H9亚型禽流感病毒流行毒株交叉免疫攻毒保护试验

采用1998-2009年在河北、河南及山东分离的3株禽流感H9亚型流行毒株,分别制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,免疫后21 d,采血测定HI抗体,然后用从上述3个地区及北京分离的共5株禽流感H9亚型流行毒株进行攻击,观察不同时期及地点分离的H9亚型流行毒株的交叉免疫攻毒保护效果。结果显示,用不同时期及地点的3个分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组试验鸡H9亚型禽流感的HI抗体效价均明显上升,不同毒株灭活疫苗所诱导产生的HI抗体效价存在着不同程度的差异,用同源毒株作为抗原测定免疫组鸡的血清样品,可获得较高的HI抗体效价。攻毒试验结果证明,对不同时期及地点分离的禽流感H9亚型流行毒株间产生了较好的交叉保护力。用1998年分离的WD98株制备出的灭活疫苗对目前的流行毒株仍具有较好的保护效力。     

鸡传染性法氏囊病病毒地方流行毒株的免疫原性

从河北省一些发病鸡场分离到JD1～JD10共10株鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)毒株,用IBD标准阳性血清以琼扩试验进行了初步鉴定.并进行了IBDV分离物及其鸡胚适应毒免疫原对标准强毒IBDV-BC6/85株免疫保护试验,D78弱毒疫苗对IBDV各分离毒株的免疫保护试验以及分离毒株间交互免疫保护试验.结果表明,D78疫苗对JD2,JD5和JD10 IBDV分离株的保护率较低,分别为40%、50%和60%.分离毒株JD5、JD2及其鸡胚传代物E-JD2对强毒株的免疫保护率可达100%.交互免疫保护试验表明,JD2对其余各分离株的免疫保护指数达到80%以上,对标准强毒株和地方分离株均可产生有效免疫保护.     

河南省鸡传染性法氏囊病病毒株的分离及其某些生物学特性

应用鸡胚培养、电镜观察、血清学试验及病理组织学检查，分离与鉴定了来自河南省鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）免疫鸡群Ｈｅ１、Ｈｅ２、和Ｈｅ３三株ＩＢＤＶ毒株。鸡胚传代试验表明，Ｈｅ１和Ｈｅ２株连续传代到第４代出现规律性死亡和ＩＢＤ病变，而Ｈｅ３株在第１代时鸡胚即全部死亡，且出现ＩＢＤ典型鸡胚病变。Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株对易感鸡致病力有一定的差异。病死率分别为２０％、１０％和４０％，多数为弱毒株。免疫保护试验证明，用常规的ＩＢＤＶ血清Ｉ型病毒株Ｂ２疫苗对Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株的免疫保护试验，与对照组相比保护率分别为０％、０％和１０％。未死亡扑杀的免疫试验鸡法氏囊有不同程度的病理组织学病变，表明Ｉ型毒株疫苗对ＩＢＤ基本上无免疫保护作用。所分离的毒株可能是ＩＢＤＶ的变异株。     

鸽新城疫病毒分离株的部分生物学特性鉴定及疫苗免疫试验

从暴发疑似鸽新城疫的某赛鸽场分离到1株病毒，通过血凝（HA)试验、血凝抑制（HI）试验及鸡胚中和试验初步鉴定为鸽新城疫病毒，进而进行了鸡胚半数感染量（EID50）、鸡胚平均死亡时间（MDT）测定和对不同动物红细胞的凝集试验，证明该分离株属新城疫强毒力毒株，将该毒株经鸡胚尿囊液增殖后用甲醛灭活，制成油佐剂来活苗，对鸽免疫后检测其血清抗体水平并进行攻毒试验，结果在免疫后21d抗体达到高峰，攻毒试验表明油佐剂灭活苗对鸽新城疫病毒感染有较强的保护力。     

鸡传染性支气管炎病毒山西地方分离株的血清学分析

应用病毒感染的鸡胚材料免疫兔的方法制备抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单因子血清,然后在鸡胚上对山西分离的6个毒株和6个参考株进行交叉病毒中和试验。结果显示,这6株病毒与参考毒株不属于同种血清型,但分离株之间存在部分交叉免疫保护,证实了鸡传染性支气管炎病毒毒株在山西地区存在变异。     

对鸡传染性喉气管炎SA_2株的初探

自鸡传染性喉气管炎SA_2株疫苗中分离出SA_2株病毒。此株生长稳定,保持了原毒株毒性低、副作用小、具有良好的免疫效果的特性,为研制开发此株疫苗奠定了基础。     

禽流感H9亚型流行毒株交叉免疫保护试验

采用北京市农林科学院畜牧兽医研究所1998年-2008年在北京及河北省分离的4株禽流感病毒H9亚型流行毒株,分别制备不同分离毒株灭活疫苗,免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果表明,用4个不同时期的分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组鸡禽流感(H9亚型)的HI抗体效价均明显上升,所诱导产生的HI抗体效价基本相同;不同时期分离毒株大多产生了较好的交叉保护力。用1998年、2004年及2006年分离的流行毒株制备出的灭活疫苗能够保护2008年流行毒株的攻击。     

鸡新城疫病毒分离鉴定及鸡胚免疫的方法研究

为了研究本地NDV毒力情况以及建立鸡胚免疫的方法,通过在山西地区采集病料,对病料通过PCR鉴定后应用SPF鸡胚繁殖,而后对其毒力相关的F基因进行扩增和序列分析。对其进行生物学毒力测定,并进行了动物回归试验。测定病毒效价,并将其稀释至不同的效价水平,接种于SPF鸡胚,进行鸡胚免疫方法的研究。结果,成功分离到1株NDV。其与Clone30、La Sota等株的同源性较高,与VG/GA、Clone30和La Sota等毒株位于同一个分支,亲缘关系最近,属于Ⅱ型弱毒株病毒。生物学毒力测定结果 MDT、IVPI、ICPI分别为92.5、0.2、0,确定分离株为弱毒株。动物回归试验表明分离病毒具有致病性。鸡胚免疫方法研究结果表明接种的最佳病毒效价为22,无鸡胚死亡且孵出的雏鸡可检测到较高的抗体水平。说明可以用新城疫分离毒株来进行鸡胚免疫,有针对性的防控养殖场发生新城疫。     

云南省红河州猪衣原体性流产的病原分离鉴定

从母猪流产胎儿病料中分离到３株衣原体，将分离株鸡胚卵黄囊膜悬液接种７日龄鸡胚能致鸡胚规律性死亡；碘染色阴性；补体结合试验阳性；对鸡胚致死死毒价为１０^-9ＥＬＤ５０／０．４mL;该毒株能使小白鼠在３d内全部死亡。结果表明，该分离株为鹦鹉热衣原体；采用该场分离毒株,采用该场分离毒株制备的灭活苗免疫注射，母猪流产率由免疫前的３７．２１％下降到４．４２％，降低了３２．７９个百分点。     

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验

为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。     

鸡新城疫的流行与免疫

门诊病例统计表明，我国鸡群中ND的发病率仍非常普遍。近些年来，世界各地对NDV分离株的研究结果发现，其HN基因和F基因序列的某些位点发生的变化，致使毒株间的毒力差异较大，抗原性亦有差异，但其主要抗原表位未发生变化。山东家禽研究所禽病室对1998－1999年的6个NDV分离株做了比较研究，各毒株的毒力不同且都比经典的F48E9强，其中二个属基因Ⅶ型。但交叉免疫保护试验表明，用La Sota株弱毒苗及其灭活油乳苗免疫的鸡，在用这6个分离毒分别攻毒后，均有1005保护率。同样，用这6个分离毒制成的灭活油乳苗免疫鸡后，对经典毒E48F9亦产生100％保护率。这表明，从目前发病鸡群中分离的NDV毒株与La Sota弱毒株、标准F48E9强毒株间有很好的交叉免疫保护作用。     

鸡传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的序列分析

采用RT—PCR方法扩增了12株鸡传染性支气管炎病毒中国分离株的全长S1基因，并进行了序列分析。通过与GenBank中登录的其他IBV参考毒株S1基因序列比较，进行了系统进化分析。结果表明，12株分离毒株属于同一个进化群的2个不同进化亚群。其中11株分离株与国内一些分离株亲缘关系最近，属于同一进化亚群，而广西分离株GX04—1则与欧洲毒株4／91亲缘关系较近，属于另一亚群。这些结果说明，中国各地的流行毒株变异较大，实际免疫中要根据流行毒株的特性选择合适的疫苗株来进行。     

鸡新城疫不同毒株间的交叉保护性研究

将NDV－La Sota疫苗株、NDV山东地方强毒株CY和DY以及NDV F48E8标准强毒株分别制成油乳剂灭活疫苗，免疫6周龄SPF鸡，然后分别用分离强毒株和F48E8强毒株进行攻击。结果发现，两个分离毒株之间、分离毒株与标准毒株之间、IV系疫苗株与分离毒株之间都可以得到完全交叉保护。     

鸡新城疫不同毒株间的交叉保护性研究

将NDV－La Sota疫苗株、NDV山东地方强毒株CY和DY以及NDV F48E8标准强毒株分别制成油乳剂灭活疫苗，免疫6周龄SPF鸡，然后分别用分离强毒株和F48E8强毒株进行攻击。结果发现，两个分离毒株之间、分离毒株与标准毒株之间、IV系疫苗株与分离毒株之间都可以得到完全交叉保护。     

H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究

对1998—2002年间在河南省豫北地区分离到的5株H9N2亚型禽流感病毒的抗原性变异进行了研究。经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验及攻毒保护试验证明，5株H9N2亚型间已经发生了抗原性漂移。98A5和99S毒株间的保护力接近100％，HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验的相关性均在0．74以上。表明2毒株间的抗原性相近；用00Y毒株攻击其他4株免疫的鸡，其保护率仅为60％～80％；而02Y株对除00Y株外的4株的免疫保护率分别为60％、75％、80％、100％，与分离年代呈负相关性，HI、鸡胚中和试验、细胞中和试验也取得类似结果，说明2000年后的毒株间已发生抗原性变异。     

鸡传染性喉气管炎油乳剂灭活疫苗的研究

分别将3株鸡传染性喉气管炎病毒(标准强毒株J株、山东分离株N株和L株)经甲醛灭活后制成油乳剂灭活疫苗。免疫效力试验结果表明，以N株鸡传染性喉气管炎病毒制备的油乳剂灭活疫苗免疫效果较其它几种疫苗好，免疫鸡AGP抗体阳性率高达83％，免疫保护率高达100％。     

H3N2亚型猪流感病毒中国分离株的克隆纯化及生物学特性

以有限稀释克隆法对29株H3N2亚型猪流感病毒(SIV)不同地区分离株进行纯化，并对其生物学特性进行了研究。结果，8株对鸡呈现中等致病力，21株对鸡呈现低致病力。不同地区SIV分离株(第5代)的EID50差异较大，以安徽分离株最高，为10^-10.77／0．2mL，其他毒株在10^-5.5～10^-10.56／0．2mL之间。黑龙江省分离株和浙江省分离株的LD50高达10^-2.84／0．1mL，其他分离株在10^-1.17～10^-2.56／0．1mL之间。经鸡胚分离传代后，SIV分离株均能凝集0．7％人“O”型血、绵羊、兔、豚鼠、小鼠、大鼠及鸡的红细胞，其红细胞凝集谱的差异主要表现在对马、牛、驴、猪红细胞的凝集特性上。大部分SIV分离株为热不稳定型，部分毒株表现为中等热稳定型和热稳定型。从其抗原特性看，大部分SIV分离株表现为亲和相，对AIV参考毒株DKUK63和SIV参考毒株SWTN77表现出较高的HI滴度；部分分离株经鸡胚传代后，出现了相别的变异。     

鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定及河北弱毒株培育的研究

从河北省６个地区鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的鸡群中，分离到６株强毒，均能使易感鸡３６小时发病并死亡，发病率达６０～１００％，死亡率１０～７０％。人工感染鸡能见到与野外病例相同的病变。经血清学试验、鸡胚接种、电镜观察均证明，分离物为传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），其中有的毒株，毒力非常强。利用其中毒力最强的１株病毒，经鸡胚多次传代培养育成１株免疫原性好，免疫期长，免疫效果容易监测的弱毒株，经野外试验证明，该毒株是防治ＩＢＤ的一个很理想的毒株。     

减毒鸡沙门菌疫苗株97A的免疫保护效力试验

减毒沙门菌疫苗株97A免疫鸡经鸡沙门菌强毒株Sg9攻击后,对免疫攻毒组和攻毒对照组鸡进行病理学检查和细菌分离,以进一步评价97A疫苗的免疫保护效力。结果表明,免疫攻毒组鸡肝脏、肺脏和肾脏等实质器官仅有轻到中度的炎症反应,而攻毒对照组鸡则表现出了严重的组织病理学变化,同时减毒鸡沙门菌疫苗株97A能显著地限制强毒株在鸡体内的定居和增殖,显示出了良好的免疫保护效力。     

山西省鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定

为了解山西省鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)流行毒株的遗传变异规律,将近5年来采集自山西不同地区发病鸡群的法氏囊组织病料,通过接种易感雏鸡分离出15株IBDV。用绒毛尿囊膜接种法测定鸡胚半数致死量,其ELD50在10~(-2.18)~10~(-2.91);测定所有分离株对非免疫鸡的致死率,结果为63.3%~86.7%,属于超强毒株;利用RT-PCR扩增病毒VP2基因并进行序列分析。结果表明,所分离的15株病毒均具有传染性法氏囊病病毒超强毒株的主要分子特征,即222A(WS2为S)、249Q、254G、256I、279D、284A、294I、299S及七肽区SWSASGS,综合其对非免疫鸡的致死率,确认所有分离毒株属于超强毒病毒株。说明在山西省境内存在传染性法氏囊病病毒超强毒株。