棘孢木霉对水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌生物防治的研究

为了检测棘孢木霉T12对立枯丝核菌的生防效果,测定了T12对立枯丝核菌RS02菌株竞争性抑制作用,T12挥发性代谢物对RS02菌核萌发和菌丝生长的影响,T12的发酵液对RS02菌核萌发、菌丝干质量和侵染相关酶活力的影响。结果显示,培养4d的T12通过空间竞争对RS02生长产生抑制,抑制率达78.7%;T12产生的挥发性物质对菌核萌发和菌丝生长抑制率分别为10.3%、12.2%;大于10%浓度T12发酵液对菌核萌发、菌丝干质量均表现出显著或明显的抑制效果,50%浓度发酵液对菌核萌发、菌丝干质量的抑制率分别为65.7%、88.2%;培养5 d,10%、30%、50%浓度发酵液处理的RS02纤维素酶活力分别降低了17.4%、55.0%、76.8%,果胶酶活力分别降低了21.8%、53.9、69.5%。综合试验结果可知,棘孢木霉T12能够显著抑制立枯丝核菌的生长并降低其侵染能力。     

木霉菌株Td31代谢产物对立枯丝核菌的拮抗作用

为了明确木霉菌株Td31代谢产物对植物病原真菌的拮抗作用,利用液体深层发酵法发酵木霉菌株Td31,过滤除菌制备代谢产物,采用生长速率法、显微观察法和盆栽试验法,研究了木霉菌株Td31代谢产物对立枯丝核菌的菌抗作用.结果表明:木霉菌株Td31的代谢产物可抑制立枯丝核菌菌丝的生长及菌核形成和萌发.其中以代谢产物稀释1倍处理的抑菌作用最强,菌丝生长抑菌率高达87.7%,并可完全抑制菌核的形成,菌核萌发抑制率为56.7%.随着木霉菌代谢产物浓度的降低其抑菌效果也随之下降,差异极显著.经木霉菌株Td31代谢产物处理的菌丝原生质浓缩、细胞质外溢、空胞化、细胞壁消解、菌丝斛体.盆栽防病试验结果表明,木霉菌株Td31代谢产物浸种可以有效地防治茄子立枯病,用发酵液原液浸种,防病效果可达69.8%.代谢产物浓度越高,防病效果越好.代谢产物经121℃处理20min后,对抑菌活性和防病效果无明显影响,代谢产物中的主要抑菌活性物质可能是耐高温的抗生素.     

长枝木霉T8对水稻纹枯病菌拮抗作用的研究

对峙培养表明:长枝木霉T8[Trichoderma longibrachiatum]对立枯丝核菌有较强的拮抗作用,拮抗系数为1。长枝木霉T8对立枯丝核菌形成明显的拮抗区带,界面处病菌菌丝的细胞质变稀薄、消解或菌丝断裂,病菌菌丝停止生长,同时对立枯丝核菌菌核形成包围,抑制其萌发。在光学显微镜下,可观察到长枝木霉T8对立枯丝核菌菌丝的缠绕、细胞质变稀薄、菌丝消解、菌丝断裂或侵入等现象。     

生防菌长枝木霉菌株T6及其代谢产物对立枯丝核菌拮抗作用

为了开发对立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）具有较好拮抗作用的生防制剂,采用对峙培养法、含药培养基法和显微观察法,测定生防菌长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum）菌株T6及其代谢产物对立枯丝核菌的抑制作用活性,初步探究长枝木霉菌株T6的作用机制。结果表明,长枝木霉菌株T6对立枯丝核菌生长具有显著的抑制作用,对峙培养5 d时菌株T6不仅对立枯丝核菌营养生长抑制率为66.50%,而且对其菌丝具有明显重寄生作用。菌株T6发酵液及其代谢产物对立枯丝核菌营养生长也具有显著的抑制效果,培养4 d时其对立枯丝核菌的生长抑制率分别为72.29%和71.91%。因此,长枝木霉菌株T6对立枯丝核菌具有显著的拮抗作用,主要通过对病原菌的重寄生作用及其代谢产物发挥拮抗作用。     

枯草芽孢杆菌对百合枯萎病的防治效果

采用菌丝生长速率法及孢子萌发法,研究枯草芽孢杆菌对百合枯萎病菌的抑杀效应。枯草芽孢杆菌无菌滤液在一定体积分数范围内能有效抑制枯萎病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且随着无菌滤液体积分数的增加,孢子萌发抑制率也增大。体积分数为20%的枯草芽孢杆菌无菌滤液,处理后7d抑制率可达78.8%。体积分数为60%时,可完全抑制孢子萌发。盆栽防治试验表明,枯草芽孢杆菌菌液对百合枯萎病的发病抑制率达65.3%。且该菌液对百合的生长有一定的促生功效,说明枯草芽孢杆菌对百合枯萎病有抑菌和防病作用,且抑菌作用随枯草芽孢杆菌菌液体积分数的增加而增强。     

放线菌LDP-18发酵液杀菌活性研究

LDP-18是从秦岭土壤中分离到的一株放线菌 ( Streptomycessp.)。分别采用抑制菌丝生长速率法、抑制孢子萌发法、管蝶法等测定了其发酵液的杀菌活性。结果表明 ,发酵原液对油菜菌核、烟草赤星、西瓜枯萎、苹果轮纹、番茄早疫及小麦根腐病菌的菌丝生长抑制率均在 95 %以上 ;对烟草赤星、玉米大斑、小麦根腐、黄瓜霜霉病菌的孢子萌发抑制率均达 80 %以上 ;对枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌圈透明且直径均达到了 15 mm以上。盆栽试验结果表明 ,其对小麦白粉病的治疗和保护效果分别为 5 7.2 5 %和 62 .0 0 %。     

立枯丝核菌拮抗青霉菌筛选及抑菌机制初步研究

为筛选具有生防作用的青霉菌菌株并探索其作用机制,采用平板稀释法和对峙培养法,从宁夏回族自治区境内不同作物土壤中分离到18株青霉菌菌株,筛选到1株具有高效拮抗立枯丝核菌的生防菌P19,对立枯丝核菌丝生长抑制率达58.5%。利用光学显微镜观察P19对立枯丝核菌菌丝形态的影响,发现菌丝壁出现弯曲和畸形,原生质体凝结和溶解,菌丝被溶解等现象。结果表明,P19对立枯丝核菌具有明显的抑制作用,其生长对立枯丝核菌造成空间和营养方面的竞争,也可能是P19所含有的抗菌物质破坏立枯丝核菌的细胞壁,进而溶解菌丝内的原生质体,使立枯丝核菌的生长受到限制。     

内生甲基营养型芽孢杆菌对罗汉果斑枯病的拮抗作用

【目的】研究甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株bjq-a对罗汉果斑枯病(Stagonosporopsis cucurbitacearum)的防治效果,为罗汉果斑枯病的绿色防控及生防菌剂的开发利用提供技术支持。【方法】采用平板对峙法、发酵液共培养、凹玻片悬滴和显微观察等方法手段,测定拮抗菌株bjq-a与罗汉果斑枯病病原菌对峙培养后的菌丝形态、菌丝生长抑制率及孢子萌发抑制率;采用离体叶片接种法分析bjq-a对罗汉果斑枯病菌的防治效果;通过检测bjq-a发酵液中蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶含量,初步分析bjq-a的抗菌机理。【结果】拮抗菌株bjq-a与罗汉果斑枯病病原菌对峙培养30 d,罗汉果斑枯病病原菌菌丝生长抑制率为62.5%;40%和20%bjq-a发酵液对罗汉果斑枯病病原菌菌丝的生长抑制率分别为99.5%和96.2%;50%bjq-a发酵液对罗汉果斑枯病病原菌孢子萌发的抑制率为90.5%;bjq-a发酵液能造成病原菌菌丝及孢子膨大畸形;应用20%bjq-a发酵液防治罗汉果斑枯病,发病时间延迟1 d,病害发生率降低60.0%,病斑扩大抑制率为82.2%;bjq-a菌株能分泌高活力蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶等细孢壁水解酶,是产生拮抗活性的机理之一。【结论】具有广谱抗真菌活性的拮抗菌株bjq-a对罗汉果斑枯病具有较好的防治效果,具有进一步开发为生防菌剂产品的潜力。     

几丁质酶产生菌的筛选及其发酵液对病原真菌的拮抗作用

采用稀释平板涂抹法从山东的土样和水样中分离到了31株产几丁质酶的菌株,通过几丁质水解圈直径和摇瓶试验筛选出产几丁质酶活力较高的A9和A112株菌。研究发现:①经过对它们细胞形态和菌落形态特征的观察,证明A9和A11菌株分别是链霉菌和芽孢杆菌。②测定A9和A11菌株几丁质酶发酵液对植物病原真菌孢子萌发的抑制率分别为26.1%～78.6%和17.2%～73.7%,孢子和菌丝有的变畸并产生泡囊;平皿拮抗试验表明,它们能够抑制多种植物病原真菌的生长,表明它们对植物病原真菌的拮抗作用具有广谱性。     

两种生防制剂对食用菌杂菌的抑制作用

利用生长速率法和悬滴法,测得生防药剂多粘类芽孢杆菌剂和枯草芽孢杆菌剂对食用菌常染杂菌脉孢霉和青霉菌丝的生长速率和孢子萌发的抑制效果。试验结果显示,两种生防制剂对脉孢霉和青霉有一定的抑制作用,其中,多粘类芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉孢子萌发的抑制作用明显,抑制率分别为90.44%和65.04%;而枯草芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉的菌丝生长的抑制效果在处理中表现为最高,抑制率分别为36.29%和46.66%。因此,多粘类芽孢杆菌药剂可以作为杂菌孢子抑制剂,枯草芽孢杆菌药剂可以作为杂菌菌丝生长的抑制剂。     

黄瓜蔓枯病拮抗细菌的分离与筛选

以黄瓜蔓枯菌(Ascochyta citrullina)为指示菌,采用平板稀释法和对峙法对48份土样进行分离筛选得到拮抗细菌53株,发现菌株G8、Sh34拮抗谱宽,对黄瓜蔓枯菌和菌核抑制效果均超过76%,且能分泌几丁质酶。温室接种防病试验结果表明,两菌株发酵液对黄瓜蔓枯病菌防治效果分别达62.5%和51.0%。根据对两菌株形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析,均被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8复配对棉花的解盐促生作用

[目的]为微生物菌剂的产品开发和应用提供理论依据。[方法]将产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按不同比例复配,研究不同复配组合对棉花的解盐促生作用及其对立枯丝核菌的抑菌效果。[结果]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按1∶（1～2）复配时,对立枯丝核菌具有很好的抑菌效应;两者按1∶（1～2）复配浸种的棉花种子的发芽率为86.67%（是对照组的1.49倍）,盆栽试验中棉花种子的发芽率和成苗率分别达到60.00%和50.00%,分别是对照组的1.50和1.67倍。[结论]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按适当比例复配对盐胁迫条件下的棉花具有显著的促生作用。     

棉花立枯病拮抗细菌的分离鉴定及抑菌活性

为获取对棉花立枯病具有生防作用的细菌，从棉田土壤中筛选出1株高效抑制立枯丝核菌的拮抗细菌W1，通过形态学特征结合16S rDNA序列分析鉴定其分类地位，并采用平板对峙法分析其抑菌活性。结果表明，拮抗细菌W1经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），其对立枯丝核菌具有稳定的抑菌作用，发酵原液的抑菌率为82.12%，稀释5倍的无菌发酵液和菌体破碎液抑菌率分别为42.54%和46.15%。抑菌活性受培养基成分影响，BPA培养基的发酵液抑菌率最高，达98.34%,NA培养基抑菌率仅为17.12%。抑菌活性物质在80℃、中性和偏碱性条件下具有稳定性，对蛋白酶K处理不敏感。显微观察发现，菌株W1的主要拮抗机理是通过产生拮抗物质造成病原菌的菌丝消融、菌丝体断裂、扭曲和畸形。结果表明拮抗细菌W1是具有潜在应用前景的防治棉花立枯病及其他植物真菌病害的菌株资源。     

立枯丝核菌拮抗细菌SJ05的分离鉴定及生理特性

通过平板对峙试验,从54份土壤样品中分离获得1株对立枯丝核菌拮抗作用最强的细菌SJ05,经生理生化鉴定,结合其菌落形态特征,初步将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);其生长特性试验表明,菌株SJ05生长适温在28~32℃,生长最适pH为7.0~7.5,最高可耐5%的盐浓度。     

放线菌19G-317菌株发酵产物抑菌活性初步研究

【目的】明确放线菌19G-317菌株发酵产物对植物病原菌的抑制活性,为该菌株在农业病害防治中的开发应用及后续研究奠定基础。【方法】采用生长速率法、孢子萌发法、活体组织法和盆栽试验,测定放线菌19G-317菌株发酵产物的抑菌效果。【结果】生长速率法试验表明,放线菌19G-317菌株发酵产物对供试22种植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,发酵液对其中11种植物病原菌的抑制率大于60%,菌丝提取物对其中8种植物病原菌的抑制率大于90%;发酵液和菌丝提取物对油菜菌核病菌菌丝生长的EC50分别为84.30和18.80 mg/L。孢子萌发试验表明,发酵液和菌丝提取物对番茄灰霉病菌孢子的萌发均有较强的抑制作用,在0.5 mg/mL质量浓度下,其抑制率分别为94.26%和96.20%;组织法试验表明,在10 mg/mL质量浓度下,发酵液和菌丝提取物对番茄灰霉病的药效分别为72.17%和76.95%;盆栽试验表明,19G-317菌株发酵液和菌丝提取物对辣椒疫霉病均有一定的保护和治疗作用。【结论】放线菌19G-317菌株抑菌谱较广,对植物病菌的防治有很大的研究开发潜力。     

阿萨尔基亚芽孢杆菌对大丽轮枝菌微菌核的抑制作用

旨在分析阿萨尔基亚芽孢杆菌(TUBP1)对大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)微菌核的抑制作用.通过菌核萌发法、共培养、盆栽试验和扫描电镜观察,明确阿萨尔基亚芽孢杆菌发酵液对微菌核萌发的影响.菌核萌发试验结果表明,大丽轮枝菌微菌核经过阿萨尔基亚芽孢杆菌原发酵液、5倍和10倍稀释发酵液处理72 h后,微...     

枯草杆菌B_s501抗稻瘟病菌条件优化

[目的]提高枯草芽孢杆菌的拮抗作用。[方法]通过正交试验和单因素试验研究了枯草杆菌Bs501的发酵基础培养基和最适发酵条件,明确了几丁质的添加量及添加时机,分析了二价金属离子对枯草杆菌发酵液的影响。[结果]枯草杆菌在LB培养基上培养12 h达到对数生长末期,随后生长曲线快速下降,56 h出现小波峰。各因子对枯草杆菌Bs501生长量的影响为蛋白胨>蔗糖>酵母膏>K2HPO4,它们对枯草杆菌Bs501的抑菌活性为蔗糖>蛋白胨>酵母膏>K2HPO4。最佳基础培养基确定为3%蔗糖、1%蛋白胨、0.5%酵母膏0、.45%K2HPO4。最适发酵条件为:起始pH值7.0、培养温度30℃、发酵时间48 h。培养12 h添加0.5%几丁质诱导枯草芽孢杆菌Bs501产生拮抗物质的效果最显著。Ca2+可显著提高发酵液的抑菌活性。[结论]该研究为枯草芽孢杆菌的工业深层发酵提供了技术参考。     

不同杀菌剂对茶云纹叶枯病菌的体外抑制作用和大田防治效果

为了筛选安全高效防治茶云纹叶枯病的杀菌剂,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定武夷菌素、多抗霉素、春雷霉素、枯草芽孢杆菌、戊唑醇共5种杀菌剂对病原菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制作用,并基于此开展大田防治试验。结果表明,戊唑醇、枯草芽孢杆菌对菌丝生长的抑制作用较强且持久,春雷霉素对分生孢子萌发的抑制作用强,对菌丝生长也有一定的抑制效果。430 g/L戊唑醇SC 5 000倍120 h对菌丝生长的抑制率为98.35%,100亿个/g枯草芽孢杆菌WP1 200倍120 h对菌丝生长的抑制率为83.64%,6%春雷霉素WP 1 200倍对菌丝生长和分生孢子萌发的抑制率分别为40.96%和96.65%。430 g/L戊唑醇SC 5 000倍+6%春雷霉素WP 1 000倍混配对菌丝生长和分生孢子萌发的抑制率分别达到100%,100亿个/g枯草芽孢杆菌WP 1 000倍+6%春雷霉素WP 1 000倍混配对分生孢子萌发的抑制率达100%,但对菌丝生长的抑制作用较差。大田试验表明,430 g/L戊唑醇SC 5 000倍+6%春雷霉素WP 1 000倍混配、430 g/L戊唑醇SC5 000倍、6%春雷霉素WP 1 000倍与100亿个/g枯草芽孢杆菌WP 1 000倍交替使用、6%春雷霉素WP 1 000倍、100亿个/g枯草芽孢杆菌WP 1 000倍的防效分别为78.81%、77.90%、77.66%、74.69%、68.13%。生产中可采用430 g/L戊唑醇SC 5 000倍+6%春雷霉素WP 1 000倍混合喷雾,或者6%春雷霉素WP 1 000倍与100亿个/g枯草芽孢杆菌WP 1 000倍交替使用2个配方进行防治。有机、绿色茶园防治,建议采用6%春雷霉素WP 1 000倍与100亿个/g枯草芽孢杆菌WP1 000倍间隔10～15 d交替喷雾1次。     

1株拮抗棉花枯、黄萎病菌的纤维素分解菌筛选

为获得具有拮抗棉花枯、黄萎病菌的棉杆促腐菌剂,进行棉杆纤维素分解菌分离及拮抗菌株的筛选,采用平板对峙法测定菌株对棉花枯、黄萎病菌菌丝生长的影响,通过生长速率法和孢子萌发法测定菌株发酵液对2种病原菌菌丝生长以及孢子萌发的影响,并对筛选得到的菌株进行鉴定。结果获得1株具有抑菌效果的棉杆纤维素分解菌SJ-3,其羧甲基纤维素酶活(CMCase)达到69.1 U/mL,滤纸酶活(FPase)达到48.5U/mL。该菌对棉花枯、黄萎病菌菌丝生长均有显著抑制,抑制率分别达到24.7%、23.1%。其发酵液具有抑菌活性,较高的发酵液浓度能增强对病原菌的抑制作用,发酵液对枯萎病菌孢子萌发的抑制作用较强,最高抑制率为21.6%,而对该病原菌菌丝生长的抑制较弱,最高抑制率仅为6.2%;发酵液对黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作用,最高分别达到32.2%、21.4%。经鉴定,菌株SJ-3为普通青霉(Penicillium commune)。     

稻瘟病菌拮抗细菌的筛选及其防效作用研究

从黑龙江省16个市县采集水稻根系土壤,利用平板画线分离获得579株细菌。通过平板对峙法进行抑菌试验,筛选获得一株拮抗细菌Sc2。该菌株对稻瘟病菌抑菌率达73.44%。经形态、生理生化特性和16S r DNA序列分析,Sc2被初步鉴定为枯草芽孢杆菌。Sc2无菌发酵上清液对稻瘟病菌菌丝生长和分生孢子萌发均有显著的抑制作用。随着稀释倍数的增加,抑制效果逐渐下降,其中将浓度为1.8×108cfu/m L的无菌发酵上清液稀释至40倍时,对稻瘟病菌分生孢子萌发的24 h抑制率及菌丝生长的7 d抑制率仍达60%以上。室内盆栽试验结果表明,Sc2对稻瘟病的防治作用主要在预防,Sc2与三环唑按1∶2混配,防治稻瘟病的防效达90.33%。