用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株的构建

将含有牛传染性鼻气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ） Ｔ Ｋ 基因的片段克隆于ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓ Ｋ 中, 再用 Ｂｇ１ Ⅱ和 Ｓａｃ Ｉ切去 Ｔ Ｋ 基因中３４７ｂｐ 的片段, 获得了含缺失 Ｔ Ｋ 基因的重组质粒, 然后插入 Ｌａｃ Ｚ 报告基因, 构建成转移载体。以脂质体转染法将此转移载体与 Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ Ｂａｒｔｈａ 株在牛肾细胞（ Ｍ Ｄ Ｂ Ｋ） 上共转染, 经过蓝色蚀斑筛选和蚀斑克隆纯化, 获得了能稳定遗传的重组 Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ。经 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交鉴定, 证实该重组病毒为 Ｔ Ｋ 基因缺失突变株。     

牛传染性支气管炎病毒PCR诊断方法的研究

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ｇＢ基因序列，应用ｏｌｉｇｏ４．１程序设计一对引物ＰＢ１／ＰＢ２，分别对ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南－１和云南－２分离株进行ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲ病毒ＤＮＡ均有３９９ｂｐ的特异性片段。用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染必喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增。均未见特异性条带，证     

牛传染性鼻气管炎病毒抗体胶体金检测试纸条的制备

采用SF 9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白抗原,经纯化鉴定后将gD蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的gD抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛传染性鼻气管炎病毒双抗原夹心法胶体金检测试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒等阳性血清无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒抗体ELISA检测试剂盒同时检测112份牛血清,阳性符合率为93.5%,阴性符合率为96.0%,总符合率为94.6%。说明该试纸条可以应用于临床牛传染性鼻气管炎病毒抗体的诊断和检测。     

牛呼吸道合胞体病毒感染

牛呼吸道合胞体病毒感染欧阳忠明综述陆承平审校（南京农业大学动物医学系）牛呼吸道合胞体病毒（ＢＲＳＶ）感染可引致犊牛呼吸道疾病，给养牛业造成很大的经济损失，在欧共体国家被列为仅次于牛粘膜病（ＢＶＤ）及牛传染性鼻气管炎（ＩＢＲ）的三大重要牛病之一。近年对...     

禽用生物制品外源病原监测研究：传染性支气管炎疫苗外源病毒检测

６４倍稀释的抗ＩＢＶ（传染性支气管炎病毒）高免血清可中和１００个ＥＩＤ＿（５０）ＩＢＶ病毒；２倍稀释抗ＩＢＶ高免血清可中和１０个羽份ＩＢＶＨ５２病毒。用ＮＤＶ（鸡新城疫病毒）ＬａＳｏｔａ或Ⅰ系病毒模拟污染ＩＢＶＨ５２毒株后，再用抗ＩＢＶ高免血清中和，可以检出污染的病毒。抽检ＩＢＶＨ１２０疫苗的１０个羽份可被ＩＢＶ高免血清中和。     

不同细胞系上牛病毒性腹泻病毒受体的鉴定

抗独特型抗体（ａ－ｉｄｓ）已被成功用于鉴定不同细胞系上牛病毒性腹泻病毒受体，ａ－ｉｄｓ能特异结合培养细胞并鉴定出一种分子量为５０ｋＤａ的细胞膜蛋白，这可能就是ＢＶＤＶ的特异受体，在本实验中，流式细胞术中分析表明ａ－ｉｄｓ能特异地与ＭＤＢＫ，ＥＢＫ，ＢＴ，ＲＫ１５，ＭＡ１０４和Ｖｅｒｏ等不同的细胞结合。病毒吸附和复制试验表明，除猴肾细胞ＭＡ１０４和Ｖｅｒｏ外，ＢＶＤＶ都能吸会并复制，噬斑减少试验结果     

犊牛睾丸细胞用于犊牛血清BVD/MD抗体检测的可行性探讨

用犊牛睾丸细胞和牛肾细胞，ＢＴ细胞，通过中和试验分别做犊牛血清牛病毒性腹泻／粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）抗体的检测，检测了４１批犊牛血清样品，结果一致性较好，用犊牛睾丸细胞血清（ＢＶＤ／ＭＤ）抗体检测是可行的。     

牛病毒性腹泻病毒现地分离株与疫苗株的抗原差异

用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１     

我国部分地区牛传染性鼻气管炎血清学调查与分析

为了解我国牛传染性鼻气管炎的感染情况及流行趋势,对2014年-2016年采集于11个牧区半牧区省份的9 668份牛血清样品进行了牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测。结果显示,牛传染性鼻气管炎病毒抗体的个体平均阳性率为52.77%,群体阳性率连续3年均在80%以上,说明感染现象较为普遍。乳用牛的感染情况较肉用牛和乳肉兼用牛严重。同时,发现生产实际中牛传染性鼻气管炎与牛病毒性腹泻混合感染情况普遍。此次摸底调查掌握了我国牛传染性鼻气管炎感染情况,为制定科学防控政策提供了参考依据。     

禽用生物制品外源病毒监测研究—鸡传染性法氏囊炎疫苗外源病毒检测

原倍鸡传染性法氏囊炎（ＩＢＤ）高免血清可以中和１０个羽份ＩＢＤ病毒；中和后的病毒接种鸡胚卵黄囊后继续孵化至出雏，雏鸡健活；用ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒和鸡鹌鹑痘病毒模拟污染ＩＢＤＶＢ８７毒再经ＩＢＤ高免血清中和，可以检出模拟污染的病毒；高免血清可以中和１０个羽份的ＩＢＤ疫苗毒。     

用放射免疫沉淀试验比较不同IBDV毒株的中和表位

用单克隆抗体（ＭＡｂ）对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）不同毒株中和表位的相关性进行了分析。ＭＡｂ Ｂ６９能中和同源病毒Ｄ７８株，但不中和ＭＤ及ＩＢＤＶ Ｄｅｌ－Ａ变异株。而ＭＡｂ ３３Ｅ８和Ｒ６３能中和Ｄ７８株和ＭＤ及Ｄｅｌ－Ａ变异株。在体外将Ｄｃｌ－Ａ株ＶＰ２基因和一个１０＾３ｂｐ片段的ｃＤＮＡ克隆进行翻译，得到６种多肽，它们代表了一个全长产物（３５．５ｋｄ）和５份切割片段。用ＭＡｂ Ｂ６９、３     

免疫过氧化物酶法快速检测牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗原

用间接免疫过氧化物酶法（ＩＩＰ），对非细胞致病性牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）病毒持续感染的４２头牛血清经牛胎儿肌细胞培养检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，１００头外观健康牛的血清，经牛胎儿肌细胞培养未检出ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，该结果与用干扰法获得的结果一致。而且用ＩＩＰ在血沉标黄层涂片中也检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，用亲和系－生物素过氧化物酶复合物方法在福尔马林固定的组织切片中也检出了ＢＶＤ－Ｍ     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

牦牛病毒性腹泻—粘膜病病毒的分离及鉴定

一九八三年从四川某地区一牦牛分离到牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）病毒，定名为牦牛Ⅰ号毒株。该病毒可在牛肾或牛睾丸原代细胞上繁殖继代，但均不产生可见病变（ＣＰＥ），用荧光抗体染色检查，可见到ＢＶＤ／ＭＤ特异性荧光，其滴度在１Ｏ￣（－３）－１０￣（－５）之间。用细胞培养第１５代病毒做系列试验表明，该病毒为ＲＮＡ病毒，对乙醚敏感，不耐酸，对胰蛋白酶有一定抗力；回归黄牛，血清中和抗体呈ＢＶＤ／ＭＤ阳性。     

猪瘟细胞苗生产中犊牛血清BVDV中和抗体检测方法的探讨

ＢＶＤＶ牛病毒性腹泻病病毒与猪瘟病毒同属黄病毒科瘟病毒属，因而ＢＶＤＶ中和抗体具有中和猪瘟病毒的作用。所以在猪瘟细胞苗的生产中如果使用了含有ＢＶＤＶ中和抗体的犊牛血清，将会严重干扰疫苗的正常生产，造成产品的报废和经济损失。为此，凡用于生产猪瘟细胞苗的犊牛血清都要事先检测有无ＢＶＤＶ中和抗体的存在。其检测方法通常用细胞中和试验。细胞中和试验又分常量法和微量法两种。常量法是先制备良好的细胞单层，然后在细胞单层上接种各血清－抗体中和物及血清毒性试验、阴性血清、阳性血清、病毒抗原等对照。经３７℃…     

带母源抗体的青年鸡皮下接种传染性法氏囊病活疫苗的效果

在１日龄和３周龄鸡的脾粘着（ＣＳＡ）细胞中，检测到了被正常鸡血清（ＮＣＳ）中和过的传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）的感染性，有３周龄鸡的（ＣＳＡ）细胞中，检测到了被母源抗体（ＭＮ－Ａｂ）中和过的ＩＢＤＶ的感染性。此外，发现１日龄鸡制备的ＣＳＡ细胞含有补体受体（ＣＲ），１周龄鸡制备的ＣＳＡ细胞既含有ＣＲ又有Ｆｃ受体（ＦｃＲ）。然而，即使ＣＳＡ细胞上的ＦｃＲ被热凝集ＮＣＳ（５６℃，６０分钟）阻断的情况下，     

牛传染性鼻气管炎病原及其疫苗的研究进展

牛传染性鼻气管炎 (ＩＢＲ)又称“坏死性鼻炎”、“红鼻病” ,是Ⅰ型牛疱疹病毒 (ＢＨＶ - 1 )引起的一种牛呼吸道接触性传染病。临床表现形式多样 ,但以呼吸道为主 ,伴有结膜炎、流产、乳腺炎 ,有时诱发小牛脑炎等。急性ＩＢＲＶ呼吸道感染还可继发细菌性肺炎。此病目前在世界范围内流行 ,对乳牛的产奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有较大影响。自 50年代在美国首次发现至今 ,此病已蔓延至世界各地。 1 980年我国从新西兰进口奶牛中首次报道该病 ,并分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒。随后经血清学调查证实 ,我国广东、广西、河北、河…     

抗牛病毒性腹泻病毒中和抗体对犊牛的保护效果

未哺初乳的犊牛（ｎ－２４），给以初乳、初乳代用品或代乳品，使其血清中被动获得病毒中和抗体。然后，用非致细胞病变牛病毒性腹泻强毒（ＢＶＤＶ－８９０）鼻内攻毒，监测犊牛体温，白细胞减少，血小板减少和腹泻情况，此外，用犊牛的鼻分泌物、细胞棕黄层和血清进行病毒分离和滴定，病毒中和效价为２５６或以下的犊牛出现体温升高和病毒的全身感染，病毒中和效价低于１６的犊牛出现严重的临床症状即体温升高、白细胞和血小板数减