牛附红细胞体与支原体混合感染的诊治

为了确诊某养牛场牛死亡的原因,根据发病情况、临床症状,结合实验室检查结果:血涂片吉姆萨染色镜检发现附红细胞体,支原体核酸检测呈阳性,诊断牛发病死亡的原因为附红细胞体与支原体混合感染。     

猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法的建立及应用

根据GenBank上发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号U88565)设计合成2对引物,建立了猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法,经酶切分析、单管巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定,并与血涂片染色镜检、常规PCR进行了比较。结果:扩增的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(U88565)同源性为96%;特异性试验表明,设计的引物不能扩增弓形虫、链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌及羊附红细胞体等病原体;敏感性试验表明,单管巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.116 fg的标准模板DNA。通过对75份血液样本的检测表明,建立的单管巢式PCR方法明显优于血涂片染色镜检法及常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性。本试验建立的单管巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等优点,为猪附红细胞体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。     

单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体

为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。     

我国猪附红细胞体病的流行现状与防治策略

附红细胞体病是由附红细胞体寄生于红细胞表面、游离于血浆或骨髓所引起的一种人畜共患的传染病。大量的报道称猪附红细胞体病在我国许多地区的猪群出现了大规模的暴发和流行,造成了巨大的经济损失,由此也引起了国内兽医界对猪附红细胞体病的广泛关注并开展了大量的研究。由于缺乏对猪附红细胞体病表现形式的全面认识,加之当前猪病的复杂性,在许多情况下存在对猪附红细胞体病的危害性过分渲染的现象,也有不少情况下低估附红细胞体对猪群健康的影响。由于猪附红细胞体病缺乏特征性症状,在临床上该病与其它病原体混合感染的现象亦十分普遍。因此,从流行病学方面考虑,感染附红细胞体的发病猪首先要表现出较为明显的临床症状,如贫血、消瘦、黄疸和发烧等症状,其次,猪群遭受应激或发生了其它免疫抑制性疾病。要确诊必须结合病原检查进行综合性诊断。传统的病原检查方法包括鲜血压片检查和血片染色检查。笔者经过长期对该病病原的光镜和电镜观察认为,鲜血压片检查不适合作为病原确诊的依据,因为显微镜下很难将变形的红细胞与红细胞表面附着的病原体相区别,而且也不能将血浆里活泼运动的不明小体就认定为附红细胞体。正确的检查方法应将血涂片进行染色,在高倍镜和油镜下观察到附着于红细胞表面的病原体作为确诊的依据,而不是红细胞的变形或突起。对发病猪群,在治疗上除使用附红细胞体有效的药物外,也要注意对症治疗,纠正酸中毒,补充血糖。     

犬附红细胞体病的诊治

犬附红细胞体病是由附红细胞体游离寄生于犬血液或附着于红细胞表面而引起的一种血液寄生虫病。该病临床上以持续性高热、贫血、黄疸为主要特征[1]。附红体是一种多形态微生物,多在红细胞表面以单个或成团寄生,从而使红细胞呈现锯齿状、星芒状等形态。目前临床主要以患犬临床表现和鲜血压片或血涂片染色镜检为诊断依据。1发病情况     

重庆荣昌县猪附红细胞体感染情况调查及危险度分析

采用鲜血压片镜检、姬姆萨染色镜捡与基于16SrRNA—PCR检测方法,对重庆市荣昌县部分农户散养和规模养猪场进行猪附红细胞体感染的调查,并进行不同养殖规模下猪附红细胞体感染的危险度分析。结果发现,鲜血压片镜检、姬姆萨染色镜检和PCR法检测猪的附红细胞体感染率分别为61％、67％和76％;农户散养猪附红细胞体感染率（83％）显著高于规模化养猪场（68％）。危险度分析表明,农户散养猪感染附红细胞体的危险度明显高于规模养猪场,养殖规模的差异与猪附红细胞体的感染具有中等的联系强度（OR=2．32;95CI=1．99～2．69）。     

牛双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染的诊治

为了对贵州省贵定县某种牛养殖场种牛死亡原因进行确诊,采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、寄生虫和支原体检测等方法对发病死亡的种牛进行诊断。结果表明:根据流行病学调查、病理剖检初步诊断送检的病死种牛疑似血液原虫、支原体感染后支原体病原核酸检测出特异性条带;血涂片染色镜检观察到大量附红细胞体,感染率为80%(8/10),且红细胞内有典型双芽巴贝斯虫虫体,感染率为40%(4/10)。确诊造成该种牛养殖场种牛发病死亡的原因为双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染。     

猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法的建立及应用

为建立一种特异、敏感、准确的猪附红细胞体诊断技术,本试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体全基因组(NC-015153.1)中的DnaJ基因序列设计合成了一对特异性引物,建立了猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法,进行了特异性和敏感性试验,并与姬姆萨染色镜检方法进行了临床应用比较.结果,猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法扩增片段大小为868 bp(GenBank登录号为;JN247670),与GenBank中(NC_015153.1)同源性为99％,该方法扩增不出犬新孢子虫、牛附红细胞体、犬附红细胞体等基因片段,最低检测猪附红细胞体DNA量为124 fg/μL,通过对53份猪血液样本的检测,并与血液涂片姬姆萨染色镜检比较,说明建立的PCR诊断方法具有特异、敏感、准确等优点,完全适用于猪附红细胞体的诊断.     

一例猪附红细胞体病的实验室诊断

为确定贵州省长顺县某养殖场猪群突然发病死亡的原因,无菌采集5头发病猪的血液作为检测病料,采用细菌分离培养、病毒核酸检测和血涂片检查3种方法进行实验室诊断。结果:细菌分离培养和病毒核酸检测均为阴性;血涂片姬姆萨染色镜检显示大部分红细胞边缘不整齐,呈星芒状、锯齿状、刺球状等不规则形状,符合附红细胞体感染特征。结论:猪群发病原因为附红细胞体感染。     

猪附红细胞体病原特征及其致病性分析

为研究猪附红细胞体的病原形态学特征及其致病特性,给6只临床健康小鼠成功感染了猪附红细胞体病,对试验组小鼠感染后的不同时期采集的血样进行了鲜血压片、姬姆萨染色及扫描电子显微镜下的形态学检查,红细胞计数和以P1:5'-GCATGCCCAGTCCCCAAGGA-3'和P2:5'-TGCGGGGAGTACGTGGGAAGG-3'为特异性引物,利用2003年Ludwig E报道的方法对待检血样中附红细胞体DNA的PCR鉴定及测序.1 000倍油镜下观察到单个或连成线状的附红细胞体附着于红细胞表面,红细胞变成刺状、菠萝状或"口"字形等不规则形状;12 000倍扫描电镜下观察到了"逗点"状及以纤丝与红细胞膜相连的附红细胞体;红细胞计数结果显示:与对照组相比试验组小鼠在接种后第7、10、14天出现大量异型性红细胞,其中第10天严重变形红细胞数量最多.说明猪附红细胞体病发病明显期在感染后第7～14天,14 d以后逐渐消散;PCR扩增得到782 bp的DNA片段,经序列分析与序列号为AJ504999的相应片段同源性为99.74%.本试验为猪附红细胞体的病原特性的研究提供了科学依据,为猪附红细胞体病发病机理等方面更深入的研究奠定了基础.     

猪附红细胞体病的诊断与治疗

猪附红细胞体病是由立克次氏体病原-猪附红细胞体引起的以贫血、黄疸和发热为主要症状的人畜共患病,该病多为阴性感染,造成家畜的体质下降,生长速度减慢,饲料报酬降低。采用鲜血涂片镜检,血片染色镜检、动物实验和间接血球凝集实验等方法对70日龄的发病猪进行诊断,用血虫清+土霉素制剂、维生素C、维生素B12和肌苷治疗,效果明显。     

猪附红细胞体实验室检查方法

附红细胞体病是广泛存在于人和动物体内的一种人畜共患病,是由附红细胞体寄生于人畜红细胞表面及其血浆、骨髓中而引起的,临床上以发热、贫血为主要特征。附红细胞体病具有高感染率、低发病率的特点,人工培养病原体没有获得成功,其形态结构和生物学特性均不完全清楚。现对附红细胞体实验室检查方法总结如下:1血液参数的变化经检测,感染附红细胞体的病猪红细胞总数可减少到1.78×109个/ml,血红蛋白降低到43g/L,均低于正常值。2鲜血压片法将等量鲜血和生理盐水混合,滴一滴于载玻片上加盖玻片,置油镜暗视野观察,可见到红细胞有形态学变化,在红…     

猪附红细胞体实验动物模型的建立

为建立一种合适的猪附红细胞体病动物模型，利用摘除脾和／或注射地塞米松的昆明小白鼠，以腹腔注射方式人工感染猪附红细胞体，通过血液涂片镜检、PCR检测、临床症状观察及病理剖检对感染情况进行了鉴定。结果显示，猪附红细胞体能够经腹腔注射感染昆明小白鼠，且感染鼠表现出与猪附红细胞体病相似的临床症状。结果表明，猪附红细胞体实验动物模型已成功建立，并证实啮齿类动物在附红细胞体的传播过程中发挥着重耍作用。     

对猪发生“附红细胞胞体病”的调查研究和讨论

本文就近几年发生的“猪附红细胞体病”进行了调查研究，发现广泛用于诊断附红细胞体病的血液压片检验法，看到刺状红细胞、狼牙棒状红细胞和血浆中游动物，经用超高倍显微分析仪放大2万倍后，进行活血分析，结果认定，所谓附着于红细胞上的附红细胞体及刺状红细胞等变化，是红细胞膜发生畸形或改变，它是因血液生化异常，机体代谢障碍或紊乱，造成红细胞形态改变，而不是因附红细胞体附着所致。血浆中游动物，系血小板及乳糜微粒等颗粒。由于广泛使用这种不适于做为诊附红细胞体感染的血液压片检验方法，从而得出了猪和多种畜禽以及人，大量被附红细胞体严重感染的错误结论。如用血片染色认定附红细胞体，必须要制作出高质量的鲜血染片，并应由经验丰富的专家认定。根据调查研究分析，还认为近几年严重发生的“附红细胞体病”，不符合该病发生和流行病学等方面的规律。认为附红细胞体病是一种人畜共患病，必须慎重对待。应使用严谨可靠的诊断方法，查清当前人畜感染本病和危害状况。     

抗附红细胞体有效药物的筛选

以PCR检测附红细胞体呈现阳性，且镜检染虫率达909／5以上的猪血样为研究对象，选择几种附红细胞体敏感的药物(血虫净，附红净，庆大霉素，博士914，土霉素，三毒清，红弓链914，附红120，红弓链克，乌金土霉素)和对支原体敏感的恩诺沙星，对立克次氏体敏感的红霉素，采用两种方法进行体外药效试验。附红净对附红细胞体的作用效果最明显，而庆大霉素对附红细胞体基本无效，其他药物对附红细胞体也有一定杀灭效果。     

猪附红细胞体形态学研究

通过显微镜观察附红细胞体在血浆中的运动，再结合血液涂片瑞氏、姬氏染色，观察附红细胞体附着在红细胞上的状态；并通过对附红细胞体的透射电镜和扫描电镜观察，发现附红细胞体超微结构的特点，为诊断附红细胞体病和对附红细胞体进一步研究提供基础。     

绵羊附红细胞体人工感染小鼠模型的建立

分别用绵羊附红细胞体自然感染病羊的全血及分离纯化的绵羊附红细胞体对小白鼠进行攻毒,以建立绵羊附红细胞体人工感染小鼠模型。通过攻毒后症状观察、血液涂片镜检和绵羊附红细胞体特异性PCR检测法,对建立的模型进行评价。结果显示,各试验组小鼠人工感染后3~6 d,血液中均可检测到绵羊附红细胞体,而对照组小鼠未出现异常症状,且血液附红细胞体检查结果为阴性。该研究成功地构建了绵羊附红细胞体小白鼠感染模型,创建的模型可用于附红细胞体的生物学特性、致病机制、药物筛选等方面的研究。     

将乐县猪附红细胞体病流行情况调查

将血涂片用姬姆萨染色、镜检,确认猪附红细胞体阳性感染,调查将乐县猪附红细胞体病流行情况。调查发现将乐县猪附红细胞体阳性感染率夏季比冬季更高,而且有逐年上升的趋势。     

人工感染猪附红细胞体病的病理组织学研究

为观察昆明小鼠人工感染猪附红细胞体后的病理组织学变化。用常规病理学方法,对6只腹腔注射感染猪附红细胞体的小鼠进行病理解剖学和病理组织学研究,光镜下观察并描述小鼠红细胞感染附红细胞体后的形态变化。剖检可见主要器官和皮下瘀血,胸腹部皮下脂肪黄染,病理组织学变化的主要特征是心、肝、脾、肺、肾等主要脏器实质细胞变性、坏死,毛细血管扩张充血、出血,脾窦内含铁血黄素沉着。结果表明,猪附红细胞体感染小鼠模型的成功建立,镜下红细胞的形态特征及主要器官剖检和病理组织学变化与文献报道的猪附红细胞致病特征基本吻合,存在的差异可能与不同地域猪附红细胞体病原株致病性有关。     

一例仔猪感染猪附红细胞体的诊断

为了对一例仔猪附红细胞体病做出准确的诊断,本文采用了三种血液形态学诊断方法。猪附红细胞体病形态学诊断方法包括鲜血生理盐水压片、血涂片的瑞氏和姬姆萨染色,以及在油镜下观察猪附红细胞体的形态,采用上述方法对该例仔猪附红细胞体病做出了准确的诊断,为临床治疗提供了依据。