复方酸制剂体外抗新城疫病毒试验

[目的]探讨复方酸制剂体外抗新城疫病毒（NDV）的活性,为研制新型抗NDV制剂提供理论依据。[方法]采用鸡胚成纤维细胞（CEF）培养法,观察细胞病变（CPE）,并用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,计算病毒抑制率,评价复方酸制剂的体外抗NDV作用。[结果]随着复方酸制剂浓度的增加,CPE逐渐减弱,病毒抑制率明显升高,当浓度为1.0mg/ml时,病毒抑制率可达70.04%。[结论]复方酸制剂在体外具有明显的抑制NDV增殖作用。     

黄芪多糖、淫羊萑多糖和淫羊萑总黄酮的城疫毒感染细胞的影响

将黄芪多糖（APS）、淫羊萑多糖（EPS）、淫羊萑总黄酮（EF）分别与新城疫病毒（NDV）Ⅰ、Ⅳ系以3种顺序加入到培养24h的鸡胚成纤维细胞（CEF）中，即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、病毒和中药混合感作后同时加入。于病毒接种后72h测定NDVⅠ系的半数组织培养感染剂量（TCID50）和NDVⅣ系的血凝效价，以评价3种中药成分对NDV感染细胞的影响。结果表明，APS和EPS仅在先于病毒加入时对NDV有抑制作用，而EF无论以何种方式给药均呈抑制作用。提示它们有一定的抗病毒作用，且与其浓度有相关性。     

复方糖苷抗新城疫病毒感染作用

采用2种方法研究了复方糖苷抗新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)感染作用。一是鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)培养法,通过观察NDV CPE的形成及测定CEF OD值的变化,计算病毒抑制率等指标,综合评价复方糖苷在细胞水平上抗NDV作用,并从直接灭活病毒、阻断病毒吸附与生物合成及释放等环节,探讨了复方糖苷的抗NDV途径。二是将复方糖苷稀释成1 200,1 000,800,600,300μg/m L 5种浓度与100 EID50 NDV液混合后接种9日龄SPF鸡胚,于72 h后统计鸡胚的存活数并测定尿囊液血凝效价(HA),依此判定复方糖苷在鸡胚内抗NDV作用。结果表明:随着药物浓度的增加CPE的特征逐渐减弱,OD值明显升高,病毒抑制率增大,当复方糖苷质量浓度为600μg/m L时对NDV具有显著的直接杀灭与阻断吸附作用。HA在1 200,1 000μg/m L时均为0。表明复方糖苷具有显著的抗NDV感染作用。     

PK15、Vero、BHK、CEF细胞增殖猪伪狂犬病病毒的比较

为了研究伪狂犬病病毒,从而预防该病的发生。[方法]对PK15、Vero、BHK、CEF 4种细胞增殖猪伪狂犬病病毒后细胞病变进行比较,并对4种细胞增殖的PRV分别进行毒价测定。[结果]4种细胞增殖PRV毒价分别为:PK15细胞107.15TCID50/ml;BHK细胞107.00TCID50/ml;Vero细胞106.96TCID50/ml;CEF细胞106.70TCID50/ml。[结论]PRV毒株在不同细胞上增殖CPE表现不同,毒价也存在差异。     

5种中药总黄酮成分体外抗病毒作用观察

为筛选抗病毒中药黄酮成分复方的主药,采用MTT法观察了淫羊藿、黄芩、忍冬藤、三七和菟丝子5种中药总黄酮成分对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长的影响,并采用先加黄酮后接种病毒、先接种病毒后加黄酮、黄酮与病毒同时感作3种加药方式观察了各黄酮成分抗新城疫病毒(NDV)感染CEF作用。结果表明:5种中药总黄酮成分在一定质量浓度下均能促进CEF增殖或延长细胞存活时间;在安全浓度范围内的5个稀释浓度下,各总黄酮成分均有不同程度的抗病毒活性,尤其以淫羊藿黄酮在先加黄酮后接种病毒和先接种病毒后加黄酮且质量浓度为31.30μg·mL-1时,以及31.30μg·mL-1黄酮与病毒同时加入时的A570值显著大于病毒对照与细胞对照;黄芩黄酮在先接种病毒且浓度为7.80～3.90μg·mL-1时,其A570值显著大于病毒对照(P<0.05)和细胞对照(P<0.05)。最高病毒抑制率以淫羊藿黄酮最高,其次是黄芩黄酮,分别达189.70%和158.82%。结论:淫羊藿总黄酮和黄芩总黄酮具有较显著的体外抗病毒效果,可作为抗病毒中药总黄酮成分复方的主药成分。     

Alloferon1体外抗犬细小病毒研究

[目的]开发出一种用于防治犬细小病毒病的新药物。[方法]将不同剂量的Alloferon1添加于病毒感染前、病毒感染同时、病毒感染后的细胞培养液中进行体外抗犬细小病毒试验。[结果]FK81细胞接种CPV后2 d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 d后病变细胞呈葡萄串状脱落。在80%细胞产生病变时收取病毒,TCID50为10-6.2～10-6.3/ml。对照组细胞上清的血凝反应为阴性,接种病毒细胞上清的血凝价为212。对照组的8孔细胞生长正常,接种病毒的8孔细胞全部产生病变。250.0和25.0μg/ml 2个浓度的抗病毒作用较强,2.5μg/ml的抗病毒作用较弱。在病毒感染前或同时加入多肽的抗病毒作用较好,而在病毒感染后加入多肽的抗病毒作用较弱。[结论]Alloferon1可以用于犬细小病毒病的防治。     

构树叶提取物体外抗病毒活性研究

[目的]研究构树叶提取物的抗病毒活性。[方法]采用MTT法,观察构树叶的水、75%乙醇和50%丙酮提取物及不同给药方式对NDV、IBDV、ILTV和IBV等病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)活性的影响,探讨构树叶提取物体外抗病毒活性及其作用机制。[结果]乙醇和丙酮提取物能显著提高NDV感染的CEF细胞活性,丙酮提取物能显著提高ILTV和IBV感染的CEF细胞活性,但对IBDV诱导的CEF细胞病变无影响。经丙酮提取物预处理的CEF细胞对NDV或ILTV感染的抵抗力呈上升趋势。[结论]构树提取物中的有效成分可能通过阻断病毒对宿主细胞的识别和粘附发挥其抗病毒活性。     

芝芪菌质多糖对CEF的增殖和抵抗NDV感染的研究

[目的]明确芝芪菌质多糖是否是芝芪菌质提高动物免疫力的有效成分。[方法]用不同浓度的乙醇对芝芪菌质水提物进行分级沉淀,得到3种芝芪菌质多糖(GAP30、GAP60和GAP90),采用中性红染料吸收法,研究其对鸡胚成纤维细胞(CEF)增殖的影响及抵抗NDV感染的效果。[结果]GAP30、GAP60、GAP90的得率分别为0.37%、0.70%、1.04%,表明乙醇分级沉淀已将芝芪菌质中的多糖成分提取完全。GAP30、GAP60在浓度为1×10-1、1×10-2mg/ml时能显著促进CEF增殖,GAP90在浓度为1×10-3mg/ml时即能显著促进CEF增殖。GAP30、GAP60在浓度为1×10-2mg/ml时能显著抵抗NDV感染,GAP90在浓度为1×10-1、1×10-2mg/ml时能显著抵抗NDV感染。[结论]芝芪菌质多糖能不同程度地促进CEF增殖、抵抗NDV感染,以GAP90的效果最好。     

复方芩连汤对几种禽病病毒体外增殖的抑制作用

以黄连、黄芩、板蓝根、黄芪等为主要成分的复方芩连汤作为抗病毒药,利用细胞病变(CPE)抑制试验测定中药复方在长成单层的鸡胚成纤维细胞(CEFC)上对鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)等几种禽病病毒的抑制作用。结果表明:中药复方对NDV具有较好的抑制作用,其最小直接杀灭浓度为7.81μg/mL,最小阻断浓度为3.9μg/mL,最小治疗浓度为15.62μg/mL;中药复方在体外对IBV的T株和M41株也具有显著定的抑制作用,而对IBDV的抑制作用则不明显。     

4种中药成分复方抗NDV感染CEF细胞筛选效果分析

将氧化苦参碱、黄芪多糖、甘草酸和栀子苷等4种中药成分按一定比例分别配成复方1、2、3、4,并根据对鸡胚成纤维细胞(CEF)安全浓度的测定结果,分别稀释成高、中、低3种浓度,分别与新城疫病毒(NDV)加入到已培养24 h的单层CEF中,通过MTT法测定 OD值,分析其对鸡NDV病毒增殖的影响.结果表明:先加中药后加病毒时,复方1、2、3的高、中、低3个浓度组和复方4的高、中浓度组,对病毒增殖有显著的抑制作用;先加病毒后加中药时,复方1的高、中、低3个浓度组,和复方2的中、低2个浓度组,以及复方3的高、中浓度组,复方4高浓度组对病毒增殖有显著的抑制作用;中药与病毒同时加入时,复方1、3、4的高浓度组,能够显著抑制病毒增殖.综合不同加药方式测试结果,4种中药复方抑制NDV的能力依次为复方1>复方3>复方2和复方4.     

中草药烟用添加剂急性毒性的研究

[目的]研究中草药烟用添加剂的急性毒性.[方法]通过对小白鼠最大耐受量测定(MTD),以最大浓度(1.5g生药/ml)和最大体积(40 ml/kg),给小白鼠灌胃给药(i.g),给药后连续14 d观察动物的毒性症状及死亡情况.[结果]急性毒性研究结果显示,给药后14 d内小白鼠活动、外观、行为、摄食、大小便、呼吸等未见异常,未见毒性反应及死亡发生.中草药烟用添加剂对小白鼠经口的MTD为60 g生药/kg,相当于成人(60 kg体重)日用量(15 g药材)的240倍.限于药物浓度及动物的给药容量,无法测定LD50.[结论]中草药烟用添加剂的毒性反应剂量大于60 g生药/kg,表明中草药烟用添加剂的毒性低.     

中草药复方注射剂治疗仔猪腹泻的试验研究

[目的]探讨中草药复方注射剂对仔猪腹泻的治疗效果。[方法]提取中草药有效成分,制备中草药复方注射剂。用不同剂量(0.25、0.50和1.00 ml/kg)的中草药复方注射剂对人工感染的仔猪腹泻进行治疗试验。[结果]经过3 d治疗后,3个剂量组均有明显的治疗效果,治愈率可达60%~95%,极显著高于感染对照组,剂量以0.5 ml/kg为佳。将制备的复方注射剂和临床用的硫酸庆大霉素、诺氟沙星、头孢噻呋混悬、硫酸黄连素和博落回注射剂对人工感染的仔猪腹泻进行疗效对比试验,结果表明复方注射剂的治疗效果最好,治愈率达98.0%,明显优于其他注射剂。[结论]该中草药复方注射剂是临床上治疗仔猪腹泻的有效药物。     

中药复方对家禽病毒性疾病的治疗效果

[目的]从传统中草药及其复方中开发高效、长效、广谱、低毒、价廉的抗病毒新药。[方法]以祛邪药白花蛇舌草、金银花和扶正药黄芪、甘草等组成抗病毒复方制剂,用于鸡新城疫（ND）、鸡传染性法氏囊病（IBD）、鸭病毒性肝炎（DVH）、H9亚型禽流感（AI）和禽肿头综合征等疾病自然发病家禽的治疗。同时,以单体黄芪多糖饲喂家禽作为对照。[结果]中药复方制剂对ND、IBD、DVH、AI和禽肿头综合征治疗的有效率分别为87%、87%、69%、100%、100%,均高于黄芪多糖;其痊愈率分别为33%、37%、13%、69%、75%,均显著高于黄芪多糖（P〈0.01）;其治疗效果较差的病例百分比分别为15%、21%、24%、6%、7%,均显著低于黄芪多糖（P〈0.01）。[结论]中药复方对某些家禽病毒性疾病的治疗效果较好,在降低死亡率和促进生产性能方面优于单体黄芪多糖。     

叶下珠抗新城疫病毒活性成分的筛选

[目的]筛选中草药叶下珠中的抗病毒活性成分,为开发治疗禽类病毒性疾病的新药提供条件。[方法]分别用75％乙醇（E）和纯净水（PF）煎煮叶下珠全草,再分别以石油醚（PE）、乙酸乙酯（EA）、正丁醇（BU）萃取其活性成分。将萃取物分别接种鸡胚成纤维细胞（CEF）,观察其对NDV病变的抑制作用;分别接种鸡胚,观察其对NDV血凝效价的影响;分别接种鸡,统计鸡群的死亡率,评价其免疫保护效果。[结果]E-PE、E-BU组萃取物均能明显抑制NDV在CEF细胞上的病变和显著抑制NDV在鸡胚内的增殖（P〈0.05）,以E-BU较好;E-PE、E-BU组的鸡只存活率均极显著高于利巴韦林对照组和生理盐水对照组（P〈0.01）,以E-PE组保护率较高。[结论]叶下珠水提取物效果较差;醇提取物E-PE组和E-BU组能有效抑制NDV病毒病变及其在鸡胚内增殖,对NDV的免疫保护效果较好。     

复方中草药防治观赏鱼指环虫病研究

[目的]探索复方中草药对红鲫指环虫病的治疗效果。[方法]用马尾松叶、辣蓼、苦楝、乌桕叶、雷丸等制备的不同浓度（5、8、10g/L）的复方中草药合剂浸泡感染指环虫的红鲫,比较不同处理的杀虫效果。[结果]5 g/L中草药合剂对指环虫的杀灭效果不太理想;8g/L中草药合剂对指环虫的杀灭效果最好,6 h内杀虫率为20%～50%,24 h杀虫率达100%,且对红鲫无毒害作用;10 g/L中草药合剂对指环虫也具有一定的杀灭效果,但其对红鲫具有毒害作用。[结论]8 g/L中草药合剂可有效杀灭红鲫指环虫。     

中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒试验

[目的]将不同配比的中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒的能力进行比较,以确定中草药与卵黄抗体的最佳配比。[方法]试验样品为不同配比的中草药"禽喘康复散"与卵黄抗体复合气雾剂,配比分别为1:1.0、1:0.8、1:0.5、1:0.2,分别记为样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。采用病毒致细胞病变抑制试验和血凝抑制试验,测定样品抑制病毒的能力。[结果]结果表明,样品I对腺病毒7型(AdV7)的最小抑制浓度为1/640g/ml,作用弱于样品II,而对其他病毒的作用都最强。样品IV除对腺病毒3型(AdV3)的最小抑制浓度为1/640g/ml,对其余病毒的抑制作用在4种样品中最弱。体外抑制病毒试验表明中草药与卵黄抗体配比为1:1.0对各病毒的抑制效果最好。[结论]选用1:1.0配比的复合气雾剂最能有效防治呼吸道疾病。     

复方中药制剂防治禽传染性支气管炎研究

[目的]为了进行中药复方制剂防治禽传染性支气管炎的试验。[方法]选择没有免疫接种过IB疫苗的30日龄健康公鸡150只,设计4组试验:第1组为健康对照组;第2组于攻毒前5 d在饲料中添加中药复方制剂;第3组于攻击强毒后2 d开始在饲料中添加该中药复方制剂;第4组为攻毒后不给药作为对照组;另设1组鸡只用于安全试验,研究中药复方制剂的防治效果。[结果]中药复方制剂用于防治禽传染性支气管炎疗效确切,且无毒副作用。[结论]该研究为中药复方制剂的推广应用提供了理论依据。