犬DEA1.1血型抗体间接ELISA检测方法的建立

为探求减少宠物临床中犬因血型错配发生的输血反应,本试验以DEA1.1阳性红细胞膜作为抗原建立能检测DEA1.1抗体的间接ELISA方法。试验以犬DEA1.1血型为主要研究对象,提取犬红细胞膜,以DEA1.1阳性红细胞膜作为抗原,用醛化技术包被抗原,优化间接ELISA反应条件。结果显示,最佳固定剂为浓度0.062 5%和0.125%的戊二醛,最佳抗原包被量为4～8μg/孔,最佳封闭液为5%的脱脂奶粉,最佳温度为37℃,最适反应时间为90 min。与间接抗球蛋白试验相比,优化后的间接ELISA法有更高的灵敏性,本试验建立的间接ELISA方法可以对犬DEA1.1血型抗体进行高通量检测。     

犬红细胞抗原1.1血型多克隆抗体的制备与鉴定

为了制备犬红细胞抗原1.1(DEA1.1)血型多克隆抗血清,用犬血型快速检测卡分别鉴定DEA1.1阳性犬和DEA1.1阴性犬,用DEA1.1阳性犬完整红细胞免疫DEA1.1阴性犬。多次免疫后采集阴性犬血清,用抗球蛋白血凝试验验证多抗血清的符合率。结果显示,制备的多抗血清与商品化的多抗血清符合率为98%。抗球蛋白试验检测抗体血凝效价为211。试验表明,制备的犬血型DEA1.1多克隆抗体能达到血型鉴定的要求,能满足国内犬临床输血中DEA1.1血型检测的要求。     

犬血型DEA1.1抗原生化特性的研究

为了研究犬血型DEA1.1抗原生化特性,为犬输血前血型检测提供理论依据,试验采用凝聚胺介质试剂调查356只不同地区及品种犬的DEA1.1血型频率分布,用考马斯亮蓝法检测DEA1.1红细胞膜蛋白并通过免疫沉淀鉴定血型蛋白大小,观察多种酶处理对DEA1.1抗原性的影响,通过ABO血型检测试剂和ABO型微柱凝胶检测卡检测人类红细胞ABO血型与犬DEA1.1血型有无交叉反应。结果表明:不同品种犬的血型频率差异较大,DEA1.1血型为50 ku和200 ku膜蛋白;DEA1.1抗原在无花果酶、木瓜酶、链霉蛋白酶处理后抗原性增强,在菠萝酶、糜蛋白酶和胰蛋白酶处理后抗原性未增强;DEA1.1阴、阳性红细胞与ABO血型试剂均未发生凝集。说明为降低输血反应,最好采用DEA1.1血型频率低的犬种作为供血犬,并建议输血前采用木瓜酶介质交叉配血试验进行血型检测。     

犬DEA1.1血型抗原保存的研究

本试验采用甘油化冻存红细胞及醛化固定红细胞的方法探索适合犬DEA1.1血型抗原保存方法,用3%、6%、10%、20%、30%和40%(w/v)浓度的甘油溶液保存犬DEA1.1血型红细胞,分快速冻存、程序降温两组处理,并对甘油化红细胞进行溶血情况、回收率、物理性状、保存期及抗原效价的测定;用0.25%、0.5%戊二醛,1.5%、3%甲醛和0.5%、1%多聚甲醛分别固定犬DEA1.1血型红细胞,检测犬红细胞醛化稳定性,以及醛化红细胞与新鲜红细胞DEA1.1血型抗原效价符合率。结果显示,30%浓度甘油程序降温组去甘油化后红细胞溶血率、细胞破损率最低,回收率最高且物理性状新鲜红细胞相似,抗原性与新鲜红细胞符合率可达93%,保存期可达12个月;用戊二醛醛化固定120 d的红细胞稳定性及犬DEA1.1抗原的敏感性不变,抗原滴度与新鲜红细胞的符合率可达到100%。表明30%浓度甘油的程序降温冻存与0.25%～0.5%戊二醛醛化固定都能较好保存犬DEA1.1抗原性。     

犬红细胞膜糖蛋白的提纯与鉴定

为了研究犬的血型,首先从红细胞膜表面抗原即犬红细胞膜血型糖蛋白入手,试验采用低渗溶血法制备犬红细胞的鬼影细胞,进而制备兔抗犬的红细胞多克隆抗体进行细胞凝集检测,再经SDS-PAGE和蛋白质免疫印记分析蛋白条带。结果表明:试验所得犬细胞膜糖蛋白与国际上测得的部分犬血型糖蛋白分子质量相符。说明此种提纯方法可用于研究犬的红细胞膜表面糖蛋白。     

犬的血型与输血疗法

1 犬的血型 通过直接或间接凝集反应以及溶血反应,人们逐渐认识了犬的各种红细胞抗原.到目前为止,已报道的犬血型有红细胞抗原(DEA)1.1(A1)、红细胞抗原1.2(A2)、红细胞抗原3(B)、红细胞抗原4(C)、红细胞抗原5(D)、红细胞抗原6(F)、红细胞抗原7(Fr)和红细胞抗原8(He).     

实验动物山羊血型鉴定初探

目的:旨在分析研究山羊是否具有与人类相似的不同血型。方法:用一次性EDTA-K2真空管,采集河北省邢台县当地山羊全血样本。采用微柱凝胶卡鉴定血型,正定型检测山羊A B O血型的A抗原、B抗原及Rh系统的D抗原;反定型检测抗-A、抗-B及A B O血型系统以外抗体。结果:正定型抗-A、抗-B及抗-D试剂血清与山羊红细胞在微柱凝胶血型卡中,凝集反应均为阴性;反定型山羊血清与试剂A细胞、B细胞均为阴性反应。山羊血型正定型为O型,Rh(D)血型为阴性;反定型也似O型;但对照管与O型红细胞发生凝集反应,推测山羊血清中存在着抗人红细胞的种族抗体。结论:山羊红细胞上无抗原,正反定型类似人类红细胞A B O系统的O型、Rh(D)阴性;但山羊血清中有抗人类红细胞的种族抗体。     

Dot-ELISA检测犬传染性肝炎病毒抗体的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜作为 Dot-ELISA 固相载体,HRP-SPA 代替酶标抗犬 IgG 抗体,用于检测犬传染性肝炎病毒抗体,并与微量血清中和试验比较。结果表明,Dot-ELISA 具有良好的重复性、敏感性和特异性,能客观地反映犬体抗体水平变化。经对165头太血清检测,阳性传出率为54.5%。该方法简便易行,不需复杂仪器,宣于推广使用。     

鸽毛滴虫感染Dot-ELISA检测方法的建立

为了制备兔抗鸽IgG抗体-HRP,建立斑点酶联免疫吸附试验定性检测鸽毛滴虫抗原的检测方法,将纯化的鸽IgG加入佐剂免疫兔子,获取纯化的兔抗鸽IgG抗体;采用简易过碘酸钠法标记兔抗鸽IgG,获取兔抗鸽IgG抗体-HRP;同时将鸽毛滴虫用超声波粉碎加入佐剂后多次免疫健康鸽获取鸽抗鸽毛滴虫高免血清(一抗);然后在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,用不同浓度的一抗抗体、兔抗鸽IgG抗体-HRP进行试验;并对70个临床样品进行检测。结果显示,在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,一抗与兔抗鸽IgG-HRP最佳工作浓度分别为1∶100和1∶500;70个样品中,48个镜检为阳性的样品用Dot-ELISA检测有44个呈阳性,阳性符合率为91.7%;22个镜检为阴性的样品用Dot-ELISA检测有12个呈阴性,阴性符合率为54.5%;Dot-ELISA检测与镜检结果的总符合率为80%。结果表明,本试验成功地建立了鸽毛滴虫感染的Dot-ELISA检测方法。     

多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立

建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑。以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(感染多房棘球绦虫)和阴性对照犬犬粪。结果显示,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体;对该方法的灵敏度进行检测,阳性粪样稀释至1∶10 000时仍显示为阳性;在感染动态分析中,该方法最早可在犬感染72 h后,最迟6 d后检测到多房棘球绦虫粪抗原。表明建立的方法可用于诊断犬多房棘球绦虫感染,为后期研制犬多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

癸氧喹酯干混悬剂含量测定的改进

采用高效液相色谱法测定癸氧喹酯干混悬剂的含量,在2-250μg/mL范围内,峰面积的常用对数与进样量浓度的常用对数呈良好的线性关系,R^2=1(n=5),平均回收率为99.24%~99.51%,RSD在0.05%~0.28%。此方法分析时间短,样品前处理简便、定量结果准确,重现性好,结果满意,为其质量控制提供了依据。     

中华人民共和国农业部公告 第267号

为贯彻落实《兽药生产质量管理规范》(简称《兽药GMP》),进一步推动兽药GMP实施进程,我部制定了《兽药生产质量管理规范检查验收办法》,现予公告。本公告自2003年6月1日起施行。附件:兽药生产质量管理规范检查验收办法二○○三年四月十日第一章 总则 第一条 为推动《兽药生产质量管理规范》(以下简称兽药GMP)的实施,规范兽药GMP检查验收工作,制定本办法。 第二条 农业部负责全国兽药GMP管理和检查验收工作;负责制修订兽药GMP检查验收管理规定;负责兽药GMP检查员队伍建设和监督管理工作,负责国际兽药贸易中GMP互认工作。 …     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

Comparison of 2 methods of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。