抗鸡IgG重链单克隆抗体的制备与应用

以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体的研制

利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）国内分离株Ｊ１,采用反复差速离心法制备免疫抗原,长程免疫法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体,通过细胞融合技术,并经３次亚克隆获得了１０株能稳定分泌抗ＰＲＲＳＶ单抗的杂交瘤细胞单克隆株（Ａ１Ｄ７Ｈ１０,Ａ１Ｄ７Ｈ１１,Ａ１Ｅ７Ｈ９,Ａ１Ｅ７Ｄ９,Ａ２Ｄ８Ｅ７,Ａ２Ｄ８Ｂ１１,Ｂ３Ｄ１１Ｄ６,Ｂ２Ｇ９Ａ９,Ｂ２Ｇ９Ｆ２）。这些细胞经体外连续传     

禽病原性大肠杆菌I型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测

从禽病原性大肠杆菌分离株ＴＫ３（Ｏ１）提取Ｉ型菌毛免疫ＢＡＩＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得４株能稳定分泌针对Ｉ型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为ａＢ６、ｂＧ５、ｃＦ３和ｃＧ３。单克隆阻断甘露糖敏血凝试验,免疫胶体金和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验证明,单抗是Ｉ型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的ＥＬＩＳＡ效价为分别为１０＾－２～１０＾－３和１０＾－５～１０＾－６;腹水的平     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＰＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应，腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０＾－５－１０＾－７，琼扩沉淀效效价达１：２０－１：５１２，鹅胚中和效价达１：３０－１：１２２，鹅体中和效价为１：５４－－１：９６。ＧＰＳ１和ＧＰＧ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的 Ａ 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠后， 取小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选，共获得 １ Ａ８、１ Ｃ３、１ Ｄ５、１ Ｄ８、１ Ｆ１、１ Ｈ１ 和 ２ Ｅ３ ７ 株稳定分泌单克隆抗体（ Ｍ ｃ Ａｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，７ 株 Ｍ ｃ Ａｂ 的 Ｉｇ 亚类有 Ｉｇ Ｇ１（１ Ｄ８）、 Ｉｇ Ｇ３（１ Ａ８、１ Ｃ３ 和 ２ Ｅ３）和 Ｉｇ Ｍ（１ Ｄ５、１ Ｆ１ 和 １ Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 １∶５１２～１∶１ ０２４ 和 １∶１０６ ～１∶１０８ 。尤为重要的是，２ Ｅ３ 杂交瘤细胞株分泌的 Ｍ ｃ Ａｂ 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。     

抗℃型肉毒毒素单克隆抗体的研究

用透村培养法制备的Ｃ型肉毒毒素的类毒素，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合。经ＨＡＴ选择培养基选择培养，其细胞融合率平均为７４．５％。用间按ＥＬＩＳＡ法筛选后，共获得９４孔产生抗Ｃ型肉毒毒素抗体的杂交瘤阳性孔。选其中１Ｃ２、１Ｄ１２、１Ｅ８、１Ｇ６、１Ｇ１１、２Ｂ１２、２Ｃ１１、２Ｅ１２、２Ｇ１１、２Ｈ３、３Ａ４、３Ｃ５、３Ｄ３、３Ｆ７、３Ｈ６共１５孔用有限稀释法进行     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

具有中和活性的减蛋综合征病毒单抗的研制

用减蛋综合征病毒毒株ＷＰＤＶ２０５纯化抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，在最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ－４０００的作用下融合。用间接ＥＬＩＳＡ初步筛选出阳性克隆１０株（４Ｂ１、１Ｄ４、２Ｄ６、３Ｄ６、３Ａ５、２Ａ１、３Ｃ６、３Ｃ１、１Ｂ３和２Ｃ５）。这些杂交瘤细胞经克隆化和再次检测后生产腹水，用微量细胞中和试验筛选出具有中和活性的单克抗隆体４株（４Ｂ１、３Ｃ１、３Ｃ６和２Ｃ５），其     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的蓝舌病病毒（ＢＴＶ）１１型ＶＰ７免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,动用淋巴细胞杂交瘤技术,借助间接ＥＬＩＳＡ筛选,获得了３株分泌抗ＢＴＶ１１ ＶＰ７的群特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株,命名为Ｃ１２Ｄ９、Ｂ４Ｆ３、Ｅ１Ａ７。这３株杂交瘤细胞株连续传代３个月再经液氮冻存６个月后复苏培养,仍能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。３株ＭｃＡｂ均具有ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性,其中Ｃ１２Ｄ９株上清液的ＥＬＩＳ     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体的研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体,这些单抗仅与ＧＰＶ反应,与其它细小病毒（ＣＰＶ,ＦＰＶ,ＰＰＶ）和禽病毒（ＮＤＶ,ＩＢＤＶ,ＤＨＶ,ＤＰＶ）均不反应,腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０＾－５～１０＾－７琼扩沉淀效价达１：２０～１：５１２,鹅胚中和效从达１：３０～１：１２２,鹅体中和效价为１：５４～１：９６,ＧＰＡ１和ＧＰＣ５两株单抗对人感染ＧＰＶ的争论鹅具有良好防治效     

产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备

以粗提的ＥＤＳ－７６病毒（ＮＥ－４株）作为抗原，按常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行融合，采用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ进行双重筛选，共检出２５个阳性孔，阳性率为１４．８８％。对其中的１１个阳性值较高的孔进行３次克隆，最后获得的１１株杂交瘤细胞，经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体；ＥＬＩＳＡ阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定，１１株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性，腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１：３２００～１：５１２００和１：１２８～１：２０４８。杂交瘤细胞的染色体数目为８０～１１２，平均９２。尤为重要的是，１１株杂交瘤细胞中有４株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒血凝素决定簇的中和单抗，细胞培养上清和腹水的ＨＩ价分别为２１０～２￣（１２）和２￣（２２）～２￣（２４），腹水的中和效价为１：１２８０～１：５１２０。     

有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

猪细小病毒生物学特性研究

应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０＾－７．９／ｍｌ和１０＾－６．８／ｍｌ经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密度值分别为１．３３ｇ／ｃｍ＾３和１．３９／ｃｍ，电镜观察病毒粒子呈圆形，直径约２０ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，表明纯化的ＰＰＶ细胞培养毒，主要含两种蛋白成分，分子量     

抗牛IgGFc受体单克隆抗体的生产与鉴定

利用阳性表达细胞和荧光激发流式细胞分类器建立了一个单克隆抗体的制备与快速鉴定系统。用克隆于表达性质粒载体ｐＣＤＭ８的牛ＩｇＧ＿１Ｆｃ受体（ｂｏＦｃγＲⅡ）ｃＤＮＡ转染ＣＯＳ７细胞并用被转染细胞作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ＮＳＯ浆细胞瘤细胞株融合，筛选克隆出３株分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤，即ＣＣ－Ｇ３６、ＣＣ－Ｇ３７和ＣＣ－Ｇ３９。经使用荧光激发流式细胞分类器检测，３个单克隆抗体均识别经ｂｏＦｃγＲⅡ转染的ＣＯＳ７细胞而不识别未经转染的ＣＯＳ７细胞和经牛ＩｇＧ＿２Ｆｃ受体（ｂｏＦｃγ２Ｒ）转染的ＣＯＳ７细胞。３个单克隆抗体分别为ＩｇＧ＿１（ＣＣ－Ｇ３６）、ＩｇＧ＿２ａ（ＣＣ－Ｇ３７）和ＩｇＧ＿３（ＣＣ－Ｇ３９）。本研究还用同样方法验证了单克隆抗体ＣＣ－Ｇ２４抗ｂｏＦｃγ２Ｒ的特异性。     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体（ＭＯ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株．以有限稀释法克隆１～２次，得到６株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株．选择抗体分泌较高的１４Ａ６、７Ａ２７、Ｂ３８进行了较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９４～９６．抗体属性是：１株为ＩｇＧ２ａ、２株为ＩｇＧ１．用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ作符异性分析、该ＭｃＡｂ只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应，而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应．将杂交瘤细胞注射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水．其抗体效价提高１００倍．杂交瘤细胞在液氮中保存１～２年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体ＭｃＡｂ。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒型特异性单克隆抗体的临床治疗试验

通过琼扩试验（ＡＧＰ）和病毒中和试验（ＶＮ）检测ＩＢＤＶ单抗Ｍ１２和Ｄ２９１，其中和效价分别为１：１２＾１４×１００和１：２＾１９×１００，琼扩抗体价分别为１：１２８０和１：１６０，常规免疫血清分别为１：２＾１０×１０（ＶＮ）和１：３２（ＡＧＰ）。将Ｍ１２和Ｄ２９１应用于临床治疗，Ｍ１２（２００只／ｍｌ）保护率为９３％；Ｄ２９１（４５０只／ｍｌ）为９４％；血清（４只／ｍｌ）为９２％，对照组成活率为     

抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。