月季内生真菌分离及抗黑斑病活性菌株的筛选

[目的]分离并筛选具有抗黑斑病活性的内生真菌。[方法]从陕西省西安、咸阳、宝鸡、渭南4个地点采集各种类型的健康月季品种,从茎和叶组织中分离内生真菌并通过转接2～3次进行纯化,采用改良的打孔法筛选对黑斑病病原菌有拮抗作用的内生真菌。[结果]共分离获得月季内生真菌67株,其中咸阳采集的样品内生菌的定殖率和分离率最高;月季的茎段内生真菌的定殖率和分离率明显高于叶片。从67株内生真菌中筛选出3株具有抗黑斑病活性的内生菌菌株,并且全部来自宝鸡。[结论]为进一步筛选生防真菌的候选菌株及环境友好型真菌生物防治奠定了基础。     

苹果树主要病害内生拮抗真菌的筛选及拮抗特性

为了筛选出苹果树腐烂病菌及苹果树炭疽病菌的内生拮抗真菌,并研究出相关的抑菌效果。采用分离发病地区健康苹果树的根、茎及其根系土壤中的拮抗内生真菌,在室内抑菌实验测定其对苹果树腐烂病菌和苹果树炭疽病菌的抑制作用的方法。实验证明发酵液对苹果树2种病菌的抑菌率比较高,无菌滤液的热稳定性比较好,但是无菌滤液在100℃左右会失去生物活性。拮抗真菌对于苹果树腐烂病菌及苹果树炭疽病菌有着较强的拮抗作用,其能够有效地预防相关疾病。     

4种茄科作物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

番茄、茄子、烟草和辣椒健康植株内生细菌的分离及拮抗菌的筛选结果表明,植物的不同种、品种及植物的不同部位,内生细菌数量有所不同.不同作物每克鲜重平均内生细菌数量为1180-11160 cfu;各作物植株不同部位均以果中内生细菌的数量最少,根和茎中的内生菌数量较多.拮抗测定表明,各植物体内均存在对番茄青枯病菌和黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌,对番茄青枯病菌具有拮抗作用的植物内生细菌占总数的16.21%,而对黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌占总数的28.53%.从拮抗菌株中筛选出3株对多种植物病原真菌有较好拮抗作用的菌株,对黄瓜枯萎病有20.83%-79.17%的防病效果,此3菌株对水稻白叶枯病菌和番茄青枯病菌也有一定拮抗作用,内生性测定表明,3菌株均能进入宿主植物番茄和茄子体内,经初步鉴定3菌株均为芽孢杆菌(Bacillussp.).     

1株林下参内生拮抗真菌的鉴定及发酵条件优化

从健康林下参叶片中分离筛选人参黑斑病内生拮抗真菌,为人参黑斑病生物防治提供优良菌种。釆用组织分离培养法筛选人参黑斑病菌内生拮抗真菌,根据形态特征及基于18S rDNA序列的系统发育分析,对拮抗菌株进行了鉴定,通过单因素及正交试验优化该菌株最适培养基及产生抑菌活性物质的发酵条件。结果表明,从健康林下参叶片分离的内生真菌中,获得1株对人参黑斑病菌具有良好拮抗作用的内生菌株FS-01,经鉴定该内生真菌菌株为球毛壳菌(Chaetomium globosum)。该菌株最佳培养基配方与发酵条件:淀粉1.50%、酵母浸粉1.00%、磷酸氢二钾0.05%、硫酸镁0.10%,pH值为7.0,培养温度为30℃,接种量为6.0%,培养时间为5 d。筛选获得的林下参内生真菌Chaetomium globosumFS-01对人参黑斑病菌具有显著的拮抗作用,可开发为人参黑斑病的生防菌株。     

小白菜内生菌的分离及菌核菌拮抗菌的筛选

利用选择培养基对茂名市郊区种植的成熟小白菜植株进行内生茵分离,共得到3株内生细菌、5株内生真菌、2株内生放线茵.细菌分属芽孢杆菌属、埃希氏菌属、黄色杆菌属,真菌主要为曲霉属、毛霉属,放线菌分属链霉菌属和诺卡茵属.利用平板对峙培养法筛选出2株内生放线茵及1株内生细菌对植物茵核病菌有强拮抗作用.     

苦瓜内生真菌对大肠杆菌拮抗菌株的筛选

以大肠杆菌(Escherichia coli)为测试菌,对77株分离自健康苦瓜(Momordica charantia L.)根、茎、叶、花、果的内生真菌菌株进行抗菌活性筛选。结果表明,77株内生真菌中,有31株具较强的拮抗作用,其中苦瓜内生镰刀菌菌株中62.96%具较强的拮抗作用;另外还有4个不产孢菌株也具有较强的拮抗作用。     

茄类内生菌的分离及拮抗细菌的筛选

[目的]分离番茄、辣椒和茄子3种茄科果蔬的内生菌,并对青枯病拮抗细菌进行筛选与鉴定。[方法]采用研磨液培养法,利用选择培养基对3种植株进行内生菌分离,并采用平板划线法纯化,及菌块对峙培养法对已纯化的内生菌进行筛选。根据分离菌的培养特性及菌体形态特征、革兰氏染色及生化反应等,对筛选出来的内生拮抗细菌进行鉴定归属。[结果]3种植株内生菌分离,共得到53株内生细菌、53株内生真菌、44株内生放线菌。筛选出14株青枯病菌有强拮抗性的内生细菌,分属为芽孢杆菌属、埃希氏菌属、克雷伯氏菌属、土壤单胞菌属、欧文氏菌属、短小杆菌属,其中芽孢杆菌为优势种群,而且芽孢杆菌属菌株对青枯病菌的拮抗作用最强。[结论]提供了探索生物防治茄科植物青枯病的有效途径。     

大豆内生菌的分离及菌核病拮抗菌的筛选

为筛选大豆菌核病菌的有效拮抗菌株,利用组织表面消毒法从大豆不同生育期的根、茎、叶和种子中分离内生菌。结果表明:共分离得到113株细菌和49株真菌。利用平板对峙培养法筛选出42株(细菌25株、真菌17株)对大豆菌核病菌有拮抗效果的内生菌株,其中18株对大豆菌核病菌菌丝生长有良好的抑制作用。     

一株蓝麻黄拮抗内生真菌的分离鉴定及代谢物的初步分析

[目的]分离获得对农作物致病菌有高效拮抗作用的植物内生菌,并对其进行系统鉴定和代谢成分分析.[方法]用研磨法从蓝麻黄中分离内生真菌,并用琼脂扩散法筛选具有抗农作物致病菌活性的内生真菌;利用菌株形态特征和ITS-5.8S rDNA序列分析进行拮抗菌鉴定,经酚硫酸法测定多糖含量.[结果]从蓝麻黄中分离得到5株内生真菌,其中XJEG-GF-79对葡萄白腐病菌的抑菌圈直径为23 mm.经形态学观察和分子分类学分析鉴定,内生拮抗真菌XJEG-GF-79与Pleosporaceae sp. SN-2008同源性达到100;,该菌株代谢产物中含有生物碱和多糖,其经测定,发酵液中多糖含量为1.914 mg/mL.[结论]蓝麻黄内生真菌XJEG-GF-79对葡萄白腐病菌有明显的拮抗作用,最终鉴定为链格孢霉 Pleosporaceae sp..     

苦豆子内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

从塔里木盆地不同地点采集苦豆子,从不同组织中分离内生细菌,并用分离得到的内生细菌对病原真菌做皿内拮抗试验,筛选有生物拮抗活性的内生菌菌株。结果表明,不同来源的苦豆子内生细菌数量上有较大差异,苦豆子不同组织内生细菌的种类和数量也有差异。从苦豆子各种组织中分离得到129株内生细菌,其中5株对多种植物病原真菌具有拮抗作用,这些菌株在苦豆子植株内均可定殖,属于芽孢杆菌。     

普通硅肥与纳米硅肥对烤烟内生真菌种群结构的影响

To explore the effects of common silicon fertilizer and nano-silicon fertilizer on the population structure of endophytic fungi in flue-cured tobacco,Yunyan 99 was used as test material, common silicon and nano-silicon were sprayed at vigorous growth,budding and dome stages.The treatments were set as follows: CK (water), T5 (common silicon,0.17 kg/hm²), T8 (nano-silicon,0.32 kg/hm²).The effects of different silicon fertilizer on the diversity, composition, structure, chemical composition and aroma substance of endophytic fungi in flue-cured tobacco were studied. Compared with CK, T5 and T8 treatment could effectively improve the community diversity,composition, structure and the content of chemicals and aroma substances. Compared with CK, the diversity of endophytic fungi increased under T8 treatment and decreased under T5 treatment.Compared with CK, the relative abundance of Basidiomycota under T5 and T8 increased by 58.14% and 37.35%, respectively,at the same time, the relative abundance of Flobasidium increased by 113.17% and 417.07%, respectively.Among them, T8 treatment increased the species of endophytic fungi, among which,31 species were more than CK treatment. The correlation analysis was based on chemical composition, aroma substances of tobacco leaves and endophytic fungal community composition.The contents of nicotine,soluble protein,Maillard reaction products and aroma substances were significantly related to the community composition of endophytic fungi in tobacco leaves. The diversity of endophytic fungi in tobacco leaves could be increased by spraying nano-silica fertilizer on leaf surface,and the content of chemicals and aroma substances of tobacco could be changed.It is meaningful for human to produce high quality flue-cured tobacco.     

四种植物内生真菌对三种烟草病原真菌的拮抗作用

采用研磨法,从烟田杂草中分离得到4种对烟草病原真菌拮抗作用较强的内生真菌。对峙试验发现,内生真菌覆盖或包围病菌,病菌菌落与对照比较均减小。镜检结果表明：赤星病菌不产孢,根黑腐病菌产孢,孢子大小比正常的孢子小4．872μm×31．84μm;镰刀菌只产生厚垣孢子,病原菌菌丝生长畸形,严重影响了病原真菌的生长。这一研究成果为寻求烟草病害的生物防治扩大了拮抗菌的筛选范围。     

几株内生真菌对三峡地区柑橘的生物保鲜作用

从三峡地区自然腐烂的柑橘果实上分离出1株优势致腐菌,经r DNA-ITS序列分析和形态学观察,鉴定该菌为Penicillium citrinum。用来自三峡地区特有灌木疏花水柏枝(Myricaria laxiflora)的12株具较高抗氧化活性内生真菌,分析其对柑橘致腐菌的拮抗作用。结果表明,其中4株具有较好的拮抗效果,菌株SG-4的发酵液水相粗提物的抑菌活性最好,在柑橘中亦可抑制致腐菌生长,自然贮藏过程中有效阻止柑橘果实腐烂,说明可在三峡地区柑橘的生物保鲜中进行推广和利用。     

银杏内生真菌拮抗灰霉菌的初步研究

从银杏枝条和叶片中分离到77个真菌菌株,以作物重要病原菌灰葡萄孢(Botrytis cinereaPers.)为指示菌,筛选拮抗菌株。平板对峙测定结果表明:46个菌株对灰霉菌有拮抗作用,占总菌株数的59.7%,其中有7个菌株拮抗性较强,占总菌株数的9.1%。不同内生菌株发酵液离体测定中,2-18和2-9菌株防治离体月季叶片和花瓣灰霉病的效果较稳定,抑制率保持在80.8%~100%。初步鉴定结果表明,2-18和2-9菌株为毛壳菌属真菌(Chaetom iumsp.)。     

油菜内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

[目的]探讨油菜内生真菌的抑菌活性。[方法]从油菜的不同组织内分离内生真菌,研究它们对植物病原真菌的抑制作用,并对活性菌株进行了初步鉴定。[结果]从油菜的根、茎、叶中共分离出12株内生真菌,其中2株(WG5和WJ2)对病原真菌均有不同程度的抑制作用,尤其对油菜菌核病菌和小麦黄斑叶枯病菌的抑制率最高,而且其发酵滤液经高温处理后活性不丧失,对病原真菌仍有较强的抑制作用,具有一定的生防潜能。[结论]油菜内生真菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型活性物质的筛选提供新的途径。     

烟草内生真菌Penicillium janthinellum的代谢表型分析

为了研究烟草内生真菌P. janthinellum的代谢表型特征,本文利用 BIOLOG 细胞表型芯片技术,对烟草内生真菌的 950 种代谢表型进行了测定。结果表明,烟草内生真菌能够代谢101种碳源、304种氮源、8种磷源、1种硫源；能在高达10%氯化钠、6%氯化钾、5% 硫酸钠、20%乙二醇、6%甲酸钠、7%尿素、12% 乳酸钠、200 mmol/L磷酸钠、100 mmol/L硝酸钠、100 mmol/L 硫酸铵中均能较好的生长；其适应 pH 值范围为 5-10； pH为5.2时,20-200 mmol/L的苯甲酸钠中无法生存。     

水稻内生颉颃细菌的筛选及生防机理研究

从20个水稻品种中分离得423个内生细菌。采用对峙培养法筛选出对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solaniKühn)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)和水稻恶苗病菌(Fusarium moniliform eSheld)有显著抑菌作用的内生颉颃细菌75株。测定了各颉颃细菌胞外酶(蛋白酶、几丁质酶和纤维素酶)活性和次生代谢物(噬铁素)活性,初步揭示了其抑菌机理。     

瓜类植物内生真菌对3种土传病菌的拮抗作用研究

[目的]了解瓜类植物内生真菌对瓜类植物常见土传病原真菌的拮抗作用.[方法]对分自不同瓜类植物及不同部位的461株内生真菌分别与黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）、立枯病菌（Rhizoctonia solani）和菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）3种土传病菌进行对峙培养试验,观察菌落形态和生长情况,记载抑菌带的有无和宽度,计算供试病原真菌菌落生长抑制率,分析内生真菌对3种土传病菌的拮抗作用.[结果]内生真菌对供试病原真菌的拮抗作用表现为3种类型：抗生作用、基质竞争作用和寄生作用.在461株内生真菌中,共有13株对黄瓜枯萎病菌产生拮抗作用,25株对立枯病菌产生拮抗作用,64株对菌核病菌产生拮抗作用,分别占供试内生真菌菌株的2.8％、5.4％和13.9％.其中,菌株F30对黄瓜枯萎病菌的抑菌带最宽,达19.0 mm.菌株JCL24对立枯病菌的抑菌带最宽,达11.3 mm.菌株F94对菌核病菌的抑菌带最宽,达14.3 mm.对黄瓜枯萎病菌菌落生长抑制率大于70％的共3株,分别属于Nigrospora、Penicillium和Rhizoctonia属.对立枯病菌菌落生长抑制率大于70％的共11株,分别属于Alternaria、Apiospora、Bipolaris、Colletotrichum、Exserohilum和Fusarium 6个属.对菌核病菌菌落生长抑制率大于70％的共17株,均为Fusarium属.[结论]部分瓜类植物内生真菌对土传病菌具有拮抗作用,主要通过抗生作用,少部分通过基质竞争和寄生作用抑制病菌生长.一些菌株对供试病菌抑制作用很强,可能具有用于瓜类植物病害生物防治的潜力.     

肇庆鱼藤内生真菌的分离及生物活性研究

从肇庆鱼藤Derris hancei分离获得内生真菌10属16株,体外拮抗作用测定表明,鱼藤茎内生菌株Penicillium sp.Q1、Rhizoctonia sp.S1、Phomopsis sp.N2、Corticium sp.F1和叶内生菌株Penicillium sp.Q2对芒果炭疽病菌Colle-totrichum gloeosporioides、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.niveum Rhizoctonia sp.S1对黄瓜炭疽病菌Colletotri-chum orbiculare以及Phomopsis sp.N2对香蕉炭疽病菌Colletotrichum musae的对峙培养拮抗系数均达到Ⅱ级,且证实鱼藤内生真菌可产生抑菌活性物质.浸叶法测定表明,叶内生菌Penicillium sp.Q2菌株发酵液活性最强,处理后48 h,斜纹夜蛾Spodoptera litura 2龄幼虫和萝卜蚜Lipaphis erysimi无翅成蚜校正死亡率分别为100.00%和75.10%,活性高于其他分离筛选所获菌株.     

油菜内生球毛壳菌抑菌作用初步测定

平板对峙试验显示,从油菜(Brassicanapus)叶、根和种子上分离到的14株内生球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)对油菜菌核病原菌和立枯丝核菌均有不同程度的抑制作用,其中以种子上分离到的Dyst-1和MYNS-1的抑制作用最好。Dyst-1和MYNS-1的发酵液通过高压湿热灭菌和细菌过滤器过滤灭菌后,分别对所选用的几株植物病原真菌表现出抑制作用,特别是对油菜种传病害菌核病病菌。油菜内生球毛壳菌的详细抑菌机制需进一步研究。