禽霍乱强化苗研究：Ⅰ.强化苗研制与免疫保护性试验

本试验通过筛选抗原性较好的多杀性巴氏杆菌，经禽胚培养增殖细菌，灭活后加入免疫增强剂左旋咪唑和亚硒酸钠维生素Ｅ，制成油乳剂强经苗，试验表明，每头份含抗原量１００亿，左旋咪唑和亚硒酸钠维生素Ｅ合用组免疫效果最佳。注射本苗后，鸡群第４天产生免疫应答，第７天即可产生坚强的免疫力，试管凝集抗体效价达到１：８６，攻毒保护率达８３．３％，第１４天即可达１００％，免疫期６个月。免疫期内攻毒保护率为９７．６％，当试     

兔三联灭活疫苗的研究

从患兔瘟的肝、脾、肾中采取含毒病料，从患急性巴氏杆菌病和魏氏梭菌性肠炎的病例中分离细菌，研制成氢氧化铝甲醛灭活疫苗。经试用，免疫后７ｄ至８个月内不同时期均能有效地控制疾病。对免疫兔进行免疫效力及免疫期的测定，结果表明，在７ｄ，５０ｄ，１００ｄ和１８０ｄ内均能抵抗致死量兔瘟强毒的攻击；在免疫后２０ｄ时全部能抵抗１０个最小致死量的兔巴氏杆菌培养的攻击，经７５ｄ后也有１００％的保护率；     

MD疫苗免疫雏鸡vMDV攻击后细胞免疫功能的变化

马立克氏病（ＭＤ）三价疫苗免疫雏鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）攻击后，免疫保护指数（ＶＰＩ）为７３．３０％，脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞增殖反应比ｖＭＤＶ感染雏鸡和ＨＶＴ疫苗免疫后ｖＭＤＶ攻击雏鸡显著增强（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），外周血液Ｔ辅助细胞（ＴＨ）和单核细胞数量显著增加（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０５）．火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗免疫雏鸡ｖＭＤＶ攻击后，ＶＰＩ为５６．７％，脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞增殖反应比ｒＭＤＶ感染雏鸡显著增强（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０５）和外周血液ＴＨ数量显著增加（Ｐ＜０．０５），单核细胞数量虽有增加但无统计学显著性差异（Ｐ＞０．０５）．     

鸡传染性法氏囊病胚胎免疫研究

用ＩＢＤＢＪ８３６免疫接种１８ｄ龄鸡胚，雏鸡在１，３，６周龄用ＩＢＤ强毒攻毒，获得显著保护，其保护率分别为６６．７％，８７．５％和１００％，且早期免疫保护率高于雏鸡免疫。ＩＢＤ胚胎免疫安全，不影响孵化率和健雏率，对新城疫苗的免疫应答没有抑制作用。     

微量血凝抑制试验检测鸡IBV抗体水平的研究

以兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理ＩＢＶ－Ｈ１２０浓缩毒作血凝抗原，应用微量血凝抑制试验（ＨＩ）方法检测未免疫鸡群及自制鸡传染性支气管炎（ＩＢ）疫苗免疫鸡群血清的ＨＩ效价。结果表明，自制ＩＢ疫苗免疫后第７天抗体水平开始上升，免疫后３０天抗体水平达１２Ｌｏｇ２，抗体水平维持１０Ｌｏｇ２时间为１００天左右，免疫后１８０天抗体水平不低于６Ｌｏｇ２。对未免疫过ＩＢ疫苗的２０个鸡群进行免疫检测发现１８个鸡群为阳性，阳性率达８３％。研究表明，该法操作简便，结果准确，为检测ＩＢ抗体水平的有效方法之一。     

鸡传染性囊病二价活疫苗最佳配比试验

使用ＳＰＦ雏鸡进行鸡传染性囊病二价活疫苗毒株最佳配比试验，将ＢＪ８３６毒株与ＢＫ９１２毒株按病毒含量分别配成ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ５种不同配比疫苗，免疫１４日龄ＳＰＦ雏鸡，免疫后１４天进行ＩＢＤＶＩ型强毒ＣＪ８０１和变异株强毒１０８４Ａ的攻击。结果表明：ＢＪ８３６与ＢＫ９１２为ｅ配比值疫苗对ＣＪ８０１或１０８４Ａ毒株的攻击保护率达９０％以上，表现出最好的免疫攻击保护效果。该毒株配比可作为研制该二价活疫     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定与免疫研究

从吉林省３个地区接种过传染性支气管炎疫苗（Ｈ１２０、Ｈ５２）后又发生肾型传染性支气管炎的鸡尸中采集了８份病料,经抗菌处理后接种鸡胚尿囊腔中进行病毒的分离与扩繁。并通过鸡胚发育观察、ＨＡ试验、干扰ＮＤＶ试验、耐酸碱试验及电镜观察,证明其中２株是ＩＢＶ。又对分离株（ＪＮ５、ＪＮ６）进行了琼脂扩散试验、回归试验及ＥＩＤ５０测定。经上述试验后,采用标准Ｔ株与ＪＮ６株病毒等量混合液制成油佐剂灭活疫苗。该苗免疫试验鸡后,气管注射攻毒法保护指数（ＰＩ）为０９３１,滴鼻攻毒法保护指数（ＰＩ）为０９６３。免疫接种４５万只鸡,免疫期为６个月,保护率达９８％以上。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

鸽新城疫病毒分离株的分子基础和免疫学研究报告

用电镜技术对鸽新城疫病毒分离株进行了形态学鉴定，ＡＧＰＣ法提取病毒的ＲＮＡ，反转录后用ＰＣＲ方法扩增到该分离株Ｆ０裂解位点附近的３００ｂｐ的基因片段。序列分析表明：该分离株与鸡新城疫强毒Ｔｅｘａｓ的同源性为８７．７％，而与弱毒株Ｄ２６／７６及Ｌａｓｏｔａ的同源性分别为９１．７％和９８％；证实其Ｆ０裂解位点的氨基酸顺序为Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ，属于新城疫弱毒。将分离毒株接种无新城疫母源抗体的９日龄鸡胚制成油乳苗，每只幼鸽接种０．２５ｍｌ，成年鸽接种０．５ｍｌ，１０天后即可产生坚强的免疫力，保护率达１００％，免疫效力可维持６个月。     

鸡马立克氏病疫苗不同接种途径对免疫效果的影响

用ＣＶ１９８８＋ＨＶＴ二价细胞结合苗分别以气雾、点眼、滴鼻、皮下注射４种不同途径免疫１日龄雏鸡,另设一组鸡作为非免疫对照组。免疫后第８ｄ,每组鸡均用ＭＤＶＢＪ－１强毒攻击,气雾、点眼、滴鼻和皮下注射免疫保护指数分别为７．８９％、７．３０％、９．１９％和６７．０２％。皮下注射免疫组与其他免疫组之间差异极显著（Ｐ〈０．０１）;气雾、点眼、滴鼻以及非免疫对照组之间差异不显著（Ｐ〉０．０５）。结果表明皮下     

新城疫热稳定性天然弱毒株B95免疫效果的研究

分别用ＮＤＶ疫苗株和不同稀释度的Ｂ９５Ｇ毒株，经不同免疫途径进行雏鸡的免疫，当雏鸡ＮＤＶ母液抗体下降到较低水平时，Ｂ９５病毒液５０倍稀释组在免疫后５d即可见抗体滴度上升，到达高峰时抗体效经免疫前上升４．６个滴度，在攻毒试验中，除Ｂ９５１００００倍稀释组外，其余Ｂ９５各组在免疫后１５d、30d攻毒保护率均为5／5，即全部保护。当在雏鸡母源抗体较高时免疫，Ｂ９５病毒液50倍稀释组抗体达高峰时其效价比对照组高2．5个滴度，结果表明，该组与Clone30疫苗组免疫效果相当，能使机体产生良好的免疫。     

广东兰花病毒病的鉴定和检测研究

用建立的ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法，检测了来自广东省７市１８个场场或兰圃的２０种兰共１５９个感病兰花样本，建兰花叶病毒（ＣｙＭＶ）和齿兰环斑病毒（ＯＲＳＶ）以及ＣｙＭＶ和ＯＲＳＶ复合感染分别在４０，２６和６个样本中检测到，分别占所检测样品的２５．２％，１６．４％和３．８％，占所检测的２０个兰种的５０％（１０／２０），３５％（７／１０）和１５％（３／２０），感染ＣｙＭＶ的兰种有墨兰，文心兰，大花惠兰（组培     

兔鸡两用多杀性巴氏杆菌灭活疫苗的研制及野外应用

从近２００份兔源禽源巴氏杆菌中分离到荚膜Ａ型多杀性巴氏杆菌兔１株，其血清型抗式为０７：Ａ，可抗血清型０５：Ａ、０７：Ａ、０８：、０９：Ａ菌株的攻击，将其作为制菌株制成的疫苗，对兔鸡均获得满意的免疫效果，兔３个月的保护率为９０．３８％，６个月为７３．０７％；鸡３个月的保护率为８４．６１％，４个月７１．１５％。疫苗在４－１５℃保存期为１年。已在国内９个省，自治区野外应用２００余万头剂，反馈资料证明疫苗     

MDV感染鸡羽毛根病毒抗原和DNA的动态检测

１０羽１４日龄鸡分别以马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＢＪ－１株接毒，采集羽毛根作为ＭＤＶ琼扩抗原和ＭＤＶＤＮＡｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交的动态检测样品。接毒后第１０ｄ至第８周的检测结果显示，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原及ＭＤＶＤＮＡ可分别在接毒后第１４ｄ（３７．５％，３／８）和第１２ｄ（３３．３％，３／９）检出；接毒后第１７ｄ至第５周，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原的阳性检出率均大于８０％；第６，７和８周时，则分别降至６６．７％（４／６），５０％（３／６）和４０％（２／５）。而ＭＤＶＤＮＡ的检测，除１只鸡直到第４周才呈阳性外，其余在接毒后第１４ｄ至第８周中均保持１００％的阳性检出率。     

禽霍乱强化苗研究：Ⅱ.与国外同类苗免疫比较

本试验将研制的禽霍乱强化苗与Ｉｎｔｅｒｖｅｔ疫功进行免疫比较试验，结果表明强化苗在免疫早期抗体产生优于Ｉｎｔｅｒｖｅｔ疫苗。免疫１个月后，两种疫苗试管凝集抗价曲线无明显差异，免疫期均达６个月。两种疫苗１至６个月的攻毒保护率分别为９４．４％和８６．７％，两种疫苗免疫接种产蛋鸡后２周内，分别使免疫鸡的平均日产蛋量下降２．６％和６．５％，以上试验表明，本课题组研制的禽霍乱强化苗在免疫性方面已经达到或部分     

鸡新城疫─传支二价油乳剂苗的研制及免疫试验

以 ＮＤ Ｌａｓｏｔａ株、呼吸道型传支（ＲＩＢ）Ｈ１２０株和肾型传支（ＫＩＢ）ＳＮ９３０１株为制苗毒株，分别经鸡胚繁殖后甲醛灭活。灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中，乳化制成新城疫—传支二价油乳剂苗。对所研制疫苗的安全性、稳定性和保存期等进行测定，同时开展了免疫试验。结果表明：１．疫苗安全稳定，易于保存，物理性状良好。２．将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首免，免后 １５ ｄ可产生较高的抗体（ＨＩ抗体在 ５． ７～７． ５ ｌｏｇ２），第 ３０ ｄ抗体达峰值并可持续到第８０ ｄ（ＨＩ抗体在 ６． ２～８， ７ ｌｏｇ２），之后抗体逐渐消减，至免后 １００ ｄ时仅为 ５． ６～６， ４ ｌｏｇ２。免后第 １０２ ｄ用相应强毒攻击均获保护（１００％）。 ３．单用该苗给雏鸡首免，或用相应弱毒苗免疫雏鸡，免疫效果均较差。     

鸡肾型传染支气管炎（IB）疫苗的研制

用鸡传染性支气管炎病毒Ｘ株接种１０日龄鸡胚尿囊腔,收集尿囊液,经甲醛灭活后,按一定的比例,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活苗,免疫鸡３０ｄ后,保护率达１００％,并呈现良好的体液免疫应答,血凝抑制抗体效价达２＾Ｈ,病毒中和效价达１：１０＾６,疫苗在４℃保存７个月后用来免疫鸡,其对同源毒株的攻击仍呈现较好的保护作用,保护率达９５％,该疫苗安全、可靠、稳定性高,４℃放置１年不分层,不破乳。     

热带兰花引入品种的病毒检测

采用植物病毒抗血清技术对引入的４２６个热带兰花品种进行两种主要病毒的检测，结果表明，引入品种中蕙兰花叶病毒（ＯＲＳＶ）总感病率为３８．０％，齿舌兰属环斑病毒（ＣＹＭＶ）总感病率为２７．７％。其中蝴蝶兰、卡特利亚兰、文心兰两种病毒感病率均较高，而且较为接近，在４０％～６０％范围内；石斛兰感病率较低，对两种病毒具较强的抗性；大花蕙兰易感ＯＲＳＶ，感病率高达４２．８％，较抗ＣＹＭＶ，感病率仅６．８％。     

传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。     

斑点免疫金渗滤法检测鸭肝炎病毒的研究

用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测ＤＨＶ的斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ），并确定了最佳试验条件。该法既可定性，亦可定量，对纯化ＤＨＶ的最小检测量为４．１２ｎｇ／点，其敏感性为抗原斑点试验（ＡＳＴ）的２倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＤＩＧＦＡ检测ＤＨＶ具有较高的特异性。对ＤＨＶ鸡胚尿囊液ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。ＤＩＧＦＡ和ＡＳＴ法对３６份临床样本检测阳性率分别为８３．３％和７５％，其阳性符合率为８６．７％。随机抽样的６份ＤＩＧＦＡ阳性肝脏样本经人工发病试验后电镜检查，均发现大量直径３０～４０ｎｍ的病毒粒子。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检测ＤＨＶ方法。