鸽毛滴虫3种检测方法比较及环境毛滴虫存在调查

本研究采用现场直接镜检法、样品培养检查法和PCR检测法3种不同检测方法对采自广东省某规模化肉鸽养殖场的60份鸽口腔黏液样品进行鸽毛滴虫检测,来比较3种不同检测方法的差异。结果表明,直接镜检法毛滴虫的阳性率仅为20.0%,而使用培养检查法和PCR检测方法对样品进行检测,其阳性率分别为38.3%和40.0%,均明显高于直接镜检法。以此建立了一种简便、快速和高效的鸽毛滴虫样品培养检查法。同时也对广东省不同地区3个规模化肉鸽场的养殖环境进行鸽毛滴虫检测,结果在鸽笼、食槽、保健砂和水槽部位均未检测到鸽毛滴虫。本研究为鸽毛滴虫病的防治提供了技术支持和依据。     

应用Dot-ELISA检测禽白血病病毒抗原的研究

以鸽抗鸡劳氏肉瘤病毒(RSV)血清IgG作为包被抗体及酶标抗体的双抗体夹心法Dot-ELISA,检测禽白血病病毒抗原,其特异性及敏感性与澳大利亚ELISA(用兔抗AMV-P_(27)血清IgG作为包被抗体及酶标抗体)相同。可用以检测卵清中禽白血病病毒抗原及用鸡胚或鸡胚细胞生产的各种疫苗中污染的禽白血病病毒抗原。     

兔抗鸡传染性法氏囊病抗体的制备和纯化

采用自然发病的传染性法氏囊病（IBD）病鸡的法氏囊组织制作鸡IBD油佐剂灭活苗,用鸡IBD油佐剂灭活苗多点皮下注射健康成年兔,获得高免兔抗鸡IBDV血清,经过盐析、透析的方法制备高纯度的兔抗鸡IBDV高免IgG。兔血清中抗体效价为1∶128,蛋白质含量为40.3~48.8 mg/ml;纯化后效价为1∶32,蛋白质含量为18.0~23.0 mg/ml。用此试剂对安徽部分地区疑似鸡IBD的病例进行了诊断,取得良好效果。该试剂为临床琼脂扩散试验(AGP)检测IBDV抗原提供高效价的抗体,并为临床免疫组化法检测IBDV提供可靠的抗体。     

蛇床子素体外抗鸽毛滴虫的效果及形态学观察

为了观察蛇床子素体外抑制鸽毛滴虫的效果及其对形态学的影响,试验分为4组,蛇床子素浓度分别为0(空白)、1、3、5 mg/m L,分别在培养2、4、6、8、12、24 h从各组取样,于光学及电子显微镜下观察鸽毛滴虫的形态学变化,记录死亡情况。结果显示:随着蛇床子素浓度的增加,鸽毛滴虫的死亡率随之升高,死亡时间随之缩短。5 mg/m L组的效果最佳,用药12 h即可杀灭全部的毛滴虫;浓度为1 mg/m L的药物组至24 h仍未全部死亡;浓度为3 mg/m L的药物组至24 h全部死亡。扫描电镜观察显示,药物作用初始阶段鸽毛滴虫由梨形逐步变圆,形态完整;不久虫体边缘模糊,表面出现皱褶,局部有凹陷;接着凹陷面积扩大,内部出现空洞,虫体形状变得不规则,最后虫体崩解成碎片。结果表明蛇床子素具有明显抗鸽毛滴虫的效果。     

牛羊日本血吸虫抗体检测试纸条的研制

为研制一种快速检测牛羊血吸虫抗体的试纸条检测方法,以乳胶微球标记兔抗牛羊IgG为免疫探针,血吸虫虫卵可溶性抗原为检测线,羊抗兔IgG为质控线,建立了快速检测牛羊血吸虫抗体的试纸条检测法。该方法可测出人工感染血吸虫尾蚴28d及以上的牛血纸抗体,检测东毕吸虫、肝片吸虫血样未见交叉反应;用试纸条检测人工接种血吸虫牛血纸20份、非疫区牛血纸30份,与Dot-ELISA法、粪孵法的阳性符合率和阴性符合率均为100%。血吸虫抗体检测试纸条在2℃~8℃保存14个月,室温保存8个月不失效。试验表明,血吸虫病血纸抗体检测试纸条具有很高的敏感性、特异性、可重复性和稳定性,适合于基层单位进行家畜血吸虫抗体的快速诊断、普查和检疫。     

流行性出血病病毒抗原捕获ELISA方法的建立

为建立流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,本试验用纯化处理的4种血清型病毒(EHDV-2、5、6和8)混合免疫兔和豚鼠,制备高免血清。以兔抗EHDV为捕获抗体,豚鼠抗EHDV为检测抗体,羊抗豚鼠IgG-HRP为酶标抗体,建立了EHDV抗原捕获ELISA(antigen capture ELISA,AC-ELISA)方法。通过反应条件优化,获得最佳工作条件:5%马血清为稀释液,包被抗体1∶15 000稀释,检测抗体1∶20 000稀释,酶标抗体1∶15 000稀释。通过检测60份阴性样品确定临界值,P/N值≥2为阳性、P/N值1.5为阴性;特异性试验表明该方法仅能检测出各血清型EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、赤羽病病毒(AKAV)及中山病毒(CHUV)无交叉反应;敏感性试验表明该方法可以检出102.47±0.07 TCID50的病毒;批内和批间变异系数均10%;用RT-PCR与该方法同时对70份参考样品进行检测,符合率为92.86%。表明本试验建立的AC-ELISA方法为EHDV抗原检测提供了一种可靠实用的技术手段。     

斑点免疫吸附试验诊断羊脑多头蚴病的研究

以原头节可溶性粗抗原经Sephadex G-200层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊IgG-HRP结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的Dot-ELISA，并以ELISA作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检测86头份羊脑多头蚴病阳性血清，其敏感性分别为94．18％和93．02％，两种抗原的敏感性无显著差异；检测122头份绦虫蚴病阴性血清，18头份棘球蚴病阳性血清，35头份细颈囊尾蚴病阳性血清，其特异性分别为90．29％和95．43％。两种抗原的特异性差异显著。Dot-ELISA和ELISA两种方法的符合率为100％。层析纯化抗原比粗抗原的特异性有了明显提高，而敏感性没有降低。层析纯化抗原和操作术式都具有良好的重复性，Dot-ELISA和ELISA对比试验结果相近，且具简便、快速及不需要复杂设备等优点，是一种检测羊脑多头蚴病血清抗体的理想方法。     

鼻气管鸟杆菌间接ELISA检测方法的建立及应用

提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法.经方阵滴定确定最佳抗原包被质量浓度为11.85 mg/L,血清样品稀释倍数为1∶20,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶1 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h,血清与二抗最适反应时间为45 min.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm≥0.639判定为阳性,D490 nm≤0.350判定为阴性,介于两者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为11.7%(24/205).     

丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比（P/N）≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。     

犬DEA1.1血型抗体间接Dot-ELISA检测方法建立

为了建立一个更为简单和敏感的方法,以作为不使用试剂红细胞检测犬DEA1.1血型抗体的替代方法,从犬DEA1.1阳性红细胞中分离出细胞膜。将携带DEA1.1阳性抗原的膜置于硝酸纤维素膜上,加入初级抗体和辣根过氧化物酶标记的二级抗体,采用TMB显色试剂盒检测。对照试验采用凝聚胺抗球蛋白试验检测DEA1.1抗体。用DEA1.1阳性和阴性血型抗原检测Dot-ELISA的灵敏度、稳定性和特异性。用158只犬的血清样本检测Dot-ELISA的准确性。结果显示,Dot-ELISA方法比凝聚胺抗球蛋白试验灵敏8倍以上。即使细胞膜反复冻融20次,其抗原稳定性也不受影响,并且可在-20℃时长期稳定保存。在对158只犬血清检测的过程中,该方法展现了与凝聚胺抗球蛋白试验较高的相关性。表明本研究成功建立了犬DEA1.1血型抗体Dot-ELISA检测方法,并且方法稳定、灵敏、无需试剂红细胞,可以作为输血前传统抗体检测的一种有效替代方法。     

螨类化学信息物质及其在鸡皮刺螨防治中的应用现状

鸡皮刺螨是家禽养殖业中危害最严重的体外寄生虫之一。为了控制禽舍中鸡皮刺螨的种群繁殖,目前最常用的方法是化学药物喷洒。但是,随着健康饮食观念的深入人心,人们越来越关注鸡蛋和鸡肉的农药残留问题。因此,需要探索化学农药的替代品,包括疫苗、生物防治、物理防治以及生态友好型的化学信息物质。本文综述了生态友好型的化学信息物质,主要包括聚集信息素、性信息素、报警信息素、利他素以及植物类化合物,在鸡皮刺螨防治方面的作用、应用及研究现状,为防治鸡皮刺螨寻找绿色无污染的方法提供理论基础。     

鸽源禽毛滴虫的体外药敏试验

利用体外培养的禽毛滴虫对8种市面上常用药物进行了体外抗禽毛滴虫药敏试验.在发育繁殖稳定的禽毛滴虫的培养管中,分别加入不同种类及其不同浓度的受试药物,37℃作用2和6 h后,计算各管活虫数;并与不加药物的培养管中的活虫数比较,计算活虫率,以此为指标评价不同药物的杀虫效果.结果表明,二甲硝唑、替硝唑具有显著的杀毛滴虫作用,制霉菌素、环丙沙星、复方磺胺甲（口恶）唑仅有部分抑制作用而不能将滴虫完全杀灭,泰乐菌素、复方甘草、盐酸小檗碱杀虫作用不明显.试验结果为临床选用抗禽毛滴虫药物提供了依据.     

阿维菌素对蛋鸡皮刺螨的驱杀试验

用蛋鸡为试验动物,将伊维菌素预混剂按1mg/kg饲料的浓度混入饲料为对照药物,检测1.25,1.00,0.75mg/kg饲料的阿维菌素预混剂和400mg/kg体重的阿维菌素粉剂(分两次)对鸡皮刺螨的驱杀效果。结果表明:阿维菌素预混剂能驱杀鸡皮刺螨,与伊维菌素预混剂驱杀鸡皮刺螨的效果一致,而阿维菌素粉剂驱杀鸡皮刺螨的效果不如阿维菌素预混剂。阿维菌素预混剂和阿维菌素粉剂都能显著增加料蛋比,提高饲料转化率。     

金莲花及花椒水提物体外抗鸽源禽毛滴虫活性

为研究金莲花、花椒水提物体外抗鸽毛滴虫活性及对鸡胚成纤维细胞(CEF)的毒性,使用不同质量浓度的金莲花、花椒水提物分别与鸽毛滴虫共同孵育一定时间,同时设不同质量浓度的甲硝唑做为对照,分别计算药物对虫体的相对抑制率和半数抑制浓度(IC50);再采用MTT法检测药物对CEF的半数毒性浓度(TC50),计算两种中药水提物的选择指数(SI)及安全范围。结果表明,金莲花、花椒水提物体外作用48h对鸽毛滴虫的IC50分别为0.911、1.98g/L;对CEF的TC50分别为1.915、6.37g/L;选择指数分别为3.22、2.10。与甲硝唑相比,金莲花、花椒水提物质量浓度分别≥16、20g/L时与甲硝唑的抗虫活性接近。以上结果可以看出,一定质量浓度的金莲花、花椒水提物均具有一定的抗鸽毛滴虫活性,且细胞毒性较低,两者选择指数均大于1,为有效药物。     

Azadirachtin-impregnated traps for the control of Dermanyssus gallinae

The effect of neem oil (azadirachtin), originating from the tree Azadirachta indica, was investigated as a potential compound to control the poultry red mite, Dermanyssus gallinae. In vitro tests were performed to determine the most appropriate formulation of neem extracts and concentration of the substance to be used. Cardboard traps containing 20% neem oil were placed at the mites’ aggregation sites, out of reach of the hens, in a floor system for layers containing approximately 2400 birds. Treated traps were replaced every week for 4 weeks. Throughout the study, the parasite population was monitored by collections of mites with untreated plastic traps. A 92% reduction of D. gallinae was recorded.     

鸽毛滴虫病的研究进展

鸽毛滴虫病是由鸽毛滴虫引起的一种侵害消化道上段的原虫病,其特征是在口腔、食道、嗉囊、前胃出现坏死性溃疡,常常造成上消化道和呼吸道阻塞,妨碍进食及正常呼吸进而引起饥饿造成宿主死亡。世界各地均有鸽的病例报道,毛滴虫首先感染上消化道,引起其溃疡,然后从溃疡处进入循环系统,引起肝脏等器官的病变,可以通过直接涂片镜检、人工培养检查等病原的诊断方法对该病进行确认。鸽毛滴虫对硝唑类药物敏感,但极易产生抗药性。目前对鸽毛滴虫分子生物学方面的研究不多,充分利用现代分子生物学技术开展鸽毛滴虫的生理、生化,特别是安全有效的分子疫苗是今后的一个重要研究方向。     

Trichomonas gallinae in budgerigars and columbid birds in Perth, Western Australia

Objective To estimate the prevalence of infection with Trichomonas gallinae and other parasites of the alimentary tract in psittacine and columbid birds in Perth and to determine in vitro the effectiveness of drugs commonly recommended for treating trichomoniasis.
Design and procedures Samples of crop contents were collected from aviary flocks of budgerigars (Melopsittacus undulatus) and other psittacine and columbid birds in both private and commercial collections in Perth. Similar samples from wild Senegal doves (Streptopelia senegalensis) also were collected. Crop contents were examined and cultured for Trichomonas gallinae and in vitro studies were conducted on the susceptibility of isolates to several drugs used commonly. Other parasites also were detected by faecal examination and/or necropsy.
Results T gallinae was recovered from birds in 1 of 13 private collections of budgerigars (2/289 birds in total). Direct wetmount examination of crop fluid identified 36.4% of samples at four commercial bird dealers which were later determined by culture to contain T gallinae . The prevalence of T gallinae infection ranged from 0 to 11.4% in budgerigars. The prevalence of T gallinae infection in wild Senegal doves was 46% and from one flock of racing pigeons was 59%. The in vitro minimum lethal concentrations of metronidazole, dimetridazole and ronidazole ranged from 40 to 96, 30 to 80 and 40 to 92 μg/mL respectively for six isolates of T gallinae . Other alimentary parasites detected during the survey included Spironucleus sp (syn Hexamita sp), coccidia, Ascaridia platycerci and Raillietina sp.
Conclusions Thirteen budgerigar flocks belonging to members of avicultural societies in Perth had a low prevalence of trichomoniasis and other parasitic infections. The dose rate currently recommended for ronidazole may not result in complete protozoacidal activity against T gallinae infection.     

鸡皮刺螨实验室饲养与繁殖技术研究进展

鸡皮刺螨是一种吸血性外寄生虫,会引起鸡消瘦、贫血,并导致产蛋下降,造成巨大经济损失。为给科研提供可靠虫源,并对杀螨药物、疫苗以及其他防控手段进行效果评价,国内外学者进行了鸡皮刺螨实验室的人工饲养与繁殖技术研究。文章综述了国内外鸡皮刺螨实验室饲养与繁殖技术的研究进展,将其总结归纳为使用动物饲养繁殖技术与离体饲养繁殖技术两类,同时指出了各项技术在应用过程中存在的问题,为该技术的进一步完善与发展提供相关参考。     

Antitrichomonal activity of Peganum harmala alkaloid extract against trichomoniasis in pigeon (Columba livia domestica)

1. This study was designed to evaluate the antitrichomonal effects of P. harmala alkaloid extract against T. gallinae, both in vitro and in vivo, as well as comparing it to that of metronidazole, conventional antitrichomonal medication and harmine and harmaline, the two alkaloids present in P. harmala.

2. T. gallinae were collected by the wet mount method from infected free-living pigeons. The in vitro assay was performed using multi-well plates containing test compounds in final concentrations of 5, 10, 15, 20, 30, 50 or 100 μg/ml. The in vivo assay was done on 60 experimentally infected pigeons dosed with metronidazole at 50 mg/kg body weight (BW) or alkaloids at 25 mg/kg BW.

3. The 24 h minimum inhibitory concentration (MIC) of alkaloid extract was 15 µg/ml while that of metronidazole was 50 µg/ml. Harmine and harmaline revealed 24 h MIC of 30 and 100 µg/ml, respectively. Treatment of infected pigeons with alkaloids led to a full recovery after 3 d but with metronidazole total eradication of trophozoites was not achieved.

4. In conclusion, data of the present study suggested P. harmala is a potent natural anti-trichomonal agent, effective against T. gallinae.     

鸽毛滴虫外泌体的分离鉴定及蛋白质谱分析

旨在研究鸽毛滴虫是否分泌外泌体及虫源外泌体的蛋白组成和功能,为探索外泌体在鸽毛滴虫寄生过程中的作用奠定基础。采集鸽毛滴虫感染个体口腔及咽部病灶处样本,进行分离培养及纯化,使用显微镜鉴定虫体形态,提取DNA并比对其序列,确定培养物是否为鸽毛滴虫虫株;通过对培养液上清进行超速离心,透射电子显微镜、Western blot技术和纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）鉴定培养液上清中是否含有虫源外泌体;最后通过Label-free技术分析虫源外泌体的蛋白质谱表达。结果显示,虫体具有明显的毛滴虫形态及特征,与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因比对率达98%。从虫体培养液中提取的囊泡经透射电子显微镜观察具有明显的茶托样结构;NTA结果显示,粒径集中于125.1 nm,峰值粒径为132.3 nm,占比99.3%;CD63和TSG101等外泌体标记蛋白的条带明显,表明提取物为外泌体。质谱结果显示,烯醇酶、3-磷酸甘油醛-脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶和延伸因子为表达量较高的蛋白质。GO功能注释显示外泌体蛋白富集到细胞内和胞浆等细胞组分,发挥GTP连接和GTP酶活性功能,参与小GTPase介导的信号转导与糖酵解等过程。KEGG通路富集表明,虫源外泌体蛋白主要富集于代谢途径、糖酵解/糖异生、抗生素的生物合成和次级代谢产物的生物合成等通路。本研究发现鸽毛滴虫可以分泌外泌体,并对虫源外泌体进行蛋白质谱分析,提示虫源外泌体中的蛋白质在寄生虫的能量代谢、信号转导及生物合成等过程中发挥重要作用。