用不同培养基生产猪多杀性巴氏杆菌活疫苗的试验研究

用马丁干粉和马丁肉汤培养基培养猪多杀性巴氏杆菌,分别生产3批猪多杀性巴氏杆菌活疫苗。结果用马丁干粉培养基生产的制苗用菌液的活菌数分别为1．80×10^10CFU／mL、1.75×10^10CFU／mL、1.80×10^10CFU／mL：冻干后的存活率分别为64％、69％、67％。用马丁肉汤培养基生产的制苗用菌液的活菌数分别为1．20×10^10CFU／mL、1．50×10^10CFU／mL、1．10×10^10CFU／mL,冻干后的存活率分别为50％、49％、54％。用两种培养基制备的疫苗按《兽用生物制品检验标准》（以下简称《标准》）检验6批疫苗均合格。     

仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵工艺应用研究

为确定仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵参数,根据发酵过程中的关键技术,设计3种不同工艺,分别发酵培养21 h,每隔3 h取样进行活菌计数表明,培养15~21 h均可达细菌稳定期,工艺3培养菌数高于其余2种,其最适培养时间为18 h;将合成培养基以1%、2%和3%的接菌量按工艺3分别发酵18 h,发现3者培养菌数基本一致。进一步比较4批合成培养基和普通肉汤发酵18 h的培养效果,期间15、18 h抽样的合成培养基培养菌数分别比普通肉汤高12%和25%;发酵18h的菌液对小鼠安全性及对兔的免疫原性,两者基本一致,接种小鼠均10/10健活,免疫攻毒兔均达4/5~5/5保护,对照攻毒兔5/5死亡。结果表明,发酵培养工艺3可行,可实现仔猪副伤寒活疫苗合成培养基高密度培养,且发酵菌体安全性及免疫原性良好。     

用肉肝胃酶消化液与马丁肉汤制造猪肺疫苗的比较试验

本年曾以猪肉猪肝胃酶消化汤,牛肉马丁肉汤,猪肉马丁肉汤三种培养基制出肺疫苗五批。用鼠、兔二种动物进行效力比较,试验结果猪肉猪肝胃酶最差,其余二种又进一步用猪进行效检三批结果,猪肉马丁肉汤的平均保护率为66.6％,牛肉者为80％。详见附表:     

用不同培养基生产猪多杀性巴氏杆菌活疫苗的试验研究

用马丁干粉和马丁肉汤培养基培养猪多杀性巴氏杆菌,分别生产3批猪多杀性巴氏杆菌活疫苗.结果用马丁干粉培养基生产的制苗用茵液的活菌数分别为1.80×1010 CFU/mL、1.75×1010 CFU/mL、1.80×1010 CFU/mL;冻干后的存活率分别为64%、69%、67%.用马丁内汤培养基生产的制苗用菌液的活菌数分别为1.20×1010 CFU/mL、1.50×1010 CFU/mL、1.10×1010 CFU/mL,冻干后的存活率分别为50%、49%、54%.用两种培养基制备的疫苗按<兽用生物制品检验标准>(以下简称<标准>)检验6批疫苗均合格.     

普通肉汤等培养基的保质期试验

将新鲜原材料配制的普通肉汤、普通琼脂、马丁肉汤、马丁琼脂培养基以及含有指示剂的麦康凯琼脂培养基于室温（普通实验室环境,下同）和冷库（4℃,下同）两种条件存放54周,定期通过灵敏度试验和活菌计数试验检验其质量。通过试验观察到：普通肉汤、普通琼脂培养基于两种条件存放54周后,普通肉汤灵敏度仍能达到10-8以上,普通琼脂培养基中活菌数没有明显减少;马丁肉汤、马丁琼脂培养基于两种条件存放至26周,马丁肉汤灵敏度仍能达到10-8以上,马丁琼脂培养基中活菌数没有明显减少,但30周后CVCC428在马丁肉汤和马丁琼脂中生长繁殖能力明显下降,到46周以后无生长;麦康凯琼脂培养基于两种条件存放54周后,质控菌活菌数没有明显减少,但30周后培养基中指示剂颜色消退明显,菌落特异性显色反应不明显。通过以上各试验结果,可将普通肉汤、普通琼脂培养基保质期暂定为12个月,马丁肉汤、马丁琼脂、麦康凯琼脂培养基保质期暂定为6个月。     

两种培养基生产布氏杆菌病猪型二号活疫苗的对比试验

培养基是动物细菌性疫苗生产的重要物质基础。马丁肉汤培养基是生物制品生产领域常用的培养基,在疫苗制造、细菌培养、分离、鉴定等方面发挥着不可或缺的作用。按照《兽用生物制品规程》的要求以新鲜牛肉汤为主要原材料制作的马丁肉汤培养基含有丰富的天然营养成分,一直是常规生产布氏杆菌疫苗用的传统培养基,马丁肉汤制作工艺繁琐复杂、费时费力,批次间离散度大、浪费大,针对这些问题本试验对猪种布鲁氏菌2号弱毒株C79-2用马丁干粉培养基和自制马丁汤做对比实验,结果发现用马丁干粉培养基培养布氏杆菌,每毫升中的活菌数都比用新鲜马丁汤培养基多,其成品的安检、效检均一次通过,可用于布鲁氏菌病猪型二号活疫苗的生产。使用马丁干粉培养基可降低成本,增加效益。     

兔多杀性巴氏杆菌培养工艺的研究报告

本试验通过对兔多杀性巴氏杆菌培养基的选择、培养工艺以及微生物发酵罐扩大培养的条件进行了研究，试验结果表明：含0．1％裂解血球全血的马丁肉汤培养基适用于兔多杀性巴氏杆菌JN株二级种子液的培养，以及微生物发酵罐生产兔多杀性巴氏杆菌菌液的扩大培养。免多杀性巴氏杆菌JN株微生物发酵罐培养的优化条件：含0．1％裂解血球全血的马丁肉汤培养基pH值为7．2～7．6，二级种子接种量为2％～3％，通气量为5～6L／min，搅拌速度为100～150r／min，37℃条件下培养14～16h。     

生产用培养基对猪丹毒杆菌G4T10株安全及免疫原性试验的比较研究

为明确生产用培养基对猪丹毒杆菌G4T10株安全性及免疫原性影响,采用2种不同批次的肉肝胃膜消化汤（20120123批和130226批）及马丁琼脂（20120904批和130129批）进行猪丹毒杆菌G4T10株培养和选菌,然后进行安全及免疫原性试验。结果共筛选出4种不同优势菌落,其中一株的菌落（20120123批肉肝胃膜消化汤＋20120904批马丁琼脂）形态最好,具有良好的安全性及免疫原性（小鼠全试验9／10存活,其免疫后攻毒达9／9保护）;而有一株菌落（20120123批肉肝胃膜消化汤十130129批马丁琼脂）形态最差,其安全性及免疫原性试验结果差（小鼠安全试验仅6／10存活,其免疫后攻毒仅达2／5保护）。试验表明,不同批次生产用培养基对猪丹毒活疫苗（G4T10株）质量影响大。     

用MM培养基生产羊大肠杆菌病灭活疫苗的试验

本试验研制出一种适于生产羊大肠杆菌病灭活疫苗的培养基(MM培养基)。该培养基不需要牛肉，可替代2%蛋白胨肉汤培养基，使疫苗生产成本由原成本0．014元／mL下降至O．0021元／mL。活菌计数、无菌检验、安全检验和效力试验证明，用该培养基制备的疫苗，均达到了《中华人民共和国兽用药物制品规程》要求的质量标准。     

关于制造猪肺疫菌苗的经验介绍

1、不同培养基对猪肺疫菌的生长情况河南厂用马丁肉汤,2/3马丁肉汤 1/3肉肝胃消化汤, 肉肝胃消化汤和纯肝汤培养猪肺疫菌其中以肉肝胃消化汤活菌数最多,马丁肉汤和3/3马丁肉汤1/3肉肝胃消毒汤次之,纯肝汤最少,但未和效力试验联系起来,因而难定孰优孰劣。     

用马丁干粉培养多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230珠增菌高峰期试验

猪多杀性巴氏杆菌病(猪肺疫)是猪常见的传染病,目前已研制出防治该病的许多种疫苗,利用多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230株生产的猪肺疫活疫苗就是其中之一,许多生物制品厂多采用马丁肉汤作为培养基,用马丁干粉作为培养基使用的较少,目前尚未有报道.试验采用马丁干粉培养基培养多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230株,并对增菌高峰期进行测试,现将结果报道如下.     

用马丁干粉培养多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230株增菌高峰期试验

猪多杀性巴氏杆菌病（猪肺疫）是猪常见的传染病，目前已研制出防治该病的许多种疫苗，利用多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230株生产的猪肺疫活疫苗就是其中之一，许多生物制品厂多采用马丁肉汤作为培养基，用马丁干粉作为培养基使用的较少，目前尚未有报道。试验采用马丁干粉培养基培养多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230株，并对增菌高峰期进行测试，现将结果报道如下。     

介绍猪丹毒氢氧化铝菌苗不加硫柳汞可以防止霉菌

我厂自54年冬制造猪丹毒氢氧化铝菌苗以来到现在已经有两年长的时间,在这两年当中,我厂曾用各种培养基制造出合格的菌苗,其培养基种类有下列5种1、10％血清马丁肉汤 2、肝消化汤、3、膵消化汤、4、肉肝胃酶消化汤、5、肉肝猪胃消化汤。我厂常用的培养基10％血清马丁肉汤和肉肝猪胃消化汤     

标准化无菌及支原体检验培养基应用试验

经微生物促生长及灵敏度检测合格的无菌及支原体检验培养基各3批,分别在6个兽用生物制品企业进行了应用试验。抽检疫苗52批和半成品抗原5批,3批无菌检验培养基检测结果一致,疫苗2/52批、半成品抗原3/5批污染。禽源支原体检验培养基抽检样品17批、非禽源支原体检验培养基抽检33批及血清支原体检验培养基抽检10批,3批培养基检测结果一致,均无支原体污染。     

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌(CVCC79500株)运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18~24 h,37℃、200 r/min振荡培养8~24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108~31×108、33×108~41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108~66×108、78×108~88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5~5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。     

马丁干粉培养基的性能研究

将研制的马丁干粉培养基与新鲜马丁培养基比较,证明用干粉培养基培养链球菌、多杀性巴氏杆菌和丹毒杆菌,其每1 mL中活菌数和灵敏度均与新鲜马丁培养基相当.干粉培养基用于生物制品的生产及检验更方便且质量稳定,可推广应用.     

仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗的研制I.疫苗制备工艺

针对仔猪水肿病发病迅速 ,病死率很高且很难用抗菌药物控制的特点 ,旨在研制一种预防该病的新型高效疫苗。采用仔猪水肿病多发病型菌株O1 3 8、O1 3 9、O1 4 1 以及湖北地方病型菌株作为制苗用菌种 ,优化其培养条件 ,采用蜂胶作为制备疫苗的佐剂 ,对研制的疫苗进行检验。结果表明菌种在优化培养基上生长旺盛 ,疫苗安检小鼠及仔猪全部健活 ,效力检验免疫组保护率达到 10 0 %。结果表明该疫苗制备工艺切实可行 ,疫苗安全性好 ,保护力强 ,值得进一步研究     

猪链球菌病二联灭活疫苗生产菌株的筛选及培养条件的优化

1997年以来上海地区猪链球菌病的主要致病菌群为马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型，通过动物试验，从l0株马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型分离株中筛选出毒力强、免疫原性好的ATCC35246和HA9801株，作为制备疫苗用的生产菌株。对3种不同培养基、血清浓度、葡萄糖浓度、静置和振荡培养、培养基预热等对细菌生长的影响进行了比较。结果表明，用含有2％犊牛血清、0．2％葡萄糖的改良马丁肉汤培养基较为合适；温度对细菌生长的影响很大，培养基接种前预热可以提高细菌产量；振荡培养对细菌生长的影响不大。     

仔猪副伤寒活疫苗半合成培养基的配方筛选试验

研制了一种适用于仔猪副伤寒活疫苗生产的半合成培养基，解决了培养基质量不稳定的问题。选用几种营养成分配比，制成半合成培养基进行细菌培养并冻干，结果冻前菌数超过普通肉汤培养基，冻干存活率略低于普通肉汤培养基，安全性检验合格，证明该培养基替代现用培养基生产疫苗是可行的。     

猪瘟活疫苗效力检验替代方法的研究

目前,我国猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法是测定猪瘟疫苗中病毒的兔体感染量(RID),但是用该方法易受到检验兔品种、个体和饲养环境的影响。为了探索一种不依赖动物的疫苗效力检验新方法,本研究将待检猪瘟活疫苗系列稀释后分别接种易感细胞,使用抗原捕获ELISA、RT-nest PCR和RT-PCR三种方法检测不同稀释度疫苗中活病毒在感染细胞后增殖的子代病毒,计算疫苗病毒的最高细胞感染剂量,建立了猪瘟疫苗病毒的细胞感染量(CID)的效力检验方法。结果显示:疫苗中活病毒粒子越多,CID就越高;对不同类型猪瘟疫苗的检测结果表明,该方法适用于传代细胞源和细胞源猪瘟活疫苗的效力效检。使用CID和RID两种检测方法同时对12批猪睾丸传代细胞源(传代细胞源)和3批牛睾丸原代细胞源(细胞源)猪瘟活疫苗进行了比对效检,结果表明,用CID测定方法检验,12批猪瘟活疫苗(传代细胞源)每头份均含105CID,3批猪瘟活疫苗(细胞源)每头份含量均为104CID;用兔子感染体温测定法,12批猪瘟活疫苗(传代细胞源)每头份含量在2.6×104~3.0×104RID之间,3批猪瘟活疫苗(细胞源)每头份含7.0×103~8.0×103RID。试验证明:本实验室建立的CID检测结果与现有质量标准RID的结果存在良好的相关性,能够较好反映疫苗中活病毒的含量,有望成为RID的替代方法。