸡回肠的乳杆菌属数量（P<0.05）,显著降低21 d盲肠大肠杆菌的数量（P<0.05）;日粮添加凝结芽孢杆菌显著降低28 d肉鸡十二指肠损伤评分（P<0.05）,显著降低21 d十二指肠隐窝深度（P<0.05）,显著提高21 d空肠绒毛高度与隐窝深度的比值（P<0.05）,显著降低21 d肉鸡回肠和盲肠的大肠杆菌数量（P<0.05）,显著提高28 d肉鸡回肠乳杆菌属数量（P<0.05）。综上所述,日粮中添加发酵乳杆菌或凝结芽孢杆菌均对感染肉鸡的肠道微生物具有调控作用;其中添加凝结芽孢杆菌有利于肠道绒毛发育,缓解肠道损伤,一定程度上提高了肉鸡的生长性能,而发酵乳杆菌没有缓解肠道损伤的作用。     

紫锥菊根中菊苣酸提取工艺及对氧化应激肠道细胞的保护作用研究

【目的】优化紫锥菊根中菊苣酸提取工艺，并测定菊苣酸在肠道细胞中的抗氧化效果。【方法】试验选用有机溶剂乙醇作为紫锥菊根粉末（80目）提取溶剂，对提取溶剂浓度、提取温度、提取时间、提取次数以及原料与溶剂的比例等因素进行分析，得到每个因素下菊苣酸得率和该因素的对应曲线，再在单因素基础上，选择溶剂浓度（30%、40%、50%）、提取温度（60、70、80 ℃）、提取时间（1、2、3 h）和料液比（1∶12、1∶15、1∶18）4个因素3个水平设计正交试验。用不同浓度H₂O₂（100、200、400、600、800、1 000 μmol/L）处理人结肠腺癌细胞（Caco-2）与猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）建立氧化应激模型。分别使用不同浓度菊苣酸（0、100、200、400、600、800、1 000 μmol/L）处理氧化应激前后的细胞24 h，应用MTT法，分别测定菊苣酸对两种肠道细胞氧化应激的保护和缓解效果。【结果】菊苣酸最佳提取条件为：50%浓度的乙醇在70 ℃下采用1∶18的料液比，超声辅助提取2 h，得率为1.89 mg/g。细胞抗氧化试验结果显示，菊苣酸对Caco-2和IPEC-J2两种肠道细胞氧化应激均具有保护和缓解效果，对Caco-2细胞的保护作用和缓解作用的半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为172.6和207.5 μmol/L，对IPEC-J2细胞的保护作用和缓解作用的IC₅₀值分别为133.1和196.5 μmol/L。【结论】试验得到了紫锥菊根粉中菊苣酸的最佳提取方案，为工业化高效提取菊苣酸提供了参考；同时菊苣酸对氧化应激的肠道细胞具有很好的保护作用，经计算其保护作用的IC₅₀值较缓解效果更小，进一步证明了菊苣酸具有成为肠道抗氧化剂的潜力。     

重组产气荚膜梭菌β毒素突变体的表达与免疫保护性分析

旨在获得产气荚膜梭菌β毒素（CPB）的重组突变体,并评价其毒力及免疫保护性。对已知的产气荚膜梭菌CPB编码基因进行优化设计,同时引入4个氨基酸突变位点,分别是第212位的精氨酸突变为谷氨酸,第268位的亮氨酸突变为甘氨酸,266位的酪氨酸和275位的色氨酸突变为丙氨酸。此外,在该基因5'端添加Th细胞表位（T）和鞭毛蛋白（flagellin）N末端的编码序列,经人工合成获得重组基因片段（GTF_NCPB_m4）。将GTF_NCPB_m4克隆至原核表达载体pET-30a（＋）中进行表达与纯化,获得重组蛋白rTF_NCPB_m4。利用Western blot方法检测rTF_NCPB_m4与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性,并检测rTF_NCPB_m4对小鼠的毒力。随后,以rTF_NCPB_m4免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测家兔血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价。结果表明,rTF_NCPB_m4主要以包涵体的形式表达且能与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应。小鼠安全性试验显示,50 μg的rTF_NCPB_m4对小鼠仍无致死性;免疫rTF_NCPB_m4后,每毫升家兔二免抗血清可中和10~20个小鼠最小致死量（MLD）的C型产气荚膜梭菌毒素;1个家兔MLD的C型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护。以上结果说明,rTF_NCPB_m4在丧失毒力的同时保留了良好的免疫原性,从而为C型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的数据。     

Expression and Protective Efficacy of Clostridium perfringens β toxin Derivative

This study was conducted to obtain the Clostridium perfringens β toxin (CPB) derivative and to evaluate its virulence and immunoprotection. Based on the known sequence, four amino acid mutations, R212E, L268G, Y266A and W275A, were introduced into the gene of Clostridium perfringens CPB. Meanwhile, genes of Th cell and N-terminal of flagellin were added to 5' of the CPB gene, respectively. Then the gene GTF_NCPB_m4 was optimized and synthesized, and was subsequently cloned into the prokaryotic expression vector pET-30a (＋) for expression and purification to get the recombinant protein, rTF_NCPB_m4. Reactivity of rTF_NCPB_m4with antiserum of Clostridium perfringens type C crude toxins was detected by Western blot. Meanwhile, the toxicity of rTF_NCPB_m4 to mice was evaluated. According to the method prescribed in Chinese Veterinary Pharmacopoeia (2015), rabbits were immunized with rTF_NCPB_m4 to prepare antiserum and detect the neutralizing titer against Clostridium perfringens type C crude toxins. Results showed that rTF_NCPB_m4 was presented predominantly in an insoluble form (inclusion bodies), and it could react with the antiserum of Clostridium perfringens type C crude toxins. rTF_NCPB_m4 with an injection volume of 50 μg was still not fatal to mice. Sera from rabbits immunized with rTF_NCPB_m4can neutralize 10-20 mouse minimum lethal doses (MLD) of Clostridium perfringens type C crude toxins after twice immunization. Moreover, rabbits immunized with rTF_NCPB_m4 can fully resist 1 rabbit MLD of Clostridium perfringens type C crude toxins challenge, whereas all of the rabbits died (4/4) in the control groups. These data suggest that rTF_NCPB_m4 is a potential vaccine candidate for the subunit vaccine of Clostridium perfringens type C.     

金樱子总黄酮的含量测定及酶提工艺优化

为了测定金樱子中的总黄酮含量,并对其纤维素酶辅助提取工艺进行优化,本研究以芦丁为对照品,采用双波长分光光度法,确定测定波长500 nm,参比波长580 nm,对金樱子中的总黄酮含量进行测定;以总黄酮得率为评价指标,考察提取温度、乙醇浓度、纤维素酶用量、液料比等4个因素对总黄酮得率的影响,正交优化纤维素酶辅助提取金樱子总黄酮的工艺。结果表明,在19.90~398.00 μg范围内,芦丁的质量与吸光度差值ΔA呈良好的线性关系（r=0.9981）,标准曲线方程为y=0.0008x-0.0047,该方法下测得其得率为87.94 mg/g,平均加样回收率98.23%,相对标准偏差为8.77%;正交试验优化的纤维素酶法辅助提取金樱子总黄酮的最佳工艺条件为：提取温度80℃、乙醇浓度40%、纤维素酶用量0.5%、液料比40：1、提取时间90 min、pH为6.0、提取次数2次,且各因素对金樱子总黄酮提取得率的影响顺序为：提取温度 > 纤维素酶用量 > 液料比 > 乙醇浓度;在该提取条件下,金樱子总黄酮得率为（93.35±3.15）mg/g。因此,纤维素酶法辅助提取金樱子总黄酮可行,得率较高,条件温和。     

丁酸梭菌对高胆碱饮食小鼠血浆游离脂肪酸组成的影响

【目的】分析丁酸梭菌对高胆碱饮食造成脂代谢异常小鼠血浆游离脂肪酸组成(FFA)的影响,以阐明丁酸梭菌调节高胆碱膳食脂代谢的作用机制。【方法】选取4周龄健康的雄性昆明小鼠24只,随机分为3组：正常组、模型组和丁酸梭菌组,每组8只。高胆碱饮食造模8周后,给药7 d,禁食12 h,采集血浆、肝脏、附睾脂肪垫和肾周脂肪,对肝脏、脂肪称重,利用生化仪检测血脂水平;通过HE染色及油红O染色分别观察肝脏组织结构变化及脂滴沉积程度;利用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术检测小鼠血浆氧化三甲胺(TMAO)含量;利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术及多元统计分析研究血浆中FFA组成。【结果】与模型组相比,丁酸梭菌组小鼠体重、脂肪增长得到显著抑制(P<0.05),给予丁酸梭菌后小鼠肝脏脂肪沉积减少;丁酸梭菌显著或极显著降低了高胆碱饮食小鼠血浆中甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量(P<0.05;P<0.01),并使高密度脂蛋白(HDL-C)含量显著升高(P<0.05);丁酸梭菌灌胃后,高胆碱饮食小鼠血浆TMAO浓度显著降低(P<0.05);丁酸梭菌可显著降低高...     

响应面法优化琼辣蓼总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究

为优化海南辣蓼总黄酮的提取工艺条件并探讨总黄酮体外抗氧化活性,采用热回流提取海南辣蓼总黄酮,以提取液中总黄酮的百分含量为考察指标,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken 设计(BBD) 对影响提取工艺的因素液料比、提取时间及乙醇体积分数进行分析,应用响应面法优选最佳提取工艺;采用清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 自由基和羟基自由基的方法,对最佳工艺所得总黄酮进行抗氧化活性评价。结果表明：海南辣蓼总黄酮的最佳提取工艺条件为：液料比1∶15、提取时间60 min、乙醇体积分数48%,在此条件下总黄酮提取率为10.101%。总黄酮对羟基自由基和DPPH自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为2.95 mg/mL和0.46 mg/mL。该方法优选的工艺合理,操作简便,试验周期短,且提取的海南辣蓼总黄酮具有良好的抗氧化活性,为琼辣蓼的深入开发利用提供了实验依据。     

茶叶总黄酮的提取工艺研究

黄酮类物质是茶叶的重要组成成分。本试验采用乙醇热提法提取茶叶中黄酮,结合正交试验设计研究时间、温度、乙醇浓度以及固液比4个因素对茶叶黄酮提取得率的影响。结果表明:各个因素对茶叶黄酮提取得率影响的主次顺序为乙醇浓度>固液比>温度>时间,茶叶黄酮的最佳提取条件为提取时间1h、提取温度80℃、乙醇浓度70%、固液比(g/ml)1:20。     

Apparition of Clostridium sp. and Bacteroides in the intestine of the newborn delivered by cesarian section

Anaerobic flora plays a key role in preventing intestinal colonization with potential pathogens. Nowadays, the mechanisms involved in the colonization resistance provided by the anaerobic microflora are to be clarified. Numerous factors seem to intervene in the regulation of the intestinal flora.

The purpose of the present study was to correlate the presence or relative absence of Clostridium sp. and Bacteroides with the colonization by C. perfringens, which is involved in lethal infections in an immunologically compromised host.

The intestinal bacterial colonization of 20 newborns delivered by cesarian section was assessed sequentially over the first 14 days of life. C. perifringens is a strongly reducing microorganism and undoubtedly causes a decrease in the oxidoreduction potential of the newborn feces favouring the subsequent colonization by other putrefactive bacteria. C. perfringens seems to be the precursor for installation of putrefactive bacteria, as Bacteroides and other Clostridium sp.