山东省侵染西瓜的西瓜花叶病毒（WMV－2）和黄瓜花叶病毒（CMV）的研究

从采自平度、临沂两地的西瓜病叶中得到两个病毒分离物Ｗ—ＰＤ和Ｗ—ＬＹ。Ｗ—ＰＤ可侵染３科８种植物，可由桃蚜以非持久性方式传播。钝化温度６５℃，稀释限点１０￣（－４）～１０￣（－５），体外存活期２０～２５ｄ。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收，最大吸收峰为２６０ｎｍ，最小吸收峰为２４６ｎｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２４。病毒外壳蛋白分子量为３３．３４ＫＤ。Ｗ—ＰＤ的粒子线状，长度为６００～７５０ｎｍ。在病组织超薄切片中可以看到风轮状和环状内含体。Ｗ—ＰＤ与ＷＭＶ—２的抗血清有明显的沉淀反应。以上结果表明，Ｗ—ＰＤ为ＷＭＶ—２的一个分离物。Ｗ—ＬＹ可侵染５科１３种植物。钝化温度７０℃，稀释限点１０￣（－３）～１０￣（－４），体外存活期３～５ｄ，可由桃蚜以非持久方式传播，与ＣＭＶ的抗血清有明显的沉淀反应。Ｗ—ＬＹ应为ＣＭＶ的一个分离物。ＷＭＶ—２是我省西瓜病毒病的主要毒原，其分出率为７５％，ＣＭＶ的分出率为１６．３５％。     

山东省侵染四瓜的西瓜花叶病毒（WMV—2）和黄瓜花叶病毒（CM…

从采自平度、临沂两地的西瓜病叶中得到两个病毒分离物Ｗ－ＰＤ和Ｗ－ＬＹ。Ｗ－ＰＤ可侵染３料８种植物，可由桃蚜以非持久性方式传播。钝化温度６５℃，稀释限点１０＾－４－１０＾－５，体外存活期２０－２５ｄ。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收，最大吸收峰为２６０ｎｍ，最小吸收峰２４６ｎｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２４。病毒外壳蛋白分子量为３３．３４ＫＤ。Ｗ－ＰＤ的粒子线状，长度为６００－７５０ｎｍ。在病组织超薄切片     

引起二月兰花叶病的芜菁花叶病毒研究

在表现花叶、植株矮化、茎叶坏死和畸形的十字花科观赏植物二月兰（Ｏｒｙｃｈｏｐｈｒａｇｍｕｓｖｉｏ－ｌａｃｅｕｓ）上分离到一种线状病毒,其病毒粒子分布范围为７８０～８００ｎｍ．通过寄主反应测定、病毒提纯和形态观察、血清学反应测定,确定该病毒为芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）．病毒分离物ＡＨ１回接二月兰无病毒苗,引起黄斑、系统花叶、系统坏死和畸形,在供试十字花科植物上均产生系统侵染,并在洋酸桨等茄科供试寄主上引起系统症状．ＡＨ１与来自十字花科甘蓝型油菜上的一个ＴｕＭＶ有紧密的血清学关系,但在寄主反应上与之有一定差异．对自然发病的二月兰植株和接种ＡＨ１分离物的系统寄主用ＴｕＭＶ抗血清进行免疫电镜观察,均检测到线状病毒粒子,用ＣＭＶ抗血清、ＴＭＶ抗血清进行检测,均没有发现相关病毒．作者认为：ＴｕＭＶ即是引起二月兰花叶病的病原．这是ＴｕＭＶ侵染该属植物的首次报道．     

侵染姜的烟草花叶病毒的鉴定

从莱芜市莱城区大田表现严重花叶的姜上分离到一种病毒,接种到１３ 科４３ 种鉴别寄主上,能侵染５ 科２５ 种植物。该病毒分离物的钝化温度为９５ ～９８ ℃,稀释限点为１０ － ７ ～１０ － ８ ,体外存活期为１２８ｄ 以上。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收,最大吸收峰为２５８ｎｍ ,最小吸收峰在２４３ｎｍ , Ａ２６０／ Ａ２８０ ＝ １ ．３２ 。病毒外壳蛋白分子量为１７ ．３ Ｋ Ｄ,杆状粒体长度为３００ｎｍ ,该分离物与烟草花叶病毒的抗血清有明显的阳性反应。根据这些特性,该病毒分离物属于烟草花叶病毒属的烟草花叶病毒。     

侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒（CMV）研究

从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物Ｃ－９３１。汁液摩擦接种６科２１种植物，Ｃ－９３１可侵染其中的６科１９种；体外抗性测定表明Ｃ－９３１的稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２），致死温度（ＴＩＰ）为５５－６０℃，２５℃体外存活期（ＬＩＶ）为４ｄ；提纯病毒粒体球形，平均直径２８ｎｍ；在琼脂双扩散反应中Ｃ－９３１能与ＣＭＶ抗血清呈阳性反应；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其衣壳蛋白亚基分子量为２９ｋＤ；用ＣＦ－１１纤维素柱提取受侵植物组织中ｄｓＲＮＡ，电泳鉴定表明共有５个核酸组分，长度（ｋｂ）分别为３．３，３．０，２．２，０．９和０．３５．根据上述性状，Ｃ９３１被鉴定为黄瓜花叶病毒，且该分离物含卫星ＲＮＡ。     

侵染西瓜的烟草花叶病毒的鉴定

从莘县一株表现蕨叶、花叶的西瓜上得到了分离物Ｗ－ＳＸ。Ｗ－ＳＸ经人工接种可侵染茄科、葫芦科、苋科、藜科的１７种（或品种）植物。钝化温度为９２℃，稀释限点１０－７～１０－８。病毒汁液在室温下保存５０ｄ仍有侵染活性。Ｗ－ＳＸ不能由蚜虫传播。病毒粒子杆状，长３００ｕｍ。提纯病毒的最大吸收在２６０ｕｍ，最小吸收在２４６ｕｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２９９。在琼脂中与烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的抗血清产生明显的沉淀线。这些结果表明Ｗ－ＳＸ应为ＴＭＶ的一个分离物。ＴＭＶ在所有西瓜病样分离物中占８．６５％。这是ＴＭＶ侵染西瓜的首次报道，其对西瓜的为害性有待于进一步研究。     

侵染丝瓜的黄瓜花叶病毒研究

１９９３年６月从温州市郊区丝瓜病株上获得一病毒分离物Ｌ－９３，人工摩擦接种５科２２种植物，Ｌ－９３能侵染５科１８种植物。Ｌ－９３在多种葫芦科植物上具有很强的侵染力。提纯病毒粒体为球形，直径约２８ｎｍ。在琼脂双扩散试验中，Ｌ－９３与ＣＭＶ抗血清具有密切的血清学关系。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其衣壳蛋白亚基分子质量为２９０００ｕ，分析植物组织中ｄｓＲＮＡ，发现有４条ｄｓＲＮＡ条带，长度分别为含３．３，３．０，２．２和０．９×１０３ｂ。根据以上结果，Ｌ－９３被鉴定为黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）。种子传毒试验表明，ＣＭＶ不能通过丝瓜种子传毒。在交互保护试验中，弱毒株系ＣＭＶＰｌ对Ｌ－９３侵染具有很好的保护效果，保护率达８９％，保护接种植株中，Ｌ－９３浓度明显低于未保护植株。     

一串红花叶病及其病原研究

１９８９─１９９２年间对杭州等地一串红（Ｓａｌｖｉａｓｐｌｅｎｄｅｎｓ）花叶病的发生及其病原进行了系统研究，从病株上分离得到的１７个病毒分离物，经生物学和血清学反应测定均符合黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的特点。病毒分离物Ｍ－２２不能经由桃蚜传播使黄苗榆等供试寄主发病。用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾盐缓冲液对Ｍ－２２进行提纯，提纯病毒经醋酸铀负染，测定其粒子大小为３０．２ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定Ｍ－２２的外壳蛋白分子量约为２８ｋＤ，经琼脂双扩散测定，Ｍ－２２与几个已知ＣＭＶ抗血清均有强阳性反应，Ｍ－２２与一个番茄不孕病毒（ＴＡＶ）抗血清有阳性反应，但其抗血清与供试ＴＡＶ抗原无阳性反应。ＥＬＩｓＡ反应测定结果表明，Ｍ－２２与一个来自于十字花科大白菜上的ＣＭＶ分离物和一个来自于前科烟草上的ＣＭＶ分离物，在血清学关系上有明显差异。根据实验结果，作者认为目前在杭州等地侵染一串红的病原病毒主要是ＣＭＶ，侵染一串红的ＣＭＶ分离物Ｍ－２２可能是一个独立的血清型．     

引起二月兰花叶病的芜菁花叶病毒研究

在表现花叶,植株矮化,茎叶坏死和畸形的十字花科观赏植物二月兰９Ｏｒｙｃｈｏｐｈｒａｇｍｕｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓ）上分离到一种线状病毒,其病毒粒子分布范围灯７８０－８００ｎｍ。通过寄主反应测定,病毒提纯和形态观察,血清学反应测定,确定该病毒为芜菁花叶病毒。病毒分离的ＡＨ１回接二月兰无病毒苗,引起黄斑,系统花叶,系统坏死和畸形,在供试十字花科植物上均产生系统侵染,并在洋酸桨等茄科供试寄主上引起系统症状     

侵染莴苣的莴苣花叶病毒（LMV）研究

１９９３年４月从杭州市郊菜田中表现花叶、矮化的莴苣植株上，分离到病毒分离物Ｌ－６．汁液摩擦接种６科２４种植物，可侵染其中的４科８种植物．Ｌ－６的钝化温度为５５～６０℃，稀释限点为１０－２～１０－３，体外保毒期２～３ｄ．可由桃蚜以非持久性方式传播．病毒粒体线形，长约７５０ｎｍ，病叶组织中有风轮状内含体．血清学试验证明，Ｌ－６与莴苣花叶病毒（ＬＭＶ）有密切的血清关系．因此，Ｌ－６分离物被鉴定为莴苣花叶病毒．田间测定表明，ＬＭＶ在莴苣上发生较为普遍     

多抗PVY、TMV和CMV转基因烟草的培育

 【目的】利用RNA介导抗性培育抗多种植物病毒的转基因烟草。【方法】分别以马铃薯Y病毒（PVY）、烟草花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）全长衣壳蛋白（CP）基因为模板,通过设计PCR引物和亚克隆获得PVY CP 3′端长度100 bp、TMV CP 3′端长度100 bp和CMV CP 3′端长度200 bp的cDNA片段并拼接成嵌合基因,并以此为模板构建反向重复结构嵌合基因的植物表达载体pRHPTC。将pRHPTC通过冻融法导入农杆菌LBA4404,采用叶盘法转化烟草NC89,然后测定转基因烟草对3种病毒的抗性。【结果】经卡那霉素筛选和PCR检测,共获得276株转基因烟草。Southern和Northern blot分析表明,外源基因以不同拷贝数整合于烟草基因组中;不同转基因植株中病毒RNA的积累量存在显著差异。抗病性检测显示：23%左右的转基因植株表现出对3种病毒侵染的抗性。对转基因植株扩繁后代和T1代的抗性分析表明：多病毒抗性表现稳定。【结论】利用RNA介导的抗病毒基因工程可获得同时抗多种病毒的转基因烟草,其抗病性在T0代扩繁植株和T1代植株中得到稳定遗传。     

番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究

在ＴＭＶ外壳蛋白（ＣＰ）基因的５′和３′端分别合成寡聚核苷酸引物Ｐ１和Ｐ２，并分别引入ＣｌａＩ和ＢａｍＨＩ位点，采用ＰＣＲ技术扩增ＴＭＶＣＰ基因，用ＣｌａＩＢａｍＨＩ消化后重组到ｐＢｌｕｅ ｓｃｒｉｐｔＫＳ＋中，并将该基因与ＣＭＶＣＰ基因重组在同一个表达载体ｐＥ３上获得双价ＣＰ基因表达载体ｐＥＴＣ２，转化番茄，获得再生植株。通过点杂交、ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，证实２、１２和１３号为转ＴＭＶ和ＣＭＶＣＰ基因的工程植株。工程植株在温室中表现正常，比对照植株表现出明显的抗性。     

枣树花叶病毒病的分子检测

[目的]建立枣树花叶病毒病的分子检测方法,追踪检测与分析枣树花叶病毒病田间侵染动态,研究病害防治的关键时间节点,为新疆枣树种植区枣树花叶病毒病的流行监测和早期防治,以及枣树花叶病毒病的高效防治奠定基础.[方法]在前期准确获取病毒全基因组序列的基础上,以病毒基因组序列RNA5为靶标设计序列特异性引物,通过RT-PCR技术...     

地黄花叶病毒的分子检测

设计了能同时检测Re MV、TMV和ToMV的简并引物,利用RT-PCR的方法对我国不同地区的地黄病毒样品进行了检测。共克隆了25个病毒样品的外壳蛋白(CP)基因,序列测定结果表明,24个病毒样品均是Re MV,其相近病毒TMV未检测到,ToMV仅在一个野生地黄样品上检出,说明Re MV在我国栽培地黄和野生地黄上普遍存在。     

黄瓜花叶病毒研究进展

综述了黄瓜花叶病毒(CMV)的生物学特性、基因组、病害防控等方面的研究进展,并对国内外当前研究中存在的问题作了相关探讨。     

侵染西瓜的西瓜花叶病毒生物学鉴定

用生物学、血清学及电镜等技术鉴定了侵染西瓜花叶病毒宿州分离物的基本属性。研究结果证明 ,该分离物侵染西瓜、南瓜等葫芦科植物并表现花叶 ;在苋色藜、千日红表现局部褪绿斑 ;桃蚜可传毒 ,该分离物汁液的致死温度为 5 5～ 5 8℃ ,稀释限点为10 - 3～ 10 - 4,体外保毒期为 6～ 10d。病毒粒体为线状 ( 73 0nm× 16nm)。该分离物的提纯物紫外光最高吸收峰在 2 60nm处 ,最小在2 40nm处。A2 6 0 /A2 80 =1.3 2。其病毒的RNA含量约为 8%。ELISA测定该分离物与西瓜花叶病毒 2号 (WMV -2 )的抗血清学反应为阳性。初步确定该分离物隶属WMV -2的一个株系。     

烟草花叶病毒诱发抗性的研究

用烟草花叶病毒（ＴＭＶ）接种过敏性寄主枯斑三生烟或心叶烟的半叶或下部两叶，可诱导出未接种的另半叶或上部叶对ＴＭＶ再次感染的抗性，诱发接种后７ｄ用ＴＭＶ进行攻击接种，所产生的枯斑直径明显小于对照。诱发抗性最早在诱发接种后３～４ｄ被检测到，第７ｄ左右达到高峰，温度对诱发抗性的产生有很大影响。诱发接种叶上部的未接种叶因叶位不同，其抗性强弱也不同。经ＴＭＶ诱发后的心叶烟可表现出对ＴＭＶ和ＣＭＶ两者的抗性，在攻击接种ＣＭＶ后，潜育期比对照延长１～２ｄ．     

小麦黄花叶病毒的血清学检测

利用间接ELISA对感染WYMV的小麦病叶检测,通过比较分析影响ELISA测定结果的包被缓冲液、抗血清及酶标抗体的浓度和种类,确立了较为稳定的反应体系.利用此ELISA检测体系并结合RT-PCR方法对从四川采集的田间小麦中WYMV进行检测,确定了有较高的检测灵敏度的检测系统,为田间大量小麦病样的检测提供有效、方便的方法.     

小西葫芦黄花叶病毒研究进展

小西葫芦黄花叶病毒病是瓜类作物的一种严重病害。本文对小西葫芦黄花叶病毒的分类、结构特点、生物学特性及其病毒载体的研究现状进行综述,以期为其防治提供参考。