山羊胚胎分割及同卵双生试验

选择山羊晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡,用简化分割法二分。将19对裸半胚移植于18只受体羊,结果有12只妊娠,其中两只胚胎消失,两只流产,其余8只足月分娩,共产半胚羔11只。晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡各组的半胚发育为羔羊的发育率分别为12.5％(1/8)、20％(2/10)、25％(3/12)和62.5％(5/8)。前三组均未获得同卵双生羔羊。在第四组,将4对裸半胚移植于4只受体,有3只妊娠,足月分娩半胚羔5只,其中两对为同卵双生。本研究证明,对称分割山羊孵出增大胚泡,不仅其半胚在体内仍可继续发育形成正常胎儿,而且不装透明带移植其裸半胚,仍能获得较高的同卵双生率。山羊孵出增大胚泡更适宜用简化分割法分割。     

绵羊冷冻胚胎移植试验

绵羊冷冻胚胎有枚浆冻前Ａ级胚胎解冻后,胚胎等级有所下降,可用胚率为７７．９％,Ａ、Ｂ级胚移植妊娠率分别为３３．３％（１８／５４）和１６．７％（１／６）,差异不显著（Ｐ〉０．０５）;桑椹胚、早期囊胚、中期囊胚、扩张囊胚移植妊娠率分别为２０．８％（５／２５）、４２．９％（６／１４）、３５．７％（５／１４）５ ３７．５％（３／８）,囊胚期胚胎移植妊娠率较高,但差异不显著（Ｐ〉０．０５）     

奶牛胚胎分割与半胚裸露冷冻保存试验

本试验研究了①Ａ、Ｂ、Ｃ三个质量等级胚胎的分割效果；②五种不同冷冻方法冷冻裸露半胚的存活情况；③冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时的裸露半胚存活率。结果①Ａ、Ｂ、Ｃ级胚胎的分割成功率分别为９５．８％（９２／９６）、７且．４％（７０／９８）、３０％（６／２０），三者间差异极显著（Ｐ＜０．０１）；②半胚冷冻前以２０％ＦＣＳ－ＰＢＳ液培养３．０小时后，以五种不同冷冻方法冷冻，均未获得存活半胚；③半胚冷冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时后，以添加１０％而聚糖的１０％甘油＋０．１Ｍ蔗糖／ＰＢＳ液冷冻，分别获得了０％（０／４５）、６８．８％（１１／１６）、７５．０％（９／１２）的存活率。结果表明，胚胎质量是影响胚胎分割成功率的关键因素，半胚冷冻前的培养时间是影响裸露半胚存活的重要因素。     

不同超数排卵方法所获羔山羊卵母细胞体外成熟率及体外受精率的比较

本研究观察了不同超排处理方法对羔山羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响，并将体外受精胚胎进行了移植，以便探讨利用羔山羊卵母细胞生产体外受精胚胎的技术途径。对２～４月龄羔山羊用ＦＳＨ、ＦＳＨ＋ＬＨ（静脉注射）和ＦＳＨ＋ＬＨ（肌肉注射）三种方法进行超排处理，平均分别回收１６．０、２０．３和１５．０枚卵母细胞。将这些卵母细胞进行２０～２４ｈ的成熟培养后，其成熟率分别为４５．５％，４４．４％和７６．５％。成熟卵母细胞经体外受精，体外发育培养后其２～４细胞胚胎的发生率分别为５．６％ａ、６．７％和３１．７％ｂ（ｂ，ｖｓ，ａ，Ｐ＜０．０５）。将９枚２～４细胞期胚胎移植给６只受体母羊，结果有２只妊娠并产羔２只。     

移植奶牛胚胎冷冻后分割成的二分胚生产同卵双生犊牛的实验

对解冻后品质优良的Ａ级囊胚进行分割，并将二分胚移植生产同卵双生犊牛。结果表明：９枚Ａ级囊胚切割成１８枚半胚，胚胎分割成功率１００％。单胚移植受体６头。妊娠２头，妊娠率３３．３％；双半胚移植６头，妊娠２头，妊娠率３３．３％。     

影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素

试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。     

移植奶牛胚胎冷冻解冻后分割成的 二分胚生产同卵双生犊牛的实验

对解冻后品质优良的A级囊胚进行分割,并将二分胚移植生产同卵双生犊牛。结果表明,9枚A级囊胚切割成18枚半胚,胚胎分割成功率100%（9/9）。单胚移植受体6头,妊娠2头,妊娠率33.3%;双半胚移植6头,妊娠2头,妊娠率33.3%。     

兔核移植胚胎的克隆研究

本研究改进了兔受体卵母细胞的去核程序及供体卵裂球的处理方法，并对核移植胚的体外克隆、继代克隆及克隆胚的体内发育进行了试验。结果表明：卵龄对受体卵母细胞的去核具有显著的影响，卵龄为１５～１８ｈ的去核率为１００％（４５／４５），显著高于１３～１４ｈ的４６．６％（７／１５），Ｐ＜０．０１。ＤＮＡ合成抑制剂Ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ处理１６－细胞期卵裂球后，重组胚的囊胚发育率５４％（２０／３７）高于未处理组的４５％（１４／３１），Ｐ＜０．０５。从２枚１６－细胞供体胚分别获得来自一个供体胚的９枚和７枚核移植克隆囊胚，囊胚发育率为５１．６（１６／３１）。然而第一次继代核移植胚的囊胚发育率仅为１１．５％（６／５２）。１６－及３２－细胞期卵裂球的重组胚可发育至产仔，共获２窝８只仔兔。其中１只、２只、２只和３只仔兔分别来自４个供体胚。     

应用胚胎移植技术快速扩繁波尔山羊试验

以波尔山羊为供体．地方杂种奶山羊为受体，利用胚胎移植技术对波尔山羊进行快速扩繁试验。结果表明：13只供体羊共获可用胚胎186枚，每只羊平均14．3枚；对70只受体羊共移植胚胎146枚，有35只受体产羔，移植产羔率为50％，共获活羔53只，移植胚胎数／产活羔数为2．7：1。     

转基因兔胚胎玻璃化冷冻保存的研究

在２５℃条件下,将兔体外受精精子载体转基因兔桑椹胚置于含有４０％乙二醇、１８％Ｆｉｃｏｌ、０．３ｍｏｌ蔗糖的ｍＰＢＳ溶液（ＥＦＳ４０）中平衡２分钟,然后直接投入液氮,成功地进行了玻璃化冷冻保存。解冻后桑椹胚发育至囊胚和孵化囊胚的比例分别为６５．８１％和３９．２４％,与未经冷冻的鲜胚发育比例（７１．０５％和４３．４２％）相比,没有明显的差异。７８枚经玻璃化冷冻和解冻的桑椹胚移植给５只受体,其中２只妊娠,共产下８只活仔兔。     

贵州省波尔山羊胚胎移植试验报告

贵州省畜禽品种改良站在德江县、沿河县、遵义县等地开展了波尔山羊胚胎移植工作。通过对351只受体羊进行胚胎移植,其中,鲜胚移植122只,冻胚移植229只。60d后妊娠检查,结果共妊娠208只。其中,鲜胚移植妊娠83只,移植妊娠率达68％;冻胚移植妊娠125只,移植妊娠率达55％。共产羔234只。其中,鲜胚移植产羔104只,产羔率达85％;冻胚移植产羔130只,产羔率达57％,取得了满意的效果。     

小鼠桑椹胚简易玻璃化冷冻技术再探讨

本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后，在室温（２５℃）下利用不同浓度的ＥＦＳ玻璃化溶液，对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在１０％ＥＧ溶液中预先处理５分钟，再移入事先配置好含有ＥＦＳ３０的０．２５ｍｌ塑料细管中１分钟平衡后直接投入液氮中冷冻，解冻后获得的发育率最高（９４％）。冻胚移植后妊娠率和产仔率分别为５６％（９／１６）及４２％（４９／１１６）。与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）     

猪早期胚胎体内、外发育规律研究

系统地掌握猪早期胚胎体内外发育规律是进行猪胚胎冷冻、胚胎分割、鲜胚移值、长途运输引种以及基因转移等生物技术研究和应用的基础。本研究包括２个实验，实验１，利用８９头超排母猪和１９头自然发情母猪，于配种后第２、３、４、５、６、７、８、９和１０天手术采得胚胎１６１２枚，系统地观察猪早期胚胎体内发育规律，即：２日龄胚胎中原核胚占７７．３９％（３９７／５１３），３日龄胚胎中４和６细胞胚占７９．０５％（８３／１０５），４日龄胚胎中４～８细胞占４０％（３５／７６），５日龄胚胎多为桑椹和囊胚８３．１２％（６４／７７），６日龄胚多为膨胀囊胚４２．０９％（１８１／４３０）和孵化囊胚３４．１９％（１４７／４３０），７和８、９、１０日龄胚发育到孵化囊胚分别为７６．３４／ｏｏ（７１／９３）和１００％（７７／７７），而自然发情的５日龄胚胎中桑椹和囊胚仅占３２．５％（１３／４０），６日龄胚胎中膨胀囊胚仅占１１．１１％（１７／１５３），孵化胚仅占１９．６１％（３０／１５３）。各发育阶段的胚胎比例均明显低于５、６日龄超排供体（Ｐ＜０．０５）。实地２，将１３８枚囊胚和膨胀囊胚，分别体外培养２４和１２小时，囊胚发育阶段的胚胎５０％（４８／９６）?     

奶牛裸露冷冻半胚移植试验

对以１０％甘油＋１０％葡聚糖（Ｔ－５００）＋０．１ｍｏｌ／Ｌ蔗糖／２０％ＦＣＳ－ＰＢＳ液裸露冷冻的奶牛半胚进行了移植试验。移植妊娠率为３９．４％（２８／７１），并获得移植犊牛。试验结果表明，移植单枚或１对半胚的妊娠率无显著差异；在受体牛发情后８～１２ｈ肌注ＬＲＨ－Ａ３４００μｇ，获得５０％的移植妊娠率，极显著地高于对照组（３８．５％～４０％）。此外，移植妊娠率具有随着胚胎发育阶段升高而增高的趋势。     

扩张囊胚玻璃化超低温冷冻保存及移植技术的研究

本试验探讨了对鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存后，提高发育率的最佳条件。玻璃化溶液是用ＰＢＳ液稀释成的３０％聚蔗糖＋０．５Ｍ蔗糖混合法，再将乙二醇（ＥＧ）调制成２０、３０及４０％（ｖ／ｖ）的溶液，即ＥＦＳ２０、３０及４０。玻璃化冷冻保存是１０、２０及２５℃温度下，将扩张囊胚直接移入ＥＰＳ溶液后投入液氮中一步法令冻保存，其中２５℃下保存后的发育率最高（８７％）。继之将扩张囊胚用１０％ＥＧ溶液经５分钟处理后，再移入ＥＦＳ４０中二步法冷冻保存，发育率高达９４％。利用二步法冷冻保存的扩张囊胚移植后，妊娠受体的产仔率为６６％（１６８／２５５），同时照组产仔率６１％（８０／１３２）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

布尔山羊超数排卵胚胎移植试验

本试验采用置入炔诺酮阴道栓 FSH 氯前列烯醇同期发情、超数排卵处理方法，对8只布尔山羊(供体羊)、90只洪洞奶山羊(受体羊)进行了同期发情和超排数排卵胚胎移植试验。其结果如下：(1)8只供体羊回收胚胎数量、可用胚胎数量、羊均回收胚胎数量、羊均可用胚胎数量、可用胚比率分别为182枚、172枚、22．8枚、21．5枚、94．5％；(2)90只受体羊共有81只羊达到同期发情效果，发情同期率为90．0％；(3)150枚可用胚胎共移植洪洞奶山羊73只，妊娠51只，产羔80只，妊娠率69．9％，胚胎成羔率53．5％。     

猪微注射基因导入系统影响受体受孕率及产仔率的几个因素

在应用显微注射、胚胎移植系统技术，进行猪ＯＭＴ／ＰＧＨ基因导入的研究中，对移入受体的胚数，ＰＭＳＧ处理受体以及不同的移植方法（自体移植与异体移植）等影响受体受孕率及产仔率的因素，进行了试验分析，结果表明：（１）移入受体的注射胚数分别为１０—１９枚、２０—２９枚、３０枚以上时，其受孕率为４５．５％、６４．７％和７１．４％，产仔率为８．０％、１９．６％和１４．５％，以移入２０—２９枚效率最高；（２）用ＰＭＳＧ对受体母猪做同期发情处理，其受孕率和产仔率比选择自然发情的受体分别下降２５％和８．５％；（３）采用自体移植的方式，在移入胚数基本相同的情况下（１５枚左右），比异体移植的受孕率和产仔率分别提高１４．３％和６．４％。     

山羊胚胎简易冷冻试验

用RPE冷冻器冷冻20枚山羊桑椹胚和囊胚。冷冻液为1M甘油杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)。胚胎装于0.25ml塑料细管内,0℃时置入冷冻器。以1℃/分降温,-6.5～-7℃诱发结晶,再以0.5℃/分(0.3～0.8℃/分)降温至-30℃,然后投入液氮保存5～12天。35℃水浴解冻。20枚胚胎冻后形态正常率为65％(13/20)。将13枝形态基本正常的胚胎移植给5只受体羊,结果4只受体羊妊娠,产羔7只,冻胚存活率为35％(7/20)。除1只冻胚羔产下后90分钟死亡外,另6只冻胚羔生长发育正常。     

道塞特、萨福克、特克塞尔三品种绵羊规模化胚胎移植应用研究报告

2003年5月和2004年6月分两批从澳大利亚引进三个绵羊品种：道塞特（Dorset）、萨福克（Suffork）和特克塞尔（Texel）共389只，选择其中116只作为供体母羊进行胚胎移植，使甩CIDR＋FSH递减法对供体超数排卵处理，其中111只供体发情，配种、采胚（反应率95．6％，111／116），平均采胚10．04枚（1114／111），可用胚平均6．23枚（691／111），可用胚率62.03％（691／1114）。将691枚2～16细胞可用胚移植给618只受体小尾寒羊，受体采用PG两次处理法同期处理。妊娠485只，妊娠率78．48％，共产羔537只，产羔率110．72％。     

山羊冻胚分割试验

将冷冻-解冻后的琼脂包被孵出胚泡分两组,分别置于12％蔗糖液(A)和磷酸缓冲液(B)中进行2分切割。在体外培养12小时后,A、B两组的半胚发育率分别为68.9％(31/45)和58.3％(35/60)。A组的冻胚分割效果显著好于B组(P<0.05)。将早期囊胚、扩张囊胚、孵出胚泡和琼脂包被孵出胚泡冷冻-解冻后,在12％蔗糖液中分割为2(A、B、C、D组)。在体外培养12～24小时后,A、B、C、D4组的半胚发育率分别为47％(14/30)、 50％(15/30)、27％(8/30)和70％(21/30)。D组的冻胚分割效果显著好于A、B两组(P<0.05)极显著地好于C组(P<0.01)。将5枚在冷冻前用琼脂包被的孵出胚泡在12％蔗糖液中分割为二后移植于5只受体,结果有4只妊娠,共产半胚羔6只,其中2对为同卵双生。本研究证明,在蔗糖液中分割冻胚可提高半胚体外成活率;分割从琼脂释放出的解冻孵出胚泡可提高山羊冻胚分割的效果。