鸭IGF-IR基因部分序列克隆、鉴定及在胚胎期胸肌组织中的差异表达分析

为了克隆分析鸭IGF-IR基因部分的cDNA序列,并研究该基因的组织表达规律。通过同源性比对,克隆了IGF-IR基因cDNA部分片段,并运用生物信息学方法分析了不同物种序列进化关系,运用荧光绝对定量PCR技术检测了IGF-IR mRNA在肉用型品种高邮鸭和蛋用型品种金定鸭胚胎期不同发育时期胸肌中的表达。序列分析结果表明：克隆得到的鸭IGF-IR基因cDNA270 bp片段长度,其核苷酸序列与鸡、人、小鼠、大鼠、猪、牛的IGF-IR基因相应核苷酸序列的同源性分别为95%、79%、78%、77%、78%、76%;荧光绝对定量结果表明：IGF-IR基因在胸肌中呈“波浪形”表达,在21胚龄表达量最高,与17、25、27胚龄和7日龄差异显著(P<0.05);IGF-IR基因在品种间表达量除21胚龄时差异显著外(P<0.05),其余各胚龄差异均不显著(P>0.05),表明IGF-IR mRNA的表达在所研究品种胚胎期的胸肌中相对稳定。     

藏鸡GEM基因克隆及其时空表达特性分析

旨在获得藏鸡GEM基因序列,阐明其组织表达和时序表达谱,同时分析基因表达与肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)沉积的关系,为进一步研究藏鸡肉质和脂肪沉积奠定基础。选取1,81,119,154,210日龄健康藏鸡为试验材料,屠宰后分别采集心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腿肌和皮下脂肪组织,提取组织总RNA,利用RT-PCR技术克隆藏鸡GEM基因序列,利用实时荧光定量PCR技术检测该基因在藏鸡不同组织以及不同发育时期胸肌和腿肌的表达情况。结果表明,克隆获得藏鸡GEM基因序列940 bp(Gen Bank登录号:KY747399),其中,CDS为894 bp,5'UTR 24 bp和3'UTR22 bp,编码297个氨基酸,与原鸡、绿头鸭、人和小鼠GEM氨基酸序列相似性较高(83.50%~98.32%);组织表达结果显示,GEM在藏鸡肺组织中的表达水平最高,极显著高于其他组织(P0.01),在脂肪组织和脾组织中也存在较高水平的表达;时序表达结果显示,GEM基因在不同发育阶段藏鸡胸肌和腿肌中的表达模式存在差异,在胸肌中的表达水平随日龄的增加呈下降趋势,而在腿肌中随日龄的增加呈先上升后下降的表达趋势,且在119日龄达到峰值;GEM基因表达水平与不同发育阶段藏鸡胸肌和腿肌中IMF含量呈不同程度的相关,存在性别差异,且在公藏鸡腿肌中达到显著水平(r=0.414,P0.05)。结果表明,GEM基因可能在藏鸡脂质代谢中起重要调控作用。     

高邮鸭MyoD1 SNP位点变异与胸肌发育性状的关联分析

为筛选重要地方鸭品种——高邮鸭早期肌肉生长标记,利用连接酶检测反应,以高邮鸭群体为研究对象,筛选肌分化因子基因Myo D1第一内含子区域的SNP位点,以期获得高邮鸭早期生长分子标记。筛选获得Myo D1基因第一内含子区的位点突变T→A,检测到AA,TA和TT 3种基因型,其中AA和TA是优势基因型,处于Hardy-Weinberg平衡状态。关联分析结果表明TA基因型群体在49日龄的体重、胸肌重、胸肌横截面积、胸肌纤维直径以及胸肌纤维密度均显著高于AA、TT基因型群体(P0.05),TT和AA基因型间差异不显著(P0.05)。相较于传统育种,分子标记辅助育种具有快速、精准的优点。结果预示TA基因型可作为高邮鸭胸肌早期选择的分子标记。     

两个棉花品种纤维发育关键酶活性变化特征及其与纤维比强度的关系

选择棉纤维比强度差异明显的2个品种,研究了棉纤维发育关键酶(蔗糖合成酶和β-1,3-葡聚糖酶)活性的变化特征及其与纤维比强度的关系。结果表明,棉纤维发育过程中蔗糖合酶、β-1,3-葡聚糖酶活性变化特征在生化和mRNA转录水平上均存在明显的差异,影响纤维素的沉积特性及纤维比强度。高强纤维品种(科棉1号,平均比强度为35 cN·tex-1)的蔗糖合酶和β-1,3-葡聚糖酶活性及其基因表达量和维持高表达时间均高于低强纤维品种(德夏棉1号,平均比强度为26 cN·tex-1)。其中,高强纤维品种蔗糖合酶的基因表达量铃龄25 d时明显高于低强纤维品种,而β-1,3-葡聚糖酶的基因表达量则在铃龄10~25 d高于低强纤维品种。在纤维素形成过程中,高强纤维品种的纤维素累积平缓且纤维素累积持续期长于低强纤维品种,品种间差异程度受棉株果枝部位影响。在棉纤维发育过程中,Expansin、β-1,4-葡聚糖酶的基因表达量随铃龄的增加呈下降趋势(铃龄20 d时表达量显著下降),这与棉纤维形成过程(铃龄25 d前伸长较快,随后趋于停止)一致,且高强纤维品种维持高表达时间长与其纤维伸长期较长相吻合。     

MEF2a基因在肌肉组织中的表达研究

分别取90日龄、180日龄和270日龄大白猪心肌、背肌和腿肌,提取总RNA,设计并合成猪MEF2a引物,以β肌动蛋白作为内参,利用Real-time PCR方法检测不同日龄大白猪肌肉组织中MEF2a基因mRNA的表达。结果表明,不同日龄大白猪的心肌和背肌中,MEF2a基因mRNA的表达水平无显著差异,在腿肌中有显著差异（P<0.05）。从90日龄到270日龄,MEF2a基因在心肌、背肌和腿肌的表达水平均差异显著（P<0.05）,腿肌最高,其次是背肌,心肌最低。据此推测,MEF2a基因在猪成体后的肌肉组织中,主要是促进Ⅰ型肌纤维的生成,而不再是介导细胞分化。     

肌肽对肉鸡肌纤维发育的影响

选用1日龄AA肉鸡400只,随机分成4组。1~4组饮水中肌肽的添加量分别为0、20、40、60mg/L,每周末测定各组肉鸡的胸肌和腿肌肌纤维直径,观察肌肽对肉鸡肌纤维直径发育的影响。结果表明：1周龄肌肽试验组胸肌和腿肌肌纤维直径均大于对照组,但差异不显著（P>0.05）。2周龄,中、高剂量组的胸肌肌纤维直径分别显著或极显著地大于对照组（P<0.05,P<0.01）;高剂量组的腿肌肌纤维直径极显著大于对照组（P<0.01）。3周龄,高剂量组的胸肌肌纤维直径极显著大于低剂量组和对照组（P<0.01）,高剂量组的腿肌肌纤维直径显著大于对照组（P<0.05）。4周龄,低剂量组的胸肌和腿肌肌纤维直径均显著小于对照组（P <0.05）。5周龄,中剂量组的胸肌肌纤维直径显著小于对照组（P<0.05）,低、中剂量组的腿肌肌纤维直径分别极显著或显著地小于对照组（P<0.01,P<0.05）。6周龄,肌肽试验组肌纤维直径均小于对照组,但差异不显著（P>0.05）。因此,1~3周龄肌肽各剂量组肌纤维直径的发育速度快于对照组,而4~6周龄肌纤维直径的发育速度低于对照组,1~3周龄肌肽处理存在明显的剂量效应。     

河田鸡体重、体尺及屠宰性状测定及其相关性分析

为了探讨河田鸡体重、体尺与屠宰性状的相关关系,为河田鸡的选育提供依据。本研究对120日龄河田鸡的体重、体尺和屠宰性状进行测定,并对各指标进行了相关性分析。结果表明：体重、体斜长、龙骨长、胸深、胸宽、胫长和胫围在公母之间存在极显著差异(P＜0.01);体重与体斜长、龙骨长、胸深、胸宽、胫长、胫围均有显著或极显著正相关(P＜0.01),其余各指标间亦有不同程度的相关;宰前体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重、腹脂重、皮脂重、腿肌率和腹脂率在公母之间存极显著差异(P＜0.01);宰前体重与屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重、皮脂重、屠宰率、半净膛率、全净膛率呈显著(P＜0.05)或极显著正相关(P＜0.01),其余各指标间亦有不同程度的相关。     

珍禽贵妃鸡 14周龄屠宰性能与肉品质的相关性分析

为了探讨珍禽贵妃鸡屠宰性能指标与肉品质的相关关系;试验测定了14周龄的贵妃鸡的屠宰性能和肉品质指标,并分析了两者关系;结果表明：14周龄贵妃鸡（♂/♀）体重分别为1120.67g和845.33g。公母鸡在体重、屠体重、半净膛重、胸肌重、胸肌率、腿肌重、腿肌率、腹脂重、腹脂率、肌间脂肪宽、皮脂厚上差异极其显著（P〈0.01）。公鸡的胸肌与腿肌在红度值（a）、亮度值（L）、pH、系水力上差异极显著（P〈0.01）;母鸡的胸肌与腿肌在红度值（a）、亮度值（L）、剪切力、系水力上差异极显著（P〈0.01）。胸肌剪切力与胸肌（b）、肌间脂肪宽与腿肌剪切力存在极显著负相关（P〈0.01）,相关系数分别为-0.731和-0.751;屠宰率与腿肌pH存在极显著正相关（P〈0.01）,相关系数为0.780。由此可以得出,贵妃鸡公鸡的屠宰性能优于母鸡;贵妃鸡屠宰性能分别与胸肌肉品质指标、腿肌肉品质指标存在不同程度的相关性,相关系数分别介于-0.731-0.617和-0.751-0.780。     

高邮鸭主要免疫器官的表型发育及其与TLRs表达的相关性分析

Toll样受体(TLRs)在机体天然免疫中发挥重要作用。为分析TLRs在鸭主要免疫器官中的表达情况,在测定和分析高邮鸭免疫器官发育的基础上,荧光定量PCR法检测了高邮鸭TLR1、TLR~2、TLR4、TLR5(TLR1/2/4/5)4种TLR mRNA基因在免疫器官(胸腺、脾脏和法氏囊)中的相对表达情况,并进行相关性分析。结果表明,TLR1/2/4/5 mRNA在不同发育时间段都有表达,但不同TLR基因在不同免疫组织中表达模式存在差异,总体来讲,胸腺中TLR1/2/4/5 mRNA在1周龄时表达水平较高,脾脏中TLR1/2/5 mRNA在8周龄时表达量显著高于其他周龄,法氏囊中TLR1/5在8周龄时表达量较高。相关性分析结果展示:免疫器官绝对增重和体重发育呈现高相关系数;TLR1/2/4/5 mRNA的表达水平和体重发育相关系数较高,大多高于TLRs mRNA表达水平与免疫器官增重的相关系数;胸腺组织中TLR1/2/4/5 mRNA表达量两两相关系数值相对较高。研究结果可以揭示TLRs在机体及其免疫器官发育过程中的表达情况,为进一步分析和揭示其在免疫抗感染过程中的作用奠定基础。     

Ghrelin对小鼠不同来源胚胎体外发育的影响及其受体的表达模式

为探明Ghrelin及其受体Ghsr-1a在早期胚胎发育中的作用,以小鼠体内受精、体外受精和孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度Ghrelin,观察胚胎发育效率;通过免疫荧光染色和荧光定量PCR,观察不同时期胚胎中Ghsr-1a的变化。结果表明,体内受精胚体外发育中添加0.1 ng/m L Ghrelin显著降低了囊胚率(P0.05),添加1 ng/m L的Ghrelin显著降低了小鼠体外受精胚的囊胚率(P0.05)。在体内受精胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平在4细胞显著高于其他时期(P0.05);体外受精胚中,Ghsr-1a的mRNA水平在8细胞前无明显差异,桑椹胚和囊胚显著下降(P0.05)。在孤雌激活胚胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平从2细胞到8细胞显著降低,之后到囊胚期开始显著升高,其蛋白表达模式与mRNA表达模式相反。Ghsr-1a在体内受精和体外受精胚胎中的表达相似,囊胚期表达量最低。结果提示,Ghrelin能够抑制体内和体外受精胚的体外发育,不同来源胚胎Ghsr-1a mRNA和蛋白表达模式均不相同。研究结果为进一步探索Ghrelin在胚胎发育中的作用机制提供了试验基础。     

高密度养殖下革胡子鲶生长激素mRNA表达的半定量分析

以β-肌动蛋白(β-actin)mRNA的表达量作为内标,应用半定量RT-PCR法,对高密度养殖条件下不同月龄革胡子鲶垂体生长激素(Growth hormone,GH)mRNA的相对表达量进行分析.结果显示:3.5,5,6.5月龄试验鱼的GH mRNA的相对表达量分别为3.612～5.965,2.929～4.556和1.360～1.821;平均相对表达量分别为4.346±0.656 0,3.649±0.568 4和1.575±0.135 5.上述数据经方差分析得出,革胡子鲶任意两个不同月龄之间GH mRNA相对表达量的差异达到1%的显著水平.Duncan氏多重比较结果显示,3.5,5月龄试验鱼垂体GH mRNA的平均相对表达量差异不显著,但均极显著高于6.5月龄.     

鸭胚胎代用蛋壳培养的研究

采用两种方法进行了鸭胚胎代用蛋壳培养,旨在提高出雏率。方法Ⅰ将新鲜种蛋的胚胎转移至代用蛋壳Ⅰ内培养,72h后转移至代用蛋壳Ⅱ内培养至出雏。方法Ⅱ将正常孵化72h后的胚胎转移至代用蛋壳Ⅱ后培养至出雏。方法Ⅰ组出雏率为19.2%(10/52);方法Ⅱ组出雏率为40.4%(21/52)。从第6天到出雏同一日龄胚胎存活率方法Ⅰ组显著低于方法Ⅱ组和对照组(P<0.05或P<0.01)。第16天到出雏同一日龄胚胎存活率方法Ⅱ组显著低于对照组(P<0.01)。结果表明方法Ⅰ和方法Ⅱ两种方法均能获得雏鸭,方法Ⅱ优于方法Ⅰ。     

Cst B基因在90日龄大白猪不同组织中的表达研究

采用RT-PCR技术,对90日龄大白猪心肌、肝脏、胃、肾脏、肺、大肠、小肠、背肌和腿肌组织中表达情况进行研究,得到Cst B基因在肾脏、肺、大肠和小肠中有较高的表达,而在心肌、背肌和腿肌等肌肉组织中表达量相对较低。     

猪TAK1基因的cDNA全长克隆、时空表达及亚细胞定位分析

为了研究转化生长因子β激活激酶1(Transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)在猪骨骼肌生长发育中的作用,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得猪TAK1的cDNA全长,并分析其时空表达及真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,TAK1 cDNA全长2 163 bp(Gen Bank登录号:KU504629),ORF为1 740 bp,编码579个氨基酸,其氨基酸序列与人、恒河猴、绵羊的相似性均为98. 8%,表明该蛋白在不同物种间高度保守。猪TAK1蛋白具有催化丝氨酸/酪氨酸磷酸化的STKc_TAK1结构域,而在该结构域中还有多个保守的ATP结合位点、A-Loop结构域、TAB1(TGF-beta activated kinase 1)结合位点。荧光定量PCR结果显示,TAK1基因在出生后120 d大白猪的免疫器官脾脏中表达量最高,胰腺、背最长肌等组织中的表达量较低;而不同发育时期的背最长肌中,该基因在胚胎期65 d表达量最高,随着生长发育表达量下调;在不同品种间,TAK1基因在各时期大白猪中的表达量均高于梅山猪,除出生后90 d外,其他时期差异均达到显著水平或极显著水平。pcDNA3. 1(+)-EGFP-TAK1重组质粒转染C2C12细胞后的荧光共定位结果显示,TAK1蛋白的表达主要集中在细胞质中。综上,TAK1基因在猪骨骼肌发育过程中起着重要作用,为进一步研究猪TAK1基因的功能奠定了基础。     

一种新的鸭病（暂名鸭出血性坏死性肝炎）病原学研究初报

从临床表现为肝脏不同程度点/斑块状出血和坏死为主要病变的病死雏番鸭、雏半番鸭和雏麻鸭肝脾组织中分离到8株病毒。分离毒能致死番鸭胚和鸡胚,胚体充出血、胚肝肿大出血坏死;人工感染1-2日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒;分离毒能在MDEF中增殖并产生细胞病变,经电镜观察,病毒在细胞浆中增殖,呈大量散在、成堆和晶格状排列,病毒粒子呈球形、二十面体对称、无囊膜、双层衣壳、直径70nm左右;分离毒不能凝集鸡和鸽红细胞,对乙醚、氯仿、FUDR不敏感;病毒核酸为dsRNA,在SDS-PAGE中具有禽呼肠孤病毒10个RNA片段的特征(L1-3、M1-3 和 S1-4);应用MDRV特异性引物不能从分离毒中扩增出任何条带;鉴于分离毒的上述特性,暂将此分离毒归属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。     

生长抑素卵黄抗体(SS-IgY)对北京油鸡生长的影响

采用 1日龄北京油鸡 90只 ,随机分为试验组 60只和对照组 30只。试验组自 7日龄起 ,每 10d自颈部皮下注射SS IgY制剂 1mL ;对照组做平行处理。生长试验的结果表明 ,试验组油鸡的周增重显著高于对照组 ,且其SS IgY的促生长效率最高为 88 32 %。屠宰试验也表现出与之相似的结果 ,即试验组油鸡屠宰体重、胴体重以及胸肌和腿肌重均比对照组高 ,但其屠宰率两组间无明显差异。上述结果显示 ,SS IgY可提高北京油鸡的生长速度     

β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫的表达研究

为探讨β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫组织中的表达情况,本试验采用实时荧光定量PCR与半定量PCR检测绵羊发情后第10、12、14、16、18天子宫组织中β-catenin mRNA的表达情况。实时荧光定量PCR与半定量PCR结果显示:2种检测方法均能检测出不同时期的绵羊子宫中β-catenin mRNA表达,其中绵羊发情后第10天β-catenin mRNA的相对表达量最大,显著高于其他4个时间点(P0.05),第12天相对表达量显著降低(P0.05),之后相对保持恒定,到第18天又显著升高(P0.05)。结果表明:实时荧光定量PCR与半定量PCR均可用于检测绵羊子宫组织中β-catenin mRNA的相对表达量;在绵羊发情后第10~18天,β-catenin在子宫中的呈现先减少后增加的波动变化趋势。     

TGF-βRⅠ及Smad2表达情况对绵羊腔前卵泡发育的影响

为探索适于哺乳动物腔前卵泡的培养方式以及观察颗粒细胞与卵母细胞的信号表达,为阐明早期卵泡生长的复杂机理和揭示卵泡发生发育的内在规律提供参考,通过使用免疫组织化学染色、荧光免疫组织化学染色以及RT-PCR的方法,观察TGF-βRⅠ与Smad2的蛋白和mRNA在绵羊卵巢卵泡的表达情况。结果表明:TGF-βRⅠ在绵羊腔前卵泡及小腔卵泡的颗粒细胞及卵母细胞有表达,随着卵泡的生长发育,到成熟卵泡时期时,信号消失;Smad2蛋白在绵羊卵泡各个发育时期的颗粒细胞中均有表达,在绵羊腔前卵泡的卵母细胞中无表达,随着卵泡的生长发育,信号逐渐出现,到成熟卵泡时期时,Smad2蛋白在卵母细胞表达较强;TGF-βRⅠmRNA只在成熟卵泡和培养前腔前卵泡颗粒细胞中检测到表达,在成熟卵泡和培养前腔前卵泡颗粒细胞中均有Smad2 mRNA表达,但在培养后腔前卵泡颗粒细胞中Smad2 mRNA表达量较低。TGF-βRⅠ与Smad2的蛋白和mRNA表达与绵羊卵泡发育情况密切相关。     

内标18S rRNA和β-actin mRNA比较:肉鸡十二指肠SGLT1 mRNA的发育规律

-βactinmRNA和18SrRNA因其在相同试验条件下的稳定表达,而被广泛用作内标基因来确定目的基因的表达量。试验分别使用这2种内标基因,用相对定量RT-PCR的方法对肉鸡(0~58 d)十二指肠钠葡萄糖共转运载体1(Sodium glucose cotransporter 1,SGLT1)的发育规律进行了分析研究,比较不同内标基因对SGLT1 mRNA表达水平检测结果的影响,以确定两者在一致试验条件下表达的相似度。结果表明,分别以-βactinmRNA和18SrRNA作为内标,SGLT1 mRNA表达发育规律完全一致,均表现为2~30 d不断升高,44 d下降,58 d回升;2 d和44 d的SGLT1 mRNA丰度显著低于16 d(P<0.05)和30 d(P<0.05),58 d的SGLT1 mRNA表达水平显著低于30 d(P<0.05)。提示这2种管家基因均可以作为内标用于肉鸡肠道转运载体基因mRNA发育规律的相对定量研究。     

不同品种猪背最长肌eIF4E、PPARGC-1、VEGFA和C-Jun mRNA丰度比较研究

为了研究mTOR通路及其相关联途径上与蛋白质合成有关的eIF4E、与能量代谢有关的PPARGC-1、与血管形成有关的VEGFA、与细胞增殖有关的C-Jun4个基因在不同品种猪背最长肌中的表达丰度,选用上市体重的长白猪、地方猪种蓝塘猪和大花白猪各8头作为动物模型,以管家基因GAPDH作为内标,采用Real-time RT-PCR方法,比较这些品种猪的背最长肌中目的基因mRNA表达丰度。结果表明:大花白猪背肌eIF4E mRNA的表达量显著高于蓝塘猪和长白猪(P0.05),其在蓝塘猪背肌的表达量高于长白猪但差异不显著(P0.05);蓝塘猪背肌PPARGC-1mRNA的表达水平显著高于大花白猪(P0.05),与长白猪相比差异不显著(P0.05),长白猪与大花白猪相比无显著差异(P0.05);VEGFA和C-Jun mRNA在蓝塘、长白、大花白猪背肌中的表达没有差异(P0.05)。以上结果提示,eIF4E和PPARGC1基因的差异表达可能与不同猪品种间肌肉性状和肉质差异密切相关。