禽用生物制品外源病毒监测研究—鸡传染性法氏囊炎疫苗外源病毒检测

原倍鸡传染性法氏囊炎（ＩＢＤ）高免血清可以中和１０个羽份ＩＢＤ病毒；中和后的病毒接种鸡胚卵黄囊后继续孵化至出雏，雏鸡健活；用ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒和鸡鹌鹑痘病毒模拟污染ＩＢＤＶＢ８７毒再经ＩＢＤ高免血清中和，可以检出模拟污染的病毒；高免血清可以中和１０个羽份的ＩＢＤ疫苗毒。     

禽用生物制品外源病原监测研究：鸡新城疫LaSota活苗中污染IBV的检测研究

使用ＳＰＦ鸡制备的抗ＮＤＶ（新城疫病毒）高免血清可中和ＮＤＶ种毒或鸡新城疫疫苗ＬａＳｏｔａ株１０~７ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ（即１０个使用剂量），并具有高度持异性。对于ＮＤＶ疫苗实验室模拟污染ＩＢＶ传染性支气管炎病毒）研究表明，用ＮＤＶ高免血清中和ＮＤＶ疫苗１０个使用剂量后，可检测到ＩＢＶ１０~（－６）污染水平。对于某生药厂ＮＤＶＬａＳｏｔａ疫苗中疑似ＩＢＶ污染的样品进行检测，排除了ＩＢＶ污染。文章同时证明了免疫胚接种ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒后胎儿表现出类似感染了ＩＢＶ的病变。     

火鸡疱疹病毒（HVT）抗血清的制备及检测

制备２批抗火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）血清，无菌检验合格，与鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊炎病毒（ＩＢＤＶ）和Ｒｅｏ无交叉中和反应。蚀斑减少试验结果表明当病毒含量为１０个、５个羽份／０．１ｍｌ时，中和后尚有一些蚀斑存在。病毒含量为３．３羽份／０．１ｍｌ或更低时，中和后未见典型蚀斑存在     

多价荧光抗体监测外源病毒污染的研究

用猪瘟病毒（ＨＣＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ），牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ），伪狂犬病病毒（ＰｒＶ），兰舌病病毒（ＢｔＶ），羊口疮病毒（ＯＶ）等六种病毒，多次同时或先后强化免疫猪，制取六价高免血清；用狂犬病病毒（ＲＶ）免疫兔，制取ＲＶ单价高免血清，分别用异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记制成荧光抗体（ＦＡ），并按二者最佳染色价配制成七价（多价）ＦＡ。由于各病毒在其宿主细胞中复制部位和与宿主细     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应

鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。     

鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的应用

通过中和试验证明，Ｂ３４腹水单克隆抗体中和ＩＢＤＶ ＣＡ株和中和效价高达１：４２００００。经１０倍稀释后，能等量中和含毒量为１０＾６．６２５ＴＣＩＤ５０／ｍｌ的ＩＢＤＶ ＣＡ株细胞毒。利用Ｂ３４腹水单克隆抗体建立了ＭＡｂ－ＡＣ－ＥＬＩＳＡ，可用于测定ＩＢＤＶ ＣＡ株细胞的病毒含量，与ＴＣＩＤ５０之间的相关系数为０．９４。     

鸽NDV的分离和初步鉴定

江苏淮安某鸽业发展有限公司饲养的近千对鸽,自１９９８年４月２３日出现发病和死亡。临床主要表现拉稀。病理剖检变化主要是腺胃乳头中度出血,直肠粘膜条状出血。１０ｄ死亡１０余只。从病死鸽脑、肝均分离到具有血凝性的病毒,用抗ＮＤＶ高免血清与分离毒做ＨＩ试验,结果分离毒的血凝性可被抗ＮＤＶ高免血清抑制。应用ＮＤＶＨＡ抗原检测发病鸽血清,结果抗ＮＤＶ抗体在１∶２６左右,抗ＡＩＶ（禽流感病毒）抗体阴性,初步鉴定为鸽ＮＤＶ。     

用ELISA检测牛血清中的牛病毒性腹泻病毒抗体

一般均用血清中和（ＳＮ）试验和间接免疫荧光（１１Ｆ）试验检测牛血清中的抗牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）抗体，本文用ＳＮ和１１Ｆ敏感性相当的ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤＶ抗体，共测定４７２份牛血清，有７９．２％为阳性。ＥＳＩＳＡ与ＳＮ呈正相关，表明ＥＬＩＳＡ可用于ＢＶＤＶ的常规诊断。     

表达IBDV VP2免疫原的HVT重组体接种雏鸡对IBDV攻击的…

构建了表达了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２的两种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）重组体ｖＨＶＴ００１和ｖＨＶＴ００２。用其接种１日龄雏鸡以评价它们对ＩＢＤＶ５２／７０株和马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＲＢ１Ｂ株攻击的保护效果。在ＩＢＤＶ攻击中，ｖＨＶＴ００２免疫鸡能预防死亡和法氏囊肉眼病变，具有良好的保护力，以１０＾５ＰＦＵ免疫能达１００％、１０＾４ＰＦＵ免疫能达６０％保护，而用ｖＨＶＴ００１免疫只获得较低     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５—１０－７，琼扩沉淀效价达１∶２０—１∶５１２，鹅胚中和效价达１∶３０—１∶１２２，鹅体中和效价为１∶５４—１∶９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

猪传染性胃肠炎病毒的血凝位点的定位研究

通过转瓶培养ＩＢＲＳ２细胞，选择最佳接毒剂量、接毒时间和收毒时间生产出凝集价（ＨＡ）达２１２的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）血凝抗原。用抗ＴＧＥＶＳ蛋白和 Ｍ蛋白的单克隆抗体与不同稀释度的ＴＧＥＶ血凝抗原等量混合，在 ３７℃作用 ３０分钟后接种ＩＢＲＳ２细胞和做中和试验（ＮＴ）和血凝抑制（ＨＩ）试验。结果表明ＴＧＥＶ血凝位点与中和位点一致，血凝素位于Ｓ蛋白Ａ位点或其附近。     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

鸡传染性支气管炎毒种保存期试验（二）

对不同时期制备的３批鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ５２毒种用ＳＰＦ鸡胚进行保存期测定,并用保存１５年的ＩＢＶＨ５２Ｅ２代毒种经复壮后繁殖冻干ＩＢＶＨ５２Ｅ４代毒种并进行全面鉴定,结果表明冻干的ＩＢＶＨ５２毒种在－７０℃条件下保存４年、７年、１５年毒种效价下降不明显,用保存１５年的ＩＢＶＨ５２毒种复壮后繁殖冻干的毒种其免疫原性、安全性等指标均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》［１］规定标准。     

鸡新城疫,传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（I报）：NDV,…

本研究根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二种病毒能在鸡胚中繁殖的特点，通过筛选上述二种病毒的最适稀释比例，将混合毒种接种９～１０日龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养）使接种鸡胚尿囊液９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，每０．１ｍｌ尿素液含ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０，ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。本试验用兔抗ＮＤＶ，ＩＢＶ血清抗体封闭相应病毒测定混合毒获得成功，本研究目的在于为制备鸡二联油乳灭活功时改进繁毒方法，降低疫苗成本。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝谱

用鸡传染性支气管炎病毒标准毒株Ｈ５２、Ｍ４１、Ｔ、Ｎ１１５、ＩＢＶ６２株及国内华中（ＨＺ）、华东（ＨＤ）、华南（ＨＮ）、华北（ＨＢ）、东北（ＤＢ）及西北（ＸＢ）等地方性分离株试验,研究ＩＢＶ血凝特性。结果表明,ＩＢＶ不直接凝集鸡、牛、兔、小白鼠、仓鼠、猪、鹅、马、绵羊及人的“Ｏ”型红细胞;１％胰蛋白酶３７℃作用ＩＢＶ４ｈ后,可凝集鸡、兔、小白鼠、仓鼠、鹅等动物红细胞;１０％乙醚３７℃作用ＩＢＶ２ｈ后,可凝集鸡、牛、小白鼠、仓鼠、鹅、绵羊及人的“Ｏ”型红细胞;１％卵磷脂酶Ｃ３７℃作用ＩＢＶ４ｈ后,可凝集鸡、兔、小白鼠、仓鼠、鹅等动物红细胞。     

肉用鸡垂体—肾上腺轴与免疫功能关系的研究

以艾维茵肉鸡为试验动物，研究了垂体－肾上腺轴在传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）强毒株攻击时对免疫系统的调节作用。结果表明，用ＩＢＤＶ强毒株攻击后，试验鸡垂体－肾上腺轴活动加强，血清促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）和皮质酮（Ｆ）上升，抗ＩＢＤＶ抗体、白细胞介素２（ＩＬ－２）和白细胞介素３（ＩＬ－３）上升，Ｔ淋巴细胞转化率下降。未经ＩＢＤ疫苗免疫的鸡由于免疫系统遭到ＩＢＤＶ破坏，在ＩＢＤＶ强毒株攻毒后，抗Ｉ     

某农场受体牛血清中牛传染性鼻气管炎抗体检测

用ＭＤＢＫ细胞，采用血清微量中和试验方法，对黑龙江省某进口牛精液的奶牛场的受体牛进行血清抗牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测。用一定量的已知牛传染性鼻气管炎病毒通过观察ＭＤＢＫ细胞病变情况，检查被检血清中ＩＢＲ中和抗体，结果发现，所检２７份血清中，其抗ＩＢＲ病毒抗体均为阳性，且抗体效价相当高。