湿地松体胚增殖与成熟培养研究

以湿地松未成熟合子胚为试验材料,诱导获得胚性胚柄细胞团(Embryogenic Suspensor Mass-ESM),通过培养基的优化,开展湿地松ESM维持与增殖及体胚成熟培养的研究。研究结果表明:基本培养基与植物生长调节剂组合影响ESM的增殖速率及质量,DCR+NAA1.0mg·L-1+6-BA0.32mg·L-1+KT0.30mg·L-1为湿地松ESM的最佳增殖培养基;在无植物生长调节剂培养基上的预培养是湿地松体胚发育、成熟的必要程序,ABA、PEG、AC和高浓度蔗糖的组合进一步促进了体胚的发育成熟,体胚在培养基LP+ABA50mg·L-1+PEG600020%+6%蔗糖+AC2.5g·L-1上获得了近子叶期体胚,但未能获得完全成熟的体胚。     

湿地松体胚发育成熟的影响因子研究

以湿地松4个胚性细胞系(即稳定增殖的胚性胚柄细胞团)为材料,开展体胚发育成熟的关键影响因子研究。结果表明:不同的胚性细胞系和成熟培养基中碳源种类是影响湿地松体胚成熟的关键因素;成熟培养基中PEG分子量大小及PEG、ABA、AC不同浓度组合影响成熟体胚的数量和质量;体胚成熟较佳培养基为LP+ABA70mg.L-1+PEG 8000150g.L-1+麦芽糖60g.L-1+AC 0～2.0g.L-1+琼脂粉3.0g.L-1,直径1cm大小胚性胚柄细胞团可获得成熟子叶胚19.8个。     

抗性湿地松体胚的发育、成熟与萌发

为加快抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生技术的产业化应用进程,本研究以肌醇浓度、脱落酸(ABA)的添加方式、基本培养基、ABA与聚乙二醇(PEG6000)互作、PEG6000及琼脂糖种类及浓度、活性炭(AC)、ABA、液体悬浮培养等因素对抗性湿地松体胚的发育、成熟与萌发的影响进行研究。结果表明:添加8g/L的肌醇为宜,过高浓度的肌醇则不利于湿地松体胚的发育；ABA可以采用高压灭菌；基本培养基、ABA、PEG6000互作对湿地松体胚的成熟影响很大,基本培养基以LP为最佳,ABA的最适浓度为10mg/L,PEG6000以添加25g/L、50g/L为最佳；在湿地松体胚的成熟培养过程中,PEG6000的浓度不能高于100 g/L；在湿地松体细胞胚的成熟培养基中,添加60g/L蔗糖最合适；湿地松体细胞胚的成熟培养基中添加0.5g/L或1g/L的活性炭最有利于体胚的成熟；培养基的状态对体胚的高频率诱导具有一定的影响,悬浮培养以100mL的三角瓶装30mL的培养液,摇床转速以130r/min为宜,液体转固体时吸取1mL培养液为宜；未建立成熟的体胚发生体系前,以采用固体培养为佳。最佳成熟培养基、激素及部分添加物组合为LP+10mg/L ABA+50g/L PEG6000+60g/L蔗糖+1g/L活性炭。     

油松胚性愈伤组织培养中褐化因素研究及增殖培养基的优化

【目的】调查油松Pinus tabulaeformis胚性愈伤组织增殖培养阶段不同因素对于褐化产生的影响,并结合增殖率对培养基进行调整优化以降低褐化率,提高利用率。【方法】以3个年份的9个细胞系的油松胚性愈伤组织为材料,利用单因素试验设计对放置不同数量愈伤块、pH、植物凝胶含量、糖种类和含量以及培养时间的褐化率和增殖率进行测定计算。采用正交试验选出最佳培养条件。【结果】单因素试验结果表明,褐化率在不同基因型间差异显著,且与增殖继代年龄显著正相关;在培养皿中放置6~7块愈伤组织、pH 5.8~6.0、培养基中添加2.0~3.0 g·L~(-1)植物凝胶、添加10 g·L~(-1)蔗糖能保证较低的褐化率和较高的增殖率,且蔗糖优于葡萄糖和麦芽糖。【结论】结合正交设计,90 mm培养皿中放置7块愈伤组织,培养基中添加2.5 g·L~(-1)植物凝胶、10 g·L~(-1)蔗糖,调节pH为5.9时,褐化率、增殖率和利用率最理想。     

抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生与植株再生

为将抗松针褐斑病湿地松(Pinus elliottii Engelm.)良种快速推广,以未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段对胚性愈伤组织诱导以及ABA与PEG8000对体细胞胚成熟的影响,并探讨了体细胞胚质量及干化条件对体细胞胚萌发的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚最利于胚性愈伤组织的诱导,LP+16 mg·L~(-1)ABA+180 g·L~(-1)PEG8000+2 g·L~(-1)AC适合于体细胞胚的成熟,高质量体细胞胚经"滤纸容器法"干化2周后萌发,萌发的体细胞胚于1/4WPM+0.3 mg·L~(-1)NAA+1 mg·L~(-1)IBA上培养70 d左右根部发育,转入1/2WPM中,30 d左右侧根产生发育完整的再生植株。     

枣幼胚体细胞胚的发生及植株再生

以小梨枣胚龄30~40d的幼胚为外植体,研究不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、脱落酸(ABA)及其组合对幼胚胚乳看护培养效果、体细胞胚发生、成熟及萌发的影响。结果表明,适宜小梨枣幼胚(30~40d)胚乳看护培养的培养基为MS+IBA0.2mg·L~(-1)+BA0.5mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1),成胚率达62.07%;诱导胚性愈伤组织较适宜的培养基为MS+TDZ 0.6mg·L~(-1)+IBA1.5mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1),诱导率为53.32%;在MS+6-BA 0.3mg·L~(-1)+NAA0.02mg·L~(-1)组合下有利于体细胞胚的发生,发生率可达71.43%;ABA可促进体胚的正常发育,质量浓度为0.5mg·L~(-1)时,体细胞胚结构完整,体胚成熟率为21.83%;将成熟的体胚转接到含有IBA 0.03mg·L~(-1)+GA30.03mg·L~(-1)的培养基中,体细胞胚萌发形成完整植株。     

ABA和PEG对胡萝卜体细胞胚诱导和调控的影响

对 ABA和 PEG诱导胡萝卜 (Daucus carota L.)体细胞胚发生及其调控体细胞胚发育的效应进行了研究。在 MS液体培养基中 (含蔗糖 30 g/ L)附加 10 μm ol/ L ABA或 10 0 g/ L PEG6 0 0 0诱导体细胞胚 ,能使其提早发生 7～ 10 d,而且能使子叶胚处于调控状态。确定了 ABA和 PEG在 MS液体培养基中 (含蔗糖 10 g/ L)调控胡萝卜体细胞胚发育的下限浓度分别为 1μmol/ L ABA,2 0 0 g/ L PEG6 0 0 0 ,细胞学观察表明此种状态的胚缺乏营养。采用双向电泳分离出与 ABA和 PEG渗透调节密切相关的特异蛋白质多肽 S1 ,分子质量 2 7.9ku,等电点 6 .0左右     

ABA和PEG对胡萝卜体细胞胚诱导和调控的影响

对ABA和PEG诱导胡萝卜（Daucus Carota L.)体细胞胚发生及其调控体细胞胚发育的效应进行了研究，在MS液体培养基中（含蔗糖30g/L)附加10umol/L ABA和100g/L PEG 6000诱导体细胞胚，能使其提早发生7－10d，而且能使子叶胚处于调控状态，确定地ABA和PEG在MS液体培养基中（含蔗糖10g/L)调控胡萝卜体细胞胚发育的下限浓度分别为1umol/L ABA,200g/L PEG 6000，细胞学观察表明此种状态的胚缺乏营养，采用双向电泳分离出与ABA和PEG渗透调节密切相关的特异蛋白质多肽S1，分子质量27．9ku，等电点 6．0左右。     

北美蓝云杉体细胞胚发生技术研究

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+PEG40001.0g/L,胚性愈伤组织增殖率最高为102.27%;3)IBA可促进成熟体细胞胚的诱导,以1/2LM+IBA0.5mg/L+ABA2.0mg/L(以上4种培养基均附加蔗糖30g/L,谷氨酰胺450mg/L,水解酪蛋白500mg/L,琼脂5.0g/L,pH=5.8)的体细胞胚诱导率最高,为38.10%;4)在1/2MS+1.0g/L活性炭的培养基上,体细胞胚萌发,子叶生长但胚根发生较少。北美蓝云杉体细胞胚诱导过程中出现严重的畸形胚现象及生根难的问题,今后有待进一步研究。     

北美枫香雄花和花序轴诱导体细胞胚胎发生

北美枫香是适应性强、生长速度快、秋叶红艳美丽的园林绿化树种。为了提高其繁殖效率,以北美枫香雄花和花序轴为外植体,采用完全随机区组设计,研究外植体类型,基因型,TDZ浓度对北美枫香愈伤组织的诱导、体胚分化和萌发的影响。结果表明:雄花作为外植体,合适的诱导培养基为改良Blaydes培养基+TDZ 0.15 mg/L+水解酪蛋白1 g/L+蔗糖40 g/L+3% 植物凝胶;花序轴作为外植体,合适的诱导培养基为改良Blaydes培养基+TDZ 0.01 mg/L+水解酪蛋白1 g/L+蔗糖40 g/L+3% 植物凝胶。合适的萌发培养基为不含水解酪蛋白的基本培养基。如果出现球形胚,将培养物转接到不含任何生长调节剂的改良Blaydes培养基上,体胚经成熟可进一步形成完整小植株。该体胚体系的建成将显著提高北美枫香的繁殖效率。      

不同植物生长调节剂、碳源对黄芩细胞生长及次生代谢产物的影响

本文着重研究了不同植物生长调节剂和碳源对黄芩愈伤组织生长及黄芩素、黄芩苷合成的影响。结果表明．适宜浓度的IAA、NAA、6-BA、2,4-D和蔗糖、葡糖糖、麦芽糖均促进了黄芩细胞的生长。4种植物生长调节剂中IAA、NAA较显著地促进了黄芩苷、黄芩素含量的提高。碳源中仅有40g·L^-1蔗糖的添加显著提高了愈伤组织中黄芩苷含量。3种碳源对促进黄芩素含量提高的影响顺序依次是：蔗糖〉葡糖糖〉麦芽糖。若仅以黄芩苷和黄芩素含量为单独评价指标,则分别选用0．5mg·L^-1·6-BA或1．0mg·L^-1 IAA、0．2mg·L^-1或3．0mg·L^-1NAA较合适;若综合考虑黄芩愈伤组织生长、黄芩苷和黄芩素含量,则3．0mg·L^-1 NAA最为合适．此时愈伤组织干重增殖倍数为4．98,黄芩苷产量为4．81g·L^-1,黄芩素产量为2．72g·L^-1。     

思茅松成熟胚的胚性愈伤组织诱导与增殖1）

以思茅松（Pinus kesiya var．langbianensis）成熟合子胚为外植体,1／2MSG培养基为基本成分,采用正交试验设计研究2,4－D、6－BA和TRIA 3种植物生长调节剂对其胚性愈伤组织诱导的影响并获得最优诱导培养基,通过改变生长调节剂种类和降低其质量浓度的方式研究胚性愈伤组织增殖效果,筛选适宜的增殖培养基。结果表明：1／2MSG＋2,4－D 5．000 mg· L－1＋6－BA 4．000 mg· L－1＋TRIA 0．005 mg· L－1为最佳诱导培养基;2,4－D对思茅松成熟胚诱导胚性愈伤组织的影响最大,其次是TRIA,6－BA的影响最小;最佳的增殖培养基为P6＋NAA 2．0 mg· L－1＋6－BA 0．6 mg· L－1。     

碳源对山核桃体细胞胚发生和植株再生的影响

以山核桃Carya cathayensis花后10～12周的幼胚为外植体,建立体胚发生及再生体系,同时分别对山核桃胚性愈合组织和体细胞胚诱导的碳源种类和质量浓度进行了比较分析。结果表明：接种在含葡萄糖培养基中的山核桃胚性愈合组织诱导率显著高于蔗糖、海藻糖和麦芽糖,诱导率达33.3%;在培养基中添加20 g.L-1葡萄糖,胚性愈合组织诱导率最高,达50.0%,显著高于其他处理。蔗糖为山核桃体细胞胚诱导的最佳碳源种类,体细胞胚诱导率显著高于葡萄糖、海藻糖和麦芽糖,诱导率达23.3%;在培养基中添加45 g.L-1蔗糖,体细胞胚诱导率最高,达30.1%,显著高于其他处理。体胚在WPM培养基（木本植物用培养基）附加5 g.L-1蔗糖的培养基上萌发率达20%,显著高于附加0,10,15,20,25,30 g.L-1蔗糖的体胚萌发率。     

芸芥体细胞胚胎成熟的影响因素研究

[目的]研究蔗糖、聚乙二醇(PEG)、脱落酸(ABA)及活性炭(AC)对芸芥体胚成熟的影响。[方法]以青城芸芥的无菌苗为试验材料,通过观察诱导体胚的形态和调查成熟体胚及正常体胚的比例,研究各因素对芸芥体胚成熟的影响。[结果]高浓度蔗糖(609、0 g/L)或添加适当浓度的PEG或一定量活性炭的条件下,芸芥体胚成熟均较好,生长快,直径达2 mm左右。45 g/L PEG最适于诱导芸芥体细胞胚胎的成熟,体胚成熟率和正常体胚率分别达35.0%和53.1%。1 g/L AC的效果最好,体胚成熟率和正常体胚率分别达30.6%和46.0%。在添加ABA的条件下,芸芥体胚成熟率和正常体胚率都低于对照。[结论]高糖培养基、添加适当浓度的PEG和一定量的活性炭均有利于芸芥体胚的成熟,ABA不利于芸芥体胚的成熟。     

双色茉莉叶片初代培养物的建立及愈伤组织诱导

以双色茉莉的叶片为外植体,探讨外植体取材时期、消毒时间、不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响,结果表明:取材时期对双色茉莉叶片诱导愈伤组织的影响较为显著,4月份和10月份是双色茉莉叶片取材的最佳时期;不同消毒时间对双色茉莉叶片愈伤组织诱导影响不同,其中在0.1%的氯化汞中消毒5~6 min污染率较低,且诱导产生的愈伤组织生长状况最优;培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)质量浓度/萘乙酸(NAA)质量浓度影响了双色茉莉叶片愈伤组织的诱导,当6-BA质量浓度/NAA质量浓度为1/4~1时有利于愈伤组织的诱导,形成的愈伤组织质量较好;添加激动素(KT)则不利于双色茉莉叶片愈伤组织的诱导。该研究以双色茉莉叶片为外植体,培养获得了愈伤组织,其中愈伤组织诱导的适宜培养基有MS+1.0 mg·L^-16-BA+1.0 mg·L^-1 NAA、MS+1.0 mg·L^-16-BA+2.0 mg·L^-1 NAA、MS+1.0 mg·L^-16-BA+4.0 mg·L^-1 NAA和MS+2.0 mg·L^-16-BA+2.0 mg·L^-1 NAA,这为双色茉莉离体繁殖再生体系的建立奠定了基础。     

苹果菠萝的组织培养与快速繁殖

以苹果菠萝的顶芽和吸芽为外植体,接种于MS+6-BA 3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1的培养基上,30 d后腋芽萌发;再将新芽切割,接种于MS+6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1的培养基上,30~40 d后形成丛生芽,每30~40 d继代1次,可增殖3~5倍;把丛生芽分割成单株并接种于MS+6-BA 1 mg·L-1+AD 3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1培养基上,进行壮苗培养,25~30 d后再转接种于1/2MS+NAA 0.5 mg·L-1+香蕉汁30 g·L-1+蔗糖30 g·L-1培养基上,30 d后可形成完整的根系;小植株移栽成活率可达95%。     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

品种基因型和2,4-D浓度对青稞成熟胚出愈率的影响

 成熟胚培养是转基因的关键技术之一,研究品种基因型和2,4 D浓度对成熟胚培养的影响,有利于提高青稞转基因的效率。本文采用加入20g/L麦芽糖的MS培养基［m（麦芽糖）：m（蔗糖）=1∶2］和完全随机设计,分析了5种2,4-D浓度对5个青稞品种成熟胚出愈率的影响,比较了14个青稞品种的成熟胚出愈率。结果表明,2,4-D浓度和品种基因型均极显著地影响青稞成熟胚出愈率,两者之间具有显著的互作效应;青稞成熟胚出愈率随2,4-D浓度的增加而增加,并在4mg/L处理中出愈率达到最高,随后出愈率随2,4-D浓度的增加而降低;对照（0mg/L）的出愈率极显著地低于其他处理的出愈率,但其他4个2,4-D浓度处理的出愈率之间没有显著差异;14个青稞品种的成熟胚出愈率之间具有极显著差异,其中ZJ45等7个品种的出愈率达到了（90.00 ±7.07）%,显著高于D-5等6个品种的成熟胚出愈率。ZJ-45等7个品种可用于成熟胚培养;用PEG和双蒸水先后浸种3h和19h,将成熟胚置于加入20g/L麦芽糖和4mg/L 2,4-D的MS培养基［m（麦芽糖）：m（蔗糖）=1∶2］上培养是ZJ-45等7个青稞品种成熟胚培养的适宜方法。