土壤芽孢杆菌NDD-1及其拮抗菌短小芽孢杆菌NDY-10的分离、鉴定和抑菌特性

从内蒙古大唐国际托总托发电有限责任公司储煤区土壤样品中筛选到1株拮抗菌株NDY-10及被其抑制的菌株NDD-1。通过菌落形态和显微镜观察,结合16S rRNA、gyrB基因比对分析对菌株进行鉴定;采用牛津杯法对菌株NDY-10进行抑菌谱试验;通过紫外线照射、不同温度、不同pH值等处理对菌株NDY-10发酵上清液对菌株NDD-1的抑菌活性及稳定性进行研究。结果表明,经鉴定,菌株NDY-10、NDD-1分别为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、土壤芽孢杆菌(Solibacillus sp.)。短小芽孢杆菌NDY-10对土壤芽孢杆菌NDD-1、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用依次减弱,而对枯草芽孢杆菌、酵母菌、青霉菌没有抑制作用;短小芽孢杆菌NDY-10发酵上清液抑菌活性受热处理影响较大,受紫外线照射处理影响较小,在pH值为5~9范围内保持较高的稳定性。首次报道了短小芽孢杆菌对土壤芽孢杆菌的抑菌作用。     

具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌的分离与鉴定

采用梯度稀释分离法,从黄河稻区水稻根际土壤中分离出耐高温芽孢菌722株。通过真菌生长抑制试验,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的菌株27株。通过形态学观察和生理生化指标鉴定,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌疑似菌株7株。挑取其中抑菌活性最强的1株进行16SrDNA鉴定,将其16SrDNA基因序列与GenBank中基因序列进行同源性比较,发现与枯草芽孢杆菌16SrDNA有99%同源性,判定此菌为枯草芽孢杆菌,命名为BS501a。     

高海拔来源芽胞杆菌根腐生防菌的筛选与鉴定

本研究从82株高海拔来源菌株中筛选对根腐病具有较强抑制作用的拮抗生防菌。利用平板对峙法初步筛选根腐生防菌,利用牛津杯法测定抑菌活性,筛选获得FJAT-19708和FJAT-20265共2株拮抗根腐的菌株,经16SrRNA基因序列分析均鉴定为Bacillus subtilis枯草芽胞杆菌,有望用于控制植物根腐病。     

一株抗菌活性物质产生细菌的分离及鉴定

从根际土壤分离到一株细菌CY04,通过电镜观察和16S r DNA序列分析,发现该菌株同已知菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的相似度最高,为99%,初步认定为枯草芽孢杆菌。抑菌试验结果表明,该菌株对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有一定的抑菌活性,对大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌没有抑菌活性。培养48 h左右是其产生抗菌活性物质的最佳时期。     

香猪肺源性枯草芽孢杆菌的分离鉴定及体外抑菌作用

为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌3种致病菌的抑制作用。结果表明:菌株Bp-1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)位于同一分枝,相似性达100%;与已知枯草芽孢杆菌菌株168的16SrRNA可变区二级结构相比无明显差异,因此将Bp-1鉴定为枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌Bp-1的液体培养物对3种致病菌均有抑制作用;对大肠杆菌的拮抗作用较强,对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较弱。枯草芽孢杆菌Bp-1可作为猪呼吸系统的益生菌对其深入研究。     

烟草青枯病拮抗菌TBWR1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定,以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株,测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等,并对菌株进行分类鉴定,通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株,在烟草青枯病防治中具有潜在价值。     

筛选和利用枯草芽孢杆菌防治梨轮纹病

从南京、高邮和仪征3地梨园采集土壤、病果、病叶和健叶样品共60份,分离筛选到527株细菌分离物,从中挑取与枯草芽孢杆菌目标菌落相似的菌株进行平板抑菌试验.结果表明:24株拮抗细菌对梨轮纹病菌菌丝生长有明显的抑制作用,抑菌带宽在10 mm以上;108株拮抗细菌对梨轮纹病菌的抑菌带宽在6～10 mm.选取抑制效果中等和较强的132株细菌进行室内梨果的活体生防试验,结果表明:在24株平板抑制效果较强的菌株中有18株防效在40%以上,6株防效为20%～40%;108株抑制效果中等的菌株中有3株防效在40%以上,100株防效为20%～40%,5株防效在20%以下.通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定出室内活体防效在40%以上的21株细菌为枯草芽孢杆菌.     

5株芽孢杆菌的分离鉴定、拮抗性试验与抑菌效价测定

通过对采集样品中细菌的分离与纯化,获得5株芽孢杆菌,经纯化培养后观察其个体和群体形态特征,并进行了16项生理生化特征鉴定。结果表明,L1为地衣芽孢杆菌、L2为蜡样芽孢杆菌、L3为短小芽孢杆菌、L4为蜡样芽孢杆菌、L5为蜡样芽孢杆菌;通过对5株指示菌的拮抗试验,确定了它们的抑菌图谱;从中挑选出拮抗性最强的两株菌,采用平板琼脂扩散法,测定了其发酵液的抑菌效价。在30℃,pH7.0,150r/min的条件下,恒温振荡培养24h,测其发酵液的抑菌效价:L1、L2菌株的发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌效价分别2000IU/ml、1000IU/ml;对枯草芽孢杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、1000IU/ml;对大肠杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、500IU/ml。     

白芨病菌拮抗菌株的筛选及鉴定

从白芨根际土壤中筛选出对白芨根腐病有拮抗性的菌株,初步研究其抑菌作用,为白芨病害的生物防治提供参考依据。采用平板稀释法从白芨根际土壤中分离获得菌株,以白芨根腐病菌、白芨灰霉菌、白芨黑斑菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌株;分别采用16S rDNA和28S rDNA序列分析方法鉴定拮抗细菌和真菌菌株的分类学地位。结果:共计从白芨栽培土壤中分离到35株细菌和10株真菌菌株,其中8株细菌和6株真菌对4种白芨致病菌表现较好的抑菌活性;经鉴定,细菌菌株大多数为芽孢杆菌,真菌为木霉属,BJ-135为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),BJ-175为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),BJ-2为木霉(Trichoderma asperellum)。筛选出的菌株中有5株拮抗菌对4种白芨致病菌均有较好的抑菌活性,菌株BJ-135、BJ-175、BJ-2可用于生防菌剂开发,用于白芨病害防治。     

枯草芽孢杆菌所产细菌素的理化性质及抑菌谱的研究

试验研究了枯草芽孢杆菌Nxc6所产细菌素的理化性质及其抑菌谱。发现枯草芽孢杆菌Nxc6所产细菌素在硫酸铵质量分数为30%的条件下能得到较好的分离。以革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌为指示菌,采用牛津杯法检测细菌素的抑菌活性。结果表明,该细菌素最适pH为8.0,且有较广的pH作用范围和较好的热稳定性,但对蛋白酶的抗性较弱。抑菌谱试验结果表明,该细菌素对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有抑制作用,并且对部分真菌也有抑制作用。     

砖红镰刀菌拮抗细菌的筛选与鉴定

采用稀释涂布平板法,从尚未发病的玉米田和小麦田土壤里分离得到104株细菌,通过平板拮抗试验获得了5株对砖红镰刀菌具有明显拮抗作用的细菌。通过16S rDNA序列测定、传统形态学和生理生化特性研究,确定这5株细菌均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。研究发现,5株细菌的发酵液对砖红镰刀菌均具有拮抗作用,其中,命名为BS-02的菌株拮抗活性最高,达到61.29%。     

玉米小斑病拮抗菌的分离筛选及生理生化初步鉴定

分离20株芽孢杆菌对玉米小斑病菌进行抑菌试验,筛选出1株具有较好防效的菌株J6,抑菌率达80.23℅,将J6号菌株进行抑菌广谱测定、温室防效试验和生理生化鉴定。结果表明,J6号菌对其他玉米常见病害也有一定的抑制作用,最适浓度为25倍菌液,并初步鉴定出J6号菌为枯草芽孢杆菌。     

水稻稻瘟病拮抗细菌的筛选与鉴定

为筛选并鉴定水稻稻瘟病拮抗细菌,采用平板测定法筛选拮抗细菌,通过形态学观察、生理生化特征及16SrDNA序列分析鉴定菌株.结果表明:从水稻叶片、稻田土壤中共分离得到168株细菌,其中26株对稻瘟病菌有拮抗作用,8株具有强拮抗作用的菌株有,8个代表性的菌株对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌均表现了强的拮抗作用.选择拮抗性能最强的一个菌株T61,鉴定结果为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).本试验所筛选的枯草芽孢杆菌对3种主要的水稻真菌病害有显著的抑制效果.     

枯草芽孢杆菌Bs-W5的生防作用研究

从植物根际土壤中分离到一株具有广泛抑菌谱的菌种,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为Bs-W5。平板菌落对峙法和牛津杯法的抑菌试验表明,Bs-W5对苹果腐烂病菌(Valsa ambiens)、杨树溃疡病菌(Dothiorella gregaria)、腐皮镰刀菌(Fusarim solani)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)等九种植物病原菌和常见的大肠杆菌(Escherichia Coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均有不同程度的抑制作用。通过不同条件处理Bs-W5发酵液上清液,发现上清液中的拮抗物质不耐贮存、热稳定性较差、不耐酸碱,但是光照对其稳定性没有影响,Bs-W5连续10代的接种试验,表明其有着很好的遗传稳定性。     

一株具有抑菌活性的凝结芽孢杆菌的筛选、鉴定及其抗逆性研究

研究采用MRS培养基平板钙溶圈法结合琼脂扩散牛津杯法进行抑菌性能评估,获得一株具有产酸和抑菌活性的芽孢杆菌菌株CA04121。该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均具有明显抑制作用,在模拟胃液中处理180 min存活率达到72.7%,在0.6%的胆盐溶液中处理6 h存活率达到54.5%。通过形态特征、生理生化特征以及gyrB基因进化分析结果,鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),该菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为CGMCC NO.16244。     

一株薄荷抑菌内生菌鉴定与抑菌活性分析

从薄荷里筛选出一株具有抑菌活性的内生细菌(命名为BH2),通过对菌株进行形态学观察和16S r DNA序列分析,表明该菌株属于解淀粉芽孢杆菌。抑菌试验结果表明,该菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、未知霉菌均有抑菌活性。     

具有拮抗作用的石榴内生菌的分离与鉴定

[目的]筛选对石榴枯萎病菌具有拮抗作用的内生生防菌.[方法]从采自云南蒙自的石榴叶片中分离并获得5株内生拮抗菌,通过测定其对甘薯长喙壳(Ceratocystis fimbriata)的抑菌能力筛选出1株具有高效拮抗作用的生防菌株Y2,对其进行抑菌谱测定及鉴定.[结果]经生理生化和16S rDNA序列测定表明Y2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).[结论]试验结果为石榴枯萎病的防治提供了理论依据.     

枯草芽孢杆菌对黄瓜灰霉病的防效评价

为了探究枯草芽孢杆菌对黄瓜灰霉病的抑制作用,采用室内抑菌试验和大田试验研究了枯草芽孢杆菌对黄瓜灰霉病菌的抑制作用及对黄瓜灰霉病的防治效果。对峙培养法测定表明,枯草芽孢杆菌YN-5对黄瓜灰霉病菌有明显的拮抗作用,对黄瓜灰霉病菌菌丝及孢子都有较强的抑制效果;盆栽试验表明,拮抗菌YN-5的抑病效果在50%以上。该菌株可作为黄瓜灰霉病生物防治的优良候选微生物资源,开发及应用前景广阔。     

南极土壤芽孢杆菌的分离鉴定及其防治玉米细菌性褐腐病的研究

[目的]本研究旨在从南极土壤中筛选防治玉米细菌性褐腐病的芽孢杆菌菌株,为该病害的防治提供菌株资源。[方法]从南极长城站地震台附近的企鹅聚居地土壤中分离芽孢杆菌。结合16S rDNA及gyr B基因序列对分离到的芽孢杆菌进行鉴定。借助平板抑菌试验筛选对玉米细菌性褐腐病病原菌具有拮抗效果的生防芽孢杆菌。通过田间防治试验,筛选具有较好生防效果的芽孢杆菌。利用MALDI-TOF-MS对芽孢杆菌产生的抗菌物质脂肽化合物进行鉴定。[结果]通过16S rDNA及gyr B基因序列对分离自南极的23株芽孢杆菌进行鉴定,其中解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)9株,地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)14株。借助平板抑菌试验,筛选获得抑菌效果明显的2株B.amyloliquefaciens菌株EZ15-07、EZ15-09和2株B.licheniformis菌株EZ01-05、EZ15-08。田间试验结果表明,菌株EZ15-07和EZ01-05对玉米细菌性褐腐病的防治效果分别为59.3%和55.3%。对这2个菌株发酵液的MALDI-TOF-MS检测表明,菌株EZ15-07能产生Surfactin和Bacillomycin D 2种脂肽化合物,菌株EZ01-05能产生Bacillomycin D和Fengycin 2种脂肽化合物。[结论]由南极土壤分离获得的菌株EZ15-07和EZ01-05对玉米细菌性褐腐病防治效果显著,2个菌株均具有较好的田间应用潜力。     

水稻纹枯病拮抗细菌的筛选·鉴定及其活性成分的发酵制备

[目的]探究水稻纹枯病拮抗细菌的抑菌活性成分的发酵制备条件。[方法]通过点接种于平板与水稻纹枯病对峙生长对水稻纹枯病拮抗细菌进行了初筛,通过摇瓶发酵进行了复筛,并通过形态鉴定及16S RNA测序构建系统发育树对所得菌株进行鉴定;通过单因素试验研究了所得菌株的抑菌活性成分的发酵制备条件。[结果]初筛获得17株水稻纹枯病的拮抗细菌,复筛获得菌株Lys-67,该菌株的发酵液对水稻纹枯病生长具有明显的抑制作用,菌株Lys-67鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。经单因素试验,菌株Lys-67利用麸皮5.0%,于35℃、摇床转速200 r/min条件下发酵3 d,经牛津杯打孔法检测,150μl发酵液中活性成分抑制水稻纹枯病的抑菌圈达36 mm。[结论]为菌株Lys-67的进一步研究及生防应用奠定了基础。