枯草芽孢杆菌S37沼液发酵培养基优化及其产物对棉苗立枯病的防治

为获得以沼液为基础的枯草芽孢杆菌S37的最佳发酵培养基。采用Plackett Burman法和响应面(Response Surface Methodlolgy, RSM)对以沼液为基础的枯草芽孢杆菌S37抑菌蛋白的发酵培养基进行优化。在Plackett Burman试验基础上确定对抑菌蛋白影响较大的4个显著因素：MgSO₄·7H₂O、玉米粉、KH₂PO₄和豆粕;通过最陡爬坡试验,中心组合设计及响应面分析确定枯草芽孢杆菌S37的最优发酵培养基组成：MgSO₄·7H₂O 2.95 g·L^-1、(NH₄)₂SO₄ 2.4 g·L^-1、NaCl 3.0 g·L^-1、KNO₃ 4.41 g·L^-1、CaCO₃ 5.89 g·L^-1、ZnCl₂ 1.11 g·L^-1、玉米粉4.18 g·L^-1、KH₂PO₄ 4.14 g·L^-1和豆粕2.79 g·L^-1。在优化条件下进行发酵验证,试验值和预测值较接近,吻合度较高,相对误差较小,枯草芽孢杆菌抑菌圈达1.94 cm,比优化前提高8.38%;用此培养基发酵产物滴施棉苗根际土壤,与对照相比,相对防效达到45.94%。     

725杨组培繁殖技术研究

以美洲黑杨725杨树（Populus deltoides cl.‘725’）叶片为材料,对其再生体系的建立及其分化和生根苗对潮霉素B的浓度筛选进行了研究。结果表明,叶片的最佳消毒体系为75%的酒精消毒时间8 s,0.1%的升汞消毒3 min,最佳诱导愈伤的培养基是MS+6-BA 0.2 mg·L^-1+2,4-D 1.5 mg·L^-1+蔗糖25 g·L^-1+琼脂6 g·L^-1;最佳诱导分化培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.3 mg·L^-1+KT 0.3 mg·L^-1+蔗糖25 g·L^-1+琼脂6 g·L^-1;适宜的继代增殖培养基为MS+6-BA 0.3 mg·L^-1+ NAA 0.05 mg·L^-1+蔗糖25 g·L^-1+琼脂6 g·L^-1;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.01 mg·L^-1+ IBA 0.7 mg·L^-1+蔗糖20 g·L^-1+琼脂6 g·L^-1;对725杨叶片分化和不定芽生根进行了潮霉素B的敏感性试验,确定叶片分化的临界浓度为2.5 mg·L^-1,生根的临界浓度为1.5 mg·L^-1。     

固相萃取-高效液相色谱串联质谱法检测粮食中赭曲霉毒素A

为了测定多种粮食样品中的赭曲霉毒素A(Ochratoxins A,OTA),建立了一种固相萃取-高效液相色谱串联质谱的检测方法。小麦、玉米、大豆和大米样品经乙腈-水(体积比80∶20)提取后,采用氨基固相萃取柱进行富集和洗脱,高效液相色谱串联质谱法进行检测。结果表明,不同粮食中赭曲霉毒素A在0.5~10.0μg/kg线性关系良好,相关系数(r)为0.999,定量限和检出限分别为0.50μg/kg和0.25μg/kg,日内和日间精密度的相对标准偏差(RSD)分别为1.71%~3.53%和0.69%~1.58%,重复性的相对标准偏差为3.72%~5.56%,加标回收率为83.2%~98.6%,相对标准偏差为2.26%~6.25%。     

猪排泄物中替米考星的高效液相色谱检测方法

 猪排泄物用乙腈和磷酸二氢钾缓冲液提取，C18 SPE柱净化，甲醇-乙腈-乙酸铵溶液洗脱，紫外检测器290 nm处检测，成功建立了猪排泄物中替米考星残留的高效液相色谱检测方法。该方法检测尿液、粪便中替米考星的定量限分别为0.025 ?g·ml-1和0.05 ?g·g-1，检测限分别为0.0125 ?g·ml-1和0.025 ?g·g-1。尿液在0.025 ?g·ml-1～2.0 ?g·ml-1添加范围内，回收率在83.4%～95.7%之间，日内变异系数在6.6%～8.9%之间，日间变异系数在6.4%～9.3%之间；粪便在0.05 ?g·g-1～5.0 ?g·g-1添加范围内，回收率在58.8%～73.9%之间，日内变异系数在8.7%～12.4%之间，日间变异系数在9.4%～16.5%之间。本方法检测限低，分析简便、准确，符合相关研究的要求。     

蕙兰种子根状茎培养与愈伤组织诱导

以蕙兰种子无菌萌发的根状茎为材料,采用不同的激素配比以及不同的有机添加物,研究根状茎增殖和蕙兰愈伤组织诱导的适宜配方。研究结果表明:在蕙兰根状茎增殖的研究中添加100 g·L^-1香蕉泥在增殖率、分支数以及增加长度上均优于添加100 g·L^-1土豆泥;蕙兰根状茎出芽最佳的培养基:MS+2.0 mg·L^-1 NAA+4.0 mg·L^-1 6 BA+1.0 g·L^-1酪蛋白+1.0 g·L^-1蛋白胨+15 g·L^-1蔗糖+15 g·L^-1葡萄糖;诱导愈伤组织活力好并且诱导率高的培养基配方为MS+0.5 mg·L^-1 2,4 D + 1.0 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6 BA+100 g·L^-1椰汁+30 g·L^-1 蔗糖。     

‘傲雪’金银木组培快繁技术研究

以‘傲雪’金银木带腋芽的半木质化茎段为材料,研究外植体消毒方法、不同植物生长调节剂对其继代增殖与生根的影响。结果表明：（1）先用75%的乙醇浸泡30 s,无菌水冲洗4 ~ 6次,然后加入0.1% HgCl₂杀菌7 min,褐化与污染率较低;（2）增殖最佳培养基为MS + 6-BA 1.0 mg·L^-1 + NAA 0.15 mg·L^-1 + GA₃ 0.5 mg·L^-1,增殖系数可达2.93;（3）生根最佳培养基为1/2MS+ IBA1.5 mg·L^-1,生根率达93.9%。以上培养基均添加蔗糖30 g·L^-1,琼脂7 g·L^-1,pH值为6.0。     

叶面肥对薄壳山核桃幼苗生长的影响

为研究喷施尿素（简称CO）与磷酸二氢钾（简称PK）对薄壳山核桃幼苗生长的影响,采用2因素4水平随机区组试验设计,分析不同施肥组合对苗木生长的影响,使用Origin软件拟合出反应曲面方程,结果显示：苗高、地径增幅对叶面肥的响应均符合二元二次回归方程,叶面肥能促进苗木生长,且这种促进作用呈现出钟形曲面模式。通过肥料效应分析可知,单施尿素(CO)比磷酸二氢钾(PK)效果好,CO与PK配施比单施效果好;通过交互作用分析可知,当CO用量为1.824 g·L^-1、PK用量为0.894 g·L^-1,两者比例为2.040∶1时,苗高增幅达到最大理论值42.13%;CO用量为2.558 g·L^-1、PK用量为0.985 g·L^-1,两者比例为2.597∶1时,地径增幅达到最大理论值68.51%。由等产线图可知,对苗高增幅、地径增幅有明显促进作用的范围CO合理用量为0~2.278 g·L^-1、0~3.293 g·L^-1,PK合理用量为0~1.180 g·L^-1、0~1.340 g·L^-1。在肥料充足时应按最佳施肥量施肥,肥料不足时,CO、PK用量和配比应满足最适配比线方程。苗高最适配比线方程：0.0840CO-0.029PK=0.127;地径最适配比线方程0.0642CO-0.047PK=0.118。     

高效液相色谱串联质谱测定城镇污水处理厂水样中典型雌激素内分泌干扰物质

雌激素内分泌干扰物质对生物体的影响逐渐成为人们关注的焦点。作为重要的化工生产中间体,大量此类物质会随污水排放进入城市污水处理厂,未被去除而进入周边水环境,对人和动物产生潜在的危害。为了解城市污水处理厂中典型雌激素内分泌干扰物质的污染现状,建立了固相萃取结合超高效液相色谱-质谱联用的方法,同时测定了污水处理厂水样中雌酮（E1）、雌二醇（E2）、雌三醇（E3）、17α-炔雌醇（EE2）、双酚A（BisphenolA,BPA）及壬基酚（Nonylphenol,NP）。结果表明,以AcquityUPLCTM BEH C₁₈柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）为分离柱,乙腈和5 mmol·L^-1乙酸铵溶液为流动相,质谱在选择ESI负离子模式的条件下,目标化合物于8 min内实现了分离。方法的检测限为4～30 ng·L^-1,定量限为10～40 ng·L^-1,6种目标化合物在0.5～200 μg·L^-1范围内线性关系显著,具有良好的精密度和回收率。按照此方法,对H市4个典型生活污水处理厂的水样进行分析,总排水口水样中检测出雌酮（E1）、雌二醇（α-E2）、雌三醇（E3）、双酚A（BPA）及壬基酚（NP）5种目标化合物,浓度范围分别为0.002～0.41 μg·L^-1、0.01 μg·L^-1、0.11～3.73 μg·L^-1、0.04～4.42 μg·L^-1、0.15～1.30 μg·L^-1。该方法简单快捷,灵敏准确,满足污水处理厂水样中雌激素内分泌干扰物质的检测要求。     

土壤中砷和硒生物有效态的联合提取

为了快速、准确和有效地联合提取土壤中生物有效态砷和硒,以减少实验成本和提高实验效率,本研究在长期实验摸索及前人工作基础上,研究0.5 mol·L^-1 NaHCO₃、0.1 mol·L^-1 HCl、0.5 mol·L^-1 KH₂PO₄和0.1 mol·L^-1 KH₂PO₄-K₂HPO₄ 4种浸提剂对土壤中生物有效态砷和硒的联合提取实验效果。4种浸提剂所得浸提液经HNO₃和HClO₄消煮,用氢化物发生原子荧光光度计（HGAFS）测定浸提液中砷与硒的浓度。土壤总砷和总硒的测定中使用两组土壤标准物质控制,玉米标准物质控制玉米根和玉米籽实验质量,相对标准偏差均小于10%,硒和砷的检测限分别为0.01 μg·L^-1和0.05 μg·L^-1。结果表明： 0.1 mol·L^-1 KH₂PO₄-K₂HPO₄和0.5 mol·L^-1 NaHCO₃提取的土壤生物有效态砷、硒含量与土壤总砷（r=0.788,P<0.01; r=0.794,P<0.01）和总硒（r=0.707,P<0.05; r=0.648,P<0.05）均呈显著性正相关,其余两种浸提剂提取效果较差。植物指标法显示,仅0.1 mol·L^-1 KH₂PO₄-K₂HPO₄提取的土壤生物有效态砷、硒含量与玉米根砷（r=0.848,P<0.01）和硒（r=0.822,P<0.01）呈极显著正相关。研究表明,0.1 mol·L^-1 KH₂PO₄-K₂HPO₄作为浸提剂可快速、准确、有效地联合提取土壤中砷和硒的生物有效态。     

苯甲酸钠对铜、铅、镉胁迫下小麦幼苗生长及生理特性的影响

以“扬麦16”为试验材料,研究苯甲酸钠对复合重金属胁迫下小麦幼苗生长及生理特性的影响。结果表明,2.4 mmol·kg^-1复合重金属胁迫下,小麦出苗延迟,且幼苗生长受到显著抑制。与清水对照（处理0）相比,喷施2～4 g·L^-1的苯甲酸钠溶液,小麦的叶绿素含量及叶绿素荧光参数F_v/F_m、 F_v/F₀和根系活力显著增加（P < 0.01）。进一步分析发现,喷施2～4 g·L^-1苯甲酸钠处理通过增加游离脯氨酸、可溶性蛋白含量和提高超氧化物歧化酶（SOD）活性缓解了小麦幼苗的毒害,最终降低叶片中丙二醛（MDA）含量,但喷施苯甲酸钠溶液浓度越高（＞6 g·L^-1）反而会抑制幼苗生长甚至对幼苗产生毒害。相关分析性表明,当苯甲酸钠施用浓度为1.97～3.12 g·L^-1（2016年）、1.58～3.27 g·L^-1（2017年）时,小麦叶绿素及其组分含量、根系活力、SOD活性、可溶性蛋白和游离脯氨酸含达最大值,当其浓度为2.59 g·L^-1（2016年）、3.02 g·L^-1（2017年）,MDA含量最小。综上,喷施（1.58～3.27 g·L^-1）的苯甲酸钠能减轻复合重金属胁迫对小麦幼苗的毒害。     

HS-SPME-GC×GC-TOFMS分析贵州茶叶的挥发性香气成分

为更全面的检测茶叶中的挥发性香气成分,采用顶空固相微萃取与全二维气相飞行时间质谱相结合(HS-SPME-GC×GC-TOFMS)的方法建立茶叶挥发性香气成分的分析方法,并通过质谱数据库匹配、内标相对定量、日内及日间相对标准偏差等参数进行方法验证。结果表明:该方法可对茶叶中77种挥发性香气成分进行定性定量分析,其质谱正、反匹配度均大于800,日内及日间相对标准偏差分别为11.3%和13.4%,方法的可靠性和稳定性较好。     

基于PB设计和BBD响应面法优化高山被孢霉 产花生四烯酸发酵培养基

使用响应面法对高山被孢霉生产花生四烯酸(ARA)的发酵培养基成分进行优化。以摇瓶发酵7 d的ARA产量为指标,在前期试验的基础上,利用Plackett-Burman法设计试验考察酵母粉、葡萄糖、玉米浆干粉、磷酸二氢钾、硫酸镁和氯化钙6个因素的影响;分析筛选出葡萄糖、酵母粉和玉米浆干粉3个主要因素,再以最陡爬坡路径试验逼近最大响应区域,最后用Box-Behnken中心组合设计三因素三水平试验,利用Design Expert 10软件进行二次回归分析计算得到ARA产量最高的培养基,其成分为酵母粉12.6 g·L~(-1),葡萄糖75.6 g·L~(-1),玉米浆干粉7.1g·L~(-1),磷酸二氢钾1 g·L~(-1),硫酸镁0.5 g·L~(-1),氯化钙0.5 g·L~(-1),pH 6.5。在该条件下,ARA产量达到了5.12 g·L~(-1),与预测值的5.17g·L~(-1)接近,相比优化前的初始培养基,ARA产量提高了27.3%。该结果为提高ARA生产水平提供了研究基础。     

柱前衍生高效液相色谱法测定果蔬产品阿维菌素及其有毒代谢物的残留量

 建立了快速测定果蔬产品中阿维菌素及其有毒代谢物残留量的柱前衍生高效液相色谱测定方法。果蔬样品经乙腈提取后，直接采用三氟乙酸酐(TFAA)－N－甲基咪唑(NMIM)－乙腈(ACN)法进行柱前荧光衍生化，后以高效液相色谱-荧光检测器进行阿维菌素残留分析。试验结果表明，本方法对果蔬产品中的阿维菌素及其有毒代谢物残留量的最低检测浓度为1μg·kg-1，在0.001～0.1mg·kg-1时，阿维菌素的添加回收率在84.2%～110.8%之间，变异系数（C.V.%）在1.9%～12.8 %。     

GC-μECD法快速检测猪肉地西泮残留

[目的]利用气相色谱-微电子捕获（GC-μECD）检测法,快速检测猪肉中地西泮残留,为该类药物在动物性食品检测提供参考。[方法]首先用乙腈超声提取猪肉中的地西泮,C18固相萃取柱净化,利用GC-μECD法进行残留检测,外标法定量。[结果]在1-1000μg/L范围内药物色谱峰面积与浓度线性关系良好,相关系数达到0.9994。对空白猪肉进行1-50μg／kg范围的药物添加回收试验,平均回收率为83.5％-94.9％,日内变异系数为2.4％-8.1％,日间变异系数为3.9％-6.4％。检出限为0.31μ/kg,定量限为1μg/kg。[结论]该方法简便、快速,稳定性好,灵敏度高,线性范围广,适用于猪肉中地西泮的残留检测。     

气相色谱-串联质谱法测定茶叶中32种杀菌剂残留

建立了茶叶中32种杀菌剂类农药残留的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)测定方法。样品经乙腈高速匀浆提取后,以N-丙基乙二胺(PSA)、石墨化碳(GCB)、C18为净化剂进行净化,在GC-MS/MS多反应离子监测(MRM)模式下进行测定,空白基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明:27种杀菌剂在10~1 000μg·L~(-1),5种杀菌剂在20~1 000μg·L~(-1)范围内具有良好线性关系,相关系数(R~2)均大于0.99。方法检出限(S/N≥3)为0.1~8.1μg·L~(-1),定量限(S/N≥10)为0.4~23.4μg·L~(-1),平均添加回收率范围为70.4%~109.1%,相对标准偏差(RSD)3.4%~10.3%。该方法样品前处理操作简单、净化效果好、灵敏度高,具有良好的适用性,能够满足茶叶中多种杀菌剂残留测定分析的要求。     

联苯肼酯及其代谢物和哒螨灵在茄子中的最终残留量 及储藏稳定性研究

为探究哒螨灵、联苯肼酯及其代谢物在茄子上的储存稳定性及其残留行为,在湖北、四川等8地开展哒螨灵、联苯肼酯及联苯肼酯二氮烯在茄子上的规范残留田间试验,样品经乙酸乙腈提取,再由N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)和十八烷基键合硅胶吸附剂(C18)分散固相萃取净化,过膜后,用超纯水-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,通过基质标准曲线外标法进行定量.结果 表明,在3个添加水平下(0.05 (0.02)、0.1、0.5 (0.2) mg.kg-1)其回收率为89.0％～107.0％,相对标准偏差为3.0％～12.7％,定量检出限(LOQ)分别为0.050 mg·kg-1、0.020 mg.kg-1和0.020 mg·kg-1.最终残留试验表明,45％联肼·哒螨灵悬浮剂,用药量为制剂45 mL·hm-2(有效成分用量303.75 g.hm-2),施药2次,施药间隔7d,采收间隔期为7d、10d,收获茄子中哒螨灵的残留量均小于0.053 nag·kg-1,联苯肼酯的残留量均小于0.040 mg.kg-1.稳定性试验也表明,哒螨灵、联苯肼酯及其代谢物在-20℃冰箱储藏180 d稳定.结论 是45％联肼·哒螨灵悬浮剂在茄子上残留量极低.     

QuEChERS-PSA-气相色谱法分析联苯菊酯·啶虫脒微乳剂在茶园中的残留特征

利用QuEChERS-PSA结合气相色谱电子捕获检测器(GC-ECD)建立了同时检测茶叶及土壤中联苯菊酯和啶虫脒的分析方法,并探明了4.5%联苯菊酯·啶虫脒微乳剂在茶园中的降解动态特征.在优化的GC-ECD条件下,0.01~1 mg·kg^-1范围内的联苯菊酯和啶虫脒仪器响应值与其质量浓度呈良好线性关系(r=0.997 5~0.998 9),仪器最小检出量为2.0×10^-11 g.添加回收率试验表明,在茶叶及土壤空白样品基质中添加0.01~1 mg·kg^-1的联苯菊酯和啶虫脒,平均回收率为89.2%~108.1%,相对标准偏差为2.2%~11.3%,方法的定量限为0.01 mg·kg^-1,说明该方法准确度、精密度和灵敏度均较好,可用于同时检测茶园中痕量水平的联苯菊酯和啶虫脒残留.田间试验结果表明,4.5%联苯菊酯·啶虫脒微乳剂在茶叶及土壤中的消解动态曲线符合一级动力学方程,联苯菊酯和啶虫脒在茶叶和土壤中的半衰期分别为5.6~13.1 d和 7.2~8.7 d,说明联苯菊酯与啶虫脒在茶园中的消解速率相近,在环境中均属于易降解化合物,但其所存在的膳食风险仍需结合茶叶加工因子试验及中国地区膳食结构作进一步全面评估.     

高效液相串联质谱法测定动物源食品中喹赛多、卡巴氧残留

本试验建立了动物源食品中喹喔啉类药物喹赛多、卡巴氧残留量的液相色谱—电喷雾串联质谱测定方法.采用酸性乙腈—甲醇混合溶剂提取样品中的残留物,提取液浓缩后经HLB固相萃取小柱净化,以液相色谱—串联质谱仪测定,外标法定量.结果表明:喹赛多、卡巴氧质量浓度为1-50μg.L-1时具有良好的线性范围,相关系数>0.999;在5-20μg.kg-13个添加水平范围内的回收率为69.10%-93.54%,相对标准偏差为2.49%-14.45%,方法检出限分别为3和2μg.kg-1.可见,本方法适用于动物源性样品中喹喔啉类药物残留的定量测定.     

皂苷与EDTA复合淋洗污染塿土中Cu、Pb的效果研究

采用振荡和柱淋洗方法,选用生物表面活性剂皂苷和螯合剂乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)作淋洗剂,研究了EDTA、皂苷及其复合液对污染塿土中重金属Cu、Pb的淋洗效果,并比较不同淋洗剂淋洗前后重金属的形态变化特征。结果表明:EDTA浓度为0.5、1.0 mmol·L-1时与不同质量浓度皂苷复合振荡淋洗Cu、Pb时表现为协同作用,对Pb的协同作用尤为明显;EDTA浓度大于5.0mmol·L-1时,与不同质量浓度皂苷复合淋洗Cu、Pb表现为拮抗作用。1.0 mmol·L-1EDTA、50 g·L-1皂苷及其复合淋洗液(1.0 mmol·L-1EDTA与50 g·L-1EDTA)对土柱中Cu、Pb的累积淋洗量均随着淋洗液体积的增大而逐渐增加;1.0 mmol·L-1 EDTA与50 g·L-1皂苷复合淋洗土柱中Cu时表现为协同作用,其对单一及复合污染塿土中Cu的累积淋洗百分率分别为23.59%和21.57%,对Pb的累积淋洗百分率分别为27.59%和24.92%。柱淋洗前后重金属形态分级结果表明,EDTA、皂苷及其复合淋洗液能有效去除碳酸盐结合态、有机结合态和硫化物残渣态重金属Cu、Pb;EDTA与皂苷及其复合淋洗液可显著活化污染塿土中的重金属Cu、Pb,有望与植物修复技术联用修复重金属污染塿土。