鸡传染性支气管炎基因工程苗研究及应用

一、立项依据(含研究意义、现有研究状况分析) 鸡传染性支气管炎是又由鸡传染性支气管炎病毒感染引起的一种急性高度接触性呼吸道和生殖道的疾病,近几年,由于传染性支气管炎血清型和变异株很多,现有的疫苗免疫效果不够理想,临床上时有鸡传染性支气管炎的发生和流行,利用基因工程疫苗进行免疫预防是一个     

鸡肾型传染性支气管炎及其防治

鸡传染性支气管炎是由冠状病毒科的传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性高度接触性传染病。1963年在美国发现肾病变IBV，血清型不同于Mass株，主要引起鸡的肾脏损伤，另外还能造成呼吸道感染和死亡。鸡传染性支气管炎已成为影响养鸡业的四大重要传染病之一。近年来由于新的变异株不断出现，导致现有疫苗免疫效果越来越差，临床上疫苗免疫鸡群不断有鸡肾型传染性支气管炎病的爆发和流行，引起了国内外兽医科技工作者的高度重视。我国山东、河南、河北、浙江、四川、辽宁等20多个省市报导有本病发生。2000年陕西省亦发现有鸡肾型传染性支气管炎病，     

介绍几类兽用新疫苗

(一)基因工程疫苗1.重组活载体疫苗。病毒活载体疫苗研究得较多,如用鸡痘病毒作为载体,表达成功的保护性抗原基因就有新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒、狂犬病病毒、传染性支气管炎病毒、艾美尔球虫等。2005年12月24日,农业部在北京     

一株嗜肾型传染性支气管炎病毒的分离、鉴定及现地苗应用研究

利用鸡胚分离法由发生嗜肾型传染性支气管炎的病死鸡分离到了嗜肾型传染性支气管炎病毒F株，用其培养物制备的现地疫苗，免疫原发病鸡场的鸡群，观察整个饲养周期，再无嗜肾型传染性支气管炎发生.     

中药治疗鸡传染性支气管炎

近年来，鸡传染性支气管炎的发病率明显增多，给养殖户造成了不小的经济损失。 目前尚无理想的治疗药物，主要采取预防的措施，加强科学管理，严格防疫制度是控制该传染病的关键。种鸡在3周龄内接种传染性支气管炎病毒疫苗H120，饮水或滴鼻，免疫3周；7周龄以上的鸡接种传染性支气管炎病毒苗H52作为加强免疫，免疫期5～6个月。 那么，对于鸡传染性支气管炎流行时，应采取什么措施呢？ 鸡患传染性支气管炎是混合感染，有针对性的使用相应的抗生素和中草药的同时，结合病毒灵、樟脑磺酸钠等药物，能够取得较佳的效果。 肾病变型传染性支气管…     

鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联苗的相关检测试验

鸡新城疫（NO）、传染性支气管炎（IB）和传染性法氏囊病（IBD）三种传染病通常采用相应的单苗进行多次免疫,不仅费工费时,频繁免疫接种还会引起鸡的应激反应。目前,国外已研制出鸡新城疫、传染性支气管炎和传染性法氏囊三联弱毒疫苗。近年来,国内也开展了这方面的研究工作,由于各地采用的毒株不同,制备工艺不同,病毒的培养方式也不一样,制备的鸡新城疫一传染性支气管炎一传染性法氏囊三联疫苗对鸡的免疫效果也不一样。     

鸡传染性支气管炎病毒N蛋白研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是严重危害养鸡业的重要病原之一.近年来国内外学者在分子生物学领域方面的研究不断深入,在病毒基因组的结构与功能及其N蛋白的研究方面取得了重要进展.对N蛋白如何特异性地识别病毒基因组RNA、参与病毒RNA的复制和包装、诱导IBV体液和细胞免疫应答的机制、IBV新型基因工程疫苗研制以及IBV的抗体水平监测等方面的研究,为IBV基因工程疫苗设计及其免疫防控提供了科学依据.     

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用

将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4 、TCRγδ T淋巴细胞比例显著高于对照组,而CD8 T淋巴细胞比例低于对照组。免疫后4周用1×103.0EID50的传染性支气管炎病毒LX4株进行攻毒,结果表明,重组鸡痘病毒免疫组与IB弱毒疫苗免疫保护率分别为12/16和13/16;攻毒后喉拭子IBV分离结果表明,IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组的IBV气管排毒时间比对照组缩短了2 d,病毒的分离率显著低于对照组;肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾和肝脏的病理损伤也较对照组轻,而且病变持续时间缩短。     

传染性支气管炎（IB）活疫苗（H120）对蓝孔雀免疫效果的研究

鸡传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种急性、高度接触传染性呼吸道病。本病呈世界性分布，我国各地常有流行。本病的易感动物主要是鸡，亦见于鸽等动物，鸡6周龄以内发病率高达90％，死亡率在25％～40％。在动物园孔雀饲养中，该病时有发生，防制鸡传染性支气管炎的关键在于预防接种疫苗，蓝孔雀免疫现在通常使用鸡用疫苗，采用鸡的普通程序应用，对于免疫能否产生抗体，免疫后的抗体效价水平等问题尚未明了。本文通过蓝孔雀用疫苗免疫后的抗体水平跟踪测定，通过分析抗体的消长规律，为防治蓝孔雀传染性支气管炎提供依据。     

鸡传染性法氏囊病的流行特点及防控措施

鸡传染性法氏囊病是由双股RNA病毒引起的一种免疫抑制性、高度接触性传染病。传染性法氏囊病毒侵蚀的靶器官是法氏囊，可引起严重的免疫抑制，诱发多种疫苗（如新城疫疫苗、传染性支气管炎疫苗）的免疫应答失败，增加鸡对大肠杆菌、沙门氏菌、球虫等病原菌的易感性，给养禽业带来严重危害和巨大损失。     

鸡传染性支气管炎病毒SX-H09株膜蛋白基因的克隆及序列分析

对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)陕西分离株SX-H09株膜蛋白(M)基因进行克隆和序列分析.根据GenBank发表的IBV基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR扩增IBV M基因片段,并进行克隆、序列测定和分析.结果表明,SX-H09株M基因全长为678 bp,编码225个氨基酸.同源性比较可知,SX-H09株M基因...     

鸡肾型传染性支气管炎病毒QD株S1基因的克隆与序列分析

One nephropathogenic infectious bronchitis virus （IBV） strain was isolated from Qingdao city, named as QD isolate.S1 gene of the strain was amplified, cloned and sequenced. The S1 gene of QD isolate was composed of 1620 nucleotides, and a spike glycoprotein cleavage recognition site was Arg-Arg-Phe-Arg-Arg. The nucleotide acid similarities among the nine IBV vaccine strains and the QD strain were 78.8% to 82.2%. Phylogenetic analysis based on the S1 genes showed that QD strain and the vaccine strains belonged to different clusters, and showed larger evolutionary distances, but showed the smaller evolutionary distances with the field nephropathogenic IBV strains in China. The result showed that nephropathogenic IBV strains were widely popular in China, and the QD strain could be used as the infectious bronchitis vaccine candidate strain.     

表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的构建

将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组，产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明，获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传，间接免疫荧光和Western blot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBV S1糖蛋白。     

传染性支气管炎病毒和大肠杆菌混合感染三黄鸡的诊断

传染性支气管炎病毒和大肠杆菌是严重危害养鸡业的2种传染病原。2011年春夏之交,福州闽候某养鸡场饲养一批三黄鸡突然发病,经症状观察、病理剖检、病原分离鉴定确诊为传染性支气管炎病毒和O₇₈型大肠杆菌混合感染。对传染性支气管炎病毒分离株FJ/11/05 M基因测序后分析表明,分离株FJ/11/05与M41株(美国呼吸型)、美国分离株Beaudette的亲缘关系较近;而与疫苗株H120、D41遗传进化关系较远。     

鸡肾型IBV的分离及其N基因的克隆与测序

通过病毒形态学观察、血凝试验、病毒干扰实验、动物回归实验等分离鉴定了1株鸡肾型传染性支气管炎病毒.利用RT-PCR技术对分离毒株的N基因进行了扩增,经克隆、序列测定和分析,证实分离株为肾型IBV.     

一株肾型鸡传染性支气管炎病毒的初步分离鉴定

从哈尔滨市某肉鸡养殖场疑似传染性支气管炎的病死鸡中分离到1株肾型IBV,并对其进行鸡胚矮小化、血凝性、电镜下特征、新城疫干扰试验、致病性等生物学鉴定和N基因的RT-PCR鉴定。结果表明,该病毒分离株在鸡胚上传至第四代(F)4开始出现死亡或侏儒胚;病毒不凝集鸡红细胞;透射电镜下可见多呈球形、直径约80～120nm的病毒粒子,具有冠状病毒的典型形态特点;该病毒可干扰新城疫LaSota株在鸡胚中的增殖;将分离毒第4代尿囊液接种于6日龄雏鸡,7d后开始出现死亡,死亡率高达67%(6/9),病死鸡剖解后可见肾脏明显肿大、苍白,具有传染性支气管炎的典型病变;分离毒第5代尿囊液经N基因特异性RT-PCR获得大小约438bp的目的片断。初步确定所分离病毒为肾型IBV。     

鸡传染性支气管炎病毒免疫机制和免疫预防研究进展

由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）是高度传染的全球性鸡病之一,严重危害养鸡业。IBV众多的血清型及其基因组的不断变异,给IB的免疫防控带来很大的困难。IBV主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统,病鸡出现呼吸困难、产蛋下降、肾炎和腺胃炎等症状和病变。IBV的特点是变异频繁,血清型复杂,所致疾病的临床表现差异很大。因此,IB已成为养禽业最难控制的疫病之一。鸡对IBV的免疫机制是国内外研究的热点之一。传统疫苗已不能完全保护免疫鸡群,开发IBV基因工程疫苗,从主要免疫原性蛋白的良好表达到免疫策略的不断完善,已成为未来预防IB的趋势。     

2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因的序列分析

采用RT-PCR方法对2株传染性支气管炎病毒分离株的S1基因进行序列扩增、测定及分析,应用DNAStar软件将这些分离毒株与中国常用疫苗毒株、其他血清型的代表参考毒株分别进行核苷酸和氨基酸系统发生进化关系分析。核苷酸与氨基酸序列分析结果均表明：2株分离毒株与J2、Q1、T3毒株的亲缘关系较近,与疫苗株H120和4/91的亲缘关系较远。     

鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定及S1基因遗传演化分析

为调查辽宁地区鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及遗传演化情况,从辽宁某鸡场疑似鸡传染性支气管炎病料中分离得到1株病毒,经分子生物学检测、鸡胚矮小化试验、新城疫病毒血凝特性干扰试验和动物回归试验,确定该毒株为IBV,并命名为CH/LN/2019。扩增该毒株S1基因并进行序列分析发现,分离株S1基因全长1 620 nt,编码540个氨基酸,S1蛋白裂解位点为HRRRR,属于基因Ⅰ型(QX型)毒株;同源性比对发现,分离株与基因Ⅰ型代表毒株QXIBV株的核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为95.6%和94.8%;与国内常规型疫苗H52、H120和Ma5毒株的同源性较低,核苷酸和氨基酸序列同源性仅为77.2%~76.9%和75.4%~76.2%。本试验为辽宁地区鸡传染性支气管炎的流行病学调查及免疫防控提供了参考。     

鸡传染性支气管炎活疫苗(D971p株)的研究

从国内发病鸡群中分离到传染性支气管炎（嗜腺胃型）病毒（IBV-D971株），在SPF鸡胚上连续传至120代，培育出IBV-D971p弱毒株。用该毒株制备活疫苗，经安全、效力等试验证明具有较高的免疫保护率和安全性，能有效的预防腺胃型、肾型鸡传染性支气管炎。