芥菜游离小孢子培养技术研究

以12 份不同基因型的芥菜栽培种为试材,用NLN-13 培养基进行游离小孢子培养,并进行不同的热激诱导处理,研究基因型、热激条件以及供体植株生长条件（主要是温度）对芥菜游离小孢子培养的影响。结果表明：芥菜小孢子培养的适宜花蕾长度为2～3 mm,此时小孢子主要处于单核靠边期,显微观察小孢子有3 条明显的萌发沟;35 ℃热激处理3 d 有利于芥菜小孢子诱导成胚;基因型是影响芥菜小孢子培养的关键因素,不同基因型芥菜的出胚能力差异很大,供试12 份材料中有9 份诱导出胚,其中V03B0097 和A12959 出胚率最高,分别达5.87 胚·蕾^-1 和5.54 胚·蕾^-1;供体植株在 较低的温度环境下生长有利于芥菜小孢子的胚胎发生。     

抗生素对耐抽薹大白菜小孢子胚胎发生的影响

为克服耐抽薹大白菜游离小孢子培养中出胚难的问题，以23个耐抽薹大白菜品种为试材，探究不同基因型间小孢子胚胎发生的差异以及两性霉素-B、灰黄霉素对小孢子胚诱导的影响。结果表明：采用NLN-13培养基，23份耐抽薹大白菜材料中仅有3份诱导出胚，胚诱导成功率为13.0%，且不同基因型间小孢子出胚率存在显著差异，表明基因型是影响大白菜小孢子胚胎发生的重要因素。添加适宜浓度的两性霉素-B和灰黄霉素，23份耐抽薹大白菜材料的胚诱导成功率分别达到60.9%和82.6%，添加1.0～2.0 mg·L^-1两性霉素-B和0.5 mg·L^-1灰黄霉素时诱导出胚材料数量最多，胚诱导率最高可达0.467胚·蕾^-1和0.733胚·蕾^-1，表明培养基中加入抗生素能够在一定程度上促进耐抽薹大白菜小孢子胚胎形成。     

活性炭和振荡培养对提高大白菜胚诱导率的影响

以11个大白菜品种(品系)为材料,采用NLN培养基进行游离小孢子培养,研究了活性炭和振荡培养对小孢子胚诱导和形成的影响。结果表明:11个大白菜品种有9个诱导出胚,每花蕾诱导胚数0.056～12.67个。在NLN-13培养基中添加活性炭(0.5g/L),有利于小孢子胚的诱导和形成,Y536和Y585胚诱导率分别提高了16.1和4.8倍,极难诱导出胚的材料Y516也诱导出胚;采用振荡培养方式(65r/min),Y531和Y445胚诱导率较静置培养分别提高了18.23%和30.91%,出胚时间提早2～4d。     

白菜小孢子超低温保存及复苏后胚状体诱导

随着白菜游离小孢子培养技术的不断优化，通过诱导小孢子胚状体获得大量DH系在白菜育种等科研领域得到了广泛应用。但小孢子供体植株受生长季节、生长期等影响，无法长期持续获取高生活力白菜小孢子，成为目前阻碍白菜细胞工程相关研究顺利推进的重要问题之一。本试验利用超低温技术对10份白菜材料小孢子开展冻存复苏研究，结果表明：利用改良B5液体培养基作为冷冻保护剂，白菜小孢子生活力明显高于传统冷冻保护剂二甲基亚砜处理的白菜小孢子；小孢子-80 ℃(冰箱)和-196 ℃(液氮)冻存180 d后生活力仍保持在85%以上，且两个温度处理间差异不显著，实际应用中可选择-80 ℃冰箱冻存替代传统-196 ℃液氮冻存；利用0.5 mL冻存管保存的白菜小孢子最适复苏条件为37 ℃恒温水浴40 s，在-80 ℃冰箱冻存90 d后复苏的小孢子平均生活力达87.9%。复苏冻存30、60、90 d后易出胚材料的白菜小孢子诱导获得了胚状体及再生植株；复苏冻存180 d的白菜小孢子在高温热激诱导条件下仍可感应胁迫，表现为体积膨大，且具胚胎发生能力的小孢子能够进行细胞分裂。本试验为国内首次开展的白菜小孢子超低温冻存研究，建立了白菜...     

大白菜游离小孢子培养研究进展

综述了国内外大白菜游离小孢子培养的最新研究成果。重点讨论了大白菜游离小孢子培养的影响因素:材料的基因型、供体植株的生理状况、小孢子发育时期、分离和培养方法、预处理、培养基及其添加物、胚状体诱导、植株再生和倍性鉴定等。展望了大白菜游离小孢子培养技术的应用前景,同时指出了这一研究领域存在的问题。     

影响菜心游离小孢子培养的因素

对影响菜心游离小孢子培养诱导胚状体的主要因素如基因型、花序低温预处理、高温起始培养和培养基进行了研究，结果表明，基因型对小孢子培养起着决定性的作用，不同材料之间，诱导频率差异显著；低温预处理幼花序可明显提高小孢子胚状体的诱导率，培养基中加入活性炭可改善胚的分化，高温预培养促进胚状体诱导。     

胡萝卜游离小孢子胚状体诱导技术优化

以10种基因型胡萝卜品种为试材,采用游离小孢子离体培养的方法,对影响胡萝卜小孢子诱导的因素进行了研究,以期为胡萝卜小孢子培养过程中的相关环节提供参考。结果表明:有3个基因型诱导出胚状体,不同基因型之间胚诱导率差异明显,表明基因型是影响小孢子胚诱导的重要因素;盛花期取材进行诱导的出胚率显著高于其它2个时期,表明盛花期为最佳取材时期;33℃处理2 d的出胚率最高,为胡萝卜小孢子胚诱导的最佳热激条件;激素最佳配比为0.5 mg·L^-1 2,4-D;培养基中添加一定量的活性炭有利于小孢子诱导产生胚状体,最佳浓度为0.2 g·L^-1。     

结球甘蓝小孢子培养条件优化及高代自交系胚状体诱导研究

以25份不同类型的结球甘蓝为试验材料,研究游离小孢子培养过程中影响胚状体产生的因素并进行了优化;同时对结球甘蓝高代自交系的诱导出胚情况进行了研究。结果表明:基因型是影响结球甘蓝胚状体产生的关键因素,参试材料中有11份(2份一代杂种和9份高代自交系)出胚,其中一代杂种中中甘628出胚率(19.8个·蕾~(-1))最高,高代自交系中01-88出胚率(47.5个·蕾~(-1))最高,极显著高于其他参试材料;花蕾长度3.0~3.5 mm、花药长度∶花瓣长度为3∶2至2∶1时,处于单核靠边期的小孢子比例最高,是适合小孢子培养的最佳取样时期;初花期和盛花期是理想的取蕾时期;添加适量活性炭可以极显著提高胚诱导率。     

红菜薹游离小孢子培养技术研究

对影响红菜薹游离小孢子培养的关键因素进行分析. 研究结果表明,不同红菜薹材料之间的小孢子胚诱导率差异很大;4℃低温预处理2 h时小孢子胚的形成具有促进作用;NLN培养基中添加生长素(NAA)和细胞分裂素(6-BA)对小孢子胚诱导率影响不大,添加浓度过大时诱导率反而降低;培养基中添加活性炭能提高小孢子胚诱导率;子叶型胚在15 g/L琼脂的培养基上直接成苗率最高,达56.7%;再生植株在MS和1/2MS+IBA(0.5 mg/L)中的生根能力最好,1/2MS生根效果其次.     

红菜薹游离小孢子培养技术研究

对影响红菜薹游离小孢子培养的关键因素进行分析。研究结果表明,不同红菜薹材料之间的小孢子胚诱导率差异很大;4℃低温预处理2h对小孢子胚的形成具有促进作用;NLN培养基中添加生长素(NAA)和细胞分裂素(6-BA)对小孢子胚诱导率影响不大,添加浓度过大时诱导率反而降低;培养基中添加活性炭能提高小孢子胚诱导率;子叶型胚在15g/L琼脂的培养基上直接成苗率最高,达56.7%;再生植株在MS和1/2MS IBA(0.5mg/L)中的生根能力最好,1/2MS生根效果其次。     

‘凤丹’牡丹幼胚愈伤组织诱导的优化和再生体系的建立

以‘凤丹’牡丹的幼胚为材料,从取样时期、切割接种方式、基本培养基和植物生长调节剂选择等方面进行再生体系优化。结果表明:授粉后60 d为‘凤丹’牡丹幼胚诱导愈伤的最佳取材时期;完全破碎切割成幼胚薄片比完整胚、1/2胚和1/4胚更容易获得高质量的愈伤组织,且褐化率较低;MS基本培养基添加0.162μmol·L^-1 H₂O₂可提高幼胚愈伤组织诱导率,但会增加褐化率,而在WPM基本培养基中添加不同浓度的H₂O₂,对愈伤诱导率和褐化率的影响不大;WPM基本培养基比MS更适于‘凤丹’牡丹幼胚再生;WPM+2.5 mg·L^-1 2,4-D+0.1 mg·L^-1 6-BA是诱导愈伤的最佳植物生长调节剂组合,诱导率可达93.33%;不定芽和不定根诱导的最佳组合分别为WPM+30 g·L^-1蔗糖+3 g·L^-1植物凝胶+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1     

黄瓜未授粉子房诱导出胚和再生植株的研究

以7个不同黄瓜基因型为材料进行黄瓜未授粉子房的培养研究,结果表明,不同基因型出胚率差异显著,其中密刺型黄瓜北京102出胚率最高,达25.3%,鄂黄3号出胚率最低,为0.7%。以北京102、中农26号和津优1号为试材进一步研究热激诱导、外源激素、植株不同生长阶段对胚状体诱导产量的影响,发现35℃热激处理2d胚状体产量最高,分化培养基中NAA为0.20mg·L-1、6-BA为0.8mg·L-1时最易分化出胚,在植株第21~30节位采收的子房出胚量最高。再生培养基中GA浓度达到0.4~0.8mg·L-1时,可有效打破再生植株"花打顶"现象从而提高植株再生率。再生植株中二倍体植株比率为70.0%,二倍体植株中DH株比率为84%。     

不同温度预处理对青花菜小孢子胚胎发生的影响

以青花菜（Brassica oleracea L. var. italica Plenck）‘B908’和‘B1092’为材料,通过荧光染色技术对经25、4、32.5和（4→32.5）℃等不同温度预处理的小孢子的分裂方式进行观察,并对出胚率进行统计。结果表明,不同温度预处理的小孢子胚胎发生途径基本相同,均以对称分裂产生胚胎的孢子体发育途径为主（B途径）,经历球形胚、心形胚、鱼雷胚,最终形成子叶形胚状体。但是不同温度预处理的小孢子启动胚胎发生的频率不同,（4→32.5）℃预处理后的成胚率最高。     

朱顶红‘Red Lion’胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以‘Red Lion’朱顶红(Hippeastrum vittatum)的鳞片为外植体进行体细胞胚诱导和形态学与组织学的胚性鉴定。结果表明,鳞片在MS+2 mg·L~(-1) BA+1 mg·L~(-1) NAA+2 mg·L~(-1) TDZ+30 g·L~(-1)蔗糖培养基上胚性愈伤组织诱导率可达90.63%,而不添加TDZ的培养基上胚性愈伤组织诱导率为0。胚性愈伤组织可呈白色松散、透明膨松、透明致密、微棕色松脆和翠绿色松脆等类型;非胚性愈伤组织呈微棕色致密状。胚性愈伤组织中可明显观察到球形胚、心形胚和棒状胚3个发育时期。体细胞胚在不添加植物生长调节剂的MS培养基上可发育形成芽和根,长成完整小植株。     

金莲花愈伤组织诱导与分化

以金莲花无菌种子苗为试材,采用组织培养的方法,研究了外植体种类、基本培养基和外源激素等对愈伤组织诱导和不定芽再生的影响,以期建立其快速繁殖体系。结果表明:金莲花无菌种子苗的子叶为最佳外植体;MS是诱导愈伤组织的最佳基本培养基;附加6-BA和2,4-D的浓度分别为2.0 mg·L^-1和1.0 mg·L^-1时,愈伤组织的生长量最大,达到72.00%,长势最好;30 g·L^-1芽麦糖作为碳源优于蔗糖;培养基添加75 mg·L^-1的活性炭可有效的抑制褐化现象;金莲花愈伤组织分化的最佳附加植物生长调节剂为NAA 0.5 mg·L^-1和KT 1.0 mg·L^-1。     

Initiation and development of microspore embryogenesis in recalcitrant purple flowering stalk (Brassica campestris ssp. chinensis var. purpurea Hort.) genotypes

Purple flowering stalk (Brassica campestris ssp. chinensis var.purpurea Hort.) was generally regarded as a recalcitrant species for microspore culture in Brassica crops. Conditions for reliable induction of microspore embryogenesis were studied in 12 genotypes of purple flowering stalk. A treatment of short heat shock to microspore by incubating at 32 °C for 18 h was suitable for the survival of microspores, sustained cell divisions, and further induced embryogenesis. Subsequently, the reduced concentration of macro salts (1/2 NLN) provided an optimal condition for the development of embryoids. Under the optimized conditions for microspore embryoid development, 10 genotypes responded to microspore culture with the frequencies ranging from 2.7 to 70.5 embryoids per dish. However, regenerated plants were obtained from 9 genotypes, and more than 75% these regenerated plants were double haploid. This report establishes an efficient protocol for microspore culture and offers great potential for DH breeding in purple flowering stalk.     

‘月月红’月季体细胞胚胎发生和植株再生研究

 以建立月季高频再生体系为目标,以‘月月红’月季叶片为外植体,探索了生长调节剂和光照条件对其体细胞胚胎发生及其植株再生的影响。结果表明：3.0 mg · L^-12,4-D + 0.5mg · L^-1 TDZ的胚分化培养基上暗培养12周后转入胚成熟培养基,置于红光（光强约为7.2 µmol · m^-2 · s^-1）条件下培养,能产生较多具肥厚子叶且有高频再生潜力的体细胞胚。暗培养条件下主要产生无子叶的芽状胚。 胚性愈伤组织在含