一种检测猪生殖——呼吸道综合征的ELISA抗原的制备

利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００助溶，由猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞可制备出高纯度的ＥＬＩＳＡ抗原。这一技术消除了涉及到ＰＲＲＳＶ抗的及细胞抗在的常见本底反应。将这种高质量抗原应用到检测抗ＰＲＲＳＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ中，辅以一咱有效的血清封闭稀释剂可消除血清样品的非特异性反应。这种ＥＬＩＳＡ技术比间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）更为敏感；特别是对感染后期血清有高度特异性     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

阻断ELISA和IPMA检测猪PRRSV抗体的比较研究

建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验－免疫过氧化物酶单层试验加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感，没有遇到的在ＩＰＭＡ或间接ＥＬ     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I—ELISA检？…

用重组杆状病毒表达的钎生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）Ｎ蛋白作为抗原，建立了诊断猪生殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）的Ｉ－ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司试剂盒检测结果的符合率为９７．３％，与间接 光抗体试验９ＩＦＡ）的符合率为１００％。用该方法的检测国内猪血清８５份，阳性率为１８．８％；能检出ＰＲＲＳ疫苗免疫猪６ｄ的血清抗体，；与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV …

在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ     

IPMA检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究

本研究在国内首次成功地建立了免疫过氧化物酶单层细胞试验（ＩＰＭＡ）检测猪生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体。应用ＩＰＭＡ检测了北京地区３个猪场９４份血清发现，英国株抗体阳性检出率为９．６％（９／９４），美国株Ｍ１的抗体阳性检出率为５１％（４８／９４）。同间接荧光抗体试验ＩＦＡ比较阳性检出率基本一致。利用ＩＦ和ＩＰＭＡ两种方法检测１８２份加拿大进口猪血清均有３头阳性，且编号相同，本试验证实了ＩＰＭＡ是一种检测ＰＲＲＳ抗体的有效方法，可应用于ＰＲＲＳ的血清学检测     

阻断ELISA和IPMA检测猪PRRSV抗体的比较研究

建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验一免疫过氧化物酶单层试验（Ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｍｏｎｏｌａｙｅｒａｓｓａｙ，ＩＰＭＡ）加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感。没有遇到在ＩＰＭＡ或间接ＥＬＩＳＡ中所见的底色深的问题。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实验感染SPF猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞早期凋亡细胞的观察

采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染色法,用流式细胞仪检测了猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）实验感染ＳＰＦ猪不同时期外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞感染Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群（早期凋亡细胞群）。结果显示,ＰＲＲＳＶ感染猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群的表达率均明显高于正常对照猪,感染后２４ｈ表达率达最高值。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒对受精卵发育的影响

１４头同期发情青年母猪排卵后３２小时，取出受精卵进行微注射或在（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｅ）胚胎培养液－３（加或不加猪繁殖与呼吸综合征病毒，ＰＲＲＳＶ）中培养７２小时。使用猪肺泡巨噬细胞分离病毒，反转录酶聚合酶链式反应和荧光抗体技术检测样品中的病毒。结果与对照组相比，微注射或加有ＰＲＲＳＶ的胚胎培养均未明显抑制体外猪胚胎发育（分别为Ｐ＝０．７５和Ｐ＝０．１４）。用１０～２０ＴＣＩＤ５０的病毒微注射或大浓度病毒处理胚胎进行培养，在胚胎中均检测不出ＰＲＲＳＶ。本试验得出结论是：４～１０－细胞期猪胚胎对ＰＲＲＳＶ体外感染不敏感。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

应用间接荧光抗体试验检测猪生殖—呼吸道综合征 固？

应用间接荧光抗体试验进行了猪生殖－呼吸道综合征病毒抗体的检测，共检测２个猪场，计２７份血清，其中Ｐ猪场血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０．９％，Ｌ猪场血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％，首次证实我区存在的ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

用LSAB免疫组化染色法检测猪生殖—呼吸道综合征病毒抗原？…

本研究在国内首次成功建立了辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素－生物系（ＬＳＡＢ）免疫组化染色法检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗原。应用ＬＳＡＢ染色技术检测１２头人工感染ＰＲＲＳＶ美洲株（ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２）或国内分离株（Ｂ９６－４，Ｂ９６－５）的ＳＰＦ仔猪组织细胞内的ＰＲＲＳＶ抗原，阳性检出率为１００％。     

应用间接荧光抗体试验检测猪生殖-呼吸道综合征抗体

应用间接荧光抗体试验进行了猪生殖－呼吸道综合征病毒抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪场血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０．９％；Ｌ猪场血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

应用间接荧光抗体试验检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

应用间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）进行了猪繁殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪场猪血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０９％；Ｌ猪场猪血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立

本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》     

用猪感染肺泡巨噬细胞诊断生殖—呼吸道综合征

用灌洗肺脏收集的肺泡巨噬细胞建立了检测活猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的高效敏感方法。５头１０周龄（１头）和１４周龄（４）的猪，口鼻接种口接触感洒ＰＲＲＳＶ。感染ＰＲＲＳＶ前收集每头仔猪的诊断样品在以后９周内，每周采集一次血清。第２和第４－９周收集肺居噬细胞，血清和肺泡巨噬细胞均适于早期感染的检测，但时间稍长后肺泡巨噬细胞为更好。４时仅从１头仔猪血清中分离到病毒，而从４头仔狸的肺泡巨     

从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究

采用猪肺巨噬细胞和Ｍａｒｃ－１４５细胞培养对国内暴发流行ＰＲＲＳ的某地猪场进行了病毒分离，从流产胎儿分离出特征性致细胞病变因子，用ＰＲＲＳＶＳＤＯＷ－１７单克隆抗体进行间接免疫荧光染色，证明从４头流产胎儿分离到４株ＰＲＲＳＶ（ＣＨ－ｌａ，ＣＨ－１ｂ，ＣＨ－ｌｃ，ＣＨ－ｌｄ）这４株毒均可在猪肺巨噬细胞和Ｍａｒｃ－１４５ 细胞上生长，并产生特征性ＣＰＥ变化，用ＰＲＲＳＶ美国分离毒株ＶＲ－２３３２和ＮＶ     

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的免疫学研究进展

研究表明,猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后,猪免疫系统参与了病毒导致的疾病发生和感染后的免疫保护作用。ＰＲＲＳ病毒感染引起Ｔ细胞亚群的变化和肺泡巨噬细胞数量和功能的变化;急性期感染能够促进一些细菌和呼吸道病毒的继发感染;病毒囊膜蛋白Ｅ能够诱导细胞凋亡。ＰＲＲＳ病毒感染后核衣壳蛋白Ｎ和基质蛋白Ｍ能够较早诱导机体产生抗体,但无中和作用;囊膜蛋白Ｅ产生中和抗体,有一定的免疫保护作用。ＰＲＲＳＶ感染后也能引起特异性细胞反应,但其在免疫保护中的作用还不清楚。本文就ＰＲＲＳＶ感染后免疫学研究进展作一综述。猪繁殖…