5-HT与NSE和SYN在牛周期黄体细胞中的共存

【目的】探讨弥散性神经内分泌细胞标记物在牛黄体细胞中的共存现象,以期为黄体细胞的内分泌研究提供理论依据。【方法】采集黄牛黄体,常规方法制备石蜡切片,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法,结合免疫组化双标记法染色后,镜检拍照,研究牛周期性黄体细胞中5-HT与NSE和SYN的共存情况。【结果】黄体组织中含有这3种标记物的单标记和5-HT与其他两者的双标记免疫反应阳性细胞,其主要以散在形式分布于黄体中,细胞形态多呈圆形、椭圆形和梭形,阳性细胞平均数由多至少依次为:5-HT、NSE、SYN/5-HT、SYN和NSE/5-HT;在黄体细胞以外的卵巢细胞中未观察到这3种物质的存在。【结论】牛黄体组织中存在5-HT、NSE、SYN 3种标记物和SYN/5-HT、NSE/5-HT双标记免疫反应阳性细胞,提示黄体组织在发生的同时也存在着部分细胞的神经内分泌分化。     

弥散性神经内分泌细胞标志物在妊娠期山羊黄体细胞中的共存

【目的】探讨S-100蛋白、5-羟色胺(5-HT)、神经特异性烯醇化酶(NSE)和突触素(SYP)4种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体细胞中的共存情况。【方法】采取妊娠中期(50~70 d)奶山羊卵巢,常规方法制备石蜡切片,采用免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜观察,对4种弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了检测。【结果】S-100蛋白与SYP共存于同一黄体细胞中,表达呈强阳性,阳性细胞主要分布在黄体周边,占总阳性细胞的56.57%。S-100蛋白与5-HT、5-HT与SYP、NSE与SYP、5-HT与NSE、S-100蛋白与NSE共存的细胞呈弱阳性,分别占总阳性细胞的18.42%,15.67%,4.31%,4.30%和0.73%,均匀分布于整个黄体中。【结论】S-100蛋白、5-HT、NSE和SYP在山羊黄体细胞中有两两共存现象。     

奶山羊周期黄体中催产素的免疫组化定位

运用免疫组化 ABC法对奶山羊周期黄体中催产素 (OT)的定位进行了研究。结果表明 ,奶山羊周期黄体中存在数量较多的 OT免疫反应阳性细胞。OT阳性细胞根据胞质内反应颗粒着色的深浅可分为强阳性、中等阳性和弱阳性细胞 3种。阳性细胞在形态上以圆形、卵圆形为主 ,另有相当数量的细胞具有突起 ,小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞则多呈现为长梭形。从分布上看 ,强阳性细胞主要分布于黄体周边 ,少数散布于中央区域 ,中等阳性及弱阳性细胞则均匀分布于整个黄体组织中。连续切片 HE染色的对照观察显示 ,奶山羊周期黄体中的 OT主要是由大黄体细胞分泌 ,小黄体细胞也可产生少量的 OT。     

奶山羊周期黄体中催产素的免疫组化定位

运用免疫组化ABC法对奶山羊周期黄体中催产素（OT）的定位进行了研究，结果表明，奶山羊周期黄体中存在数量较多的OT免疫反应阳性细胞，OT阳性细胞根据胞质内反应颗粒着色的深浅可分为强阳性，中等阳性和弱阳性细胞3种，阳性细胞在形态 以圆形，卵圆形为主，另有相当数量的细胞具有突起，小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞则多呈现为长梭形，从分布上看，强阳性细胞主要分布于黄体周边，少数散布于中央区域，中等阳性及弱阳性细胞则均匀分布于整个黄体组织中，连续切片HE染色的对照观察显示，奶山羊周期黄体中的OT主查由大黄体细胞分泌，小黄体细胞也可产生少量的OT。     

催产素在牛黄体神经内分泌细胞中表达

为了明确牛卵巢黄体中是否存在神经内分泌细胞及其与催产素表达的关系,采用免疫组化链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶法及双重酶标记对4例发情周期牛黄体中神经元特异性烯醇化酶和催产素的分布关系进行了研究。结果显示:黄体各区均含神经元特异性烯醇化酶和催产素样免疫反应阳性细胞,细胞形态类似,均呈现不规则的圆形、卵圆形、三角形或多角形,细胞核位于中央或偏于一侧,部分细胞有突起。双阳性细胞的形态与分布与OT阳性细胞基本一致。对于NSE-OT双阳性细胞和OT阳性细胞数目进行检验表明,二者在数量上无统计学差异。结果提示黄体中OT主要在神经内分泌细胞中表达。     

促性腺激素释放激素在不同品种水牛卵巢中的免疫组化定位

【目的】了解促性腺激释放激素（GnRH）在广西沼泽型水牛与摩拉杂交水牛卵巢中定位表达的异同点,为深入阐明GnRH调节卵巢功能的机制提供理论依据。【方法】采用免疫组化SP染色法对广西沼泽型水牛和摩拉杂交水牛卵巢中GnRH及其受体的分布表达进行对比研究。【结果】两种不同品种水牛卵巢中均存在大量的GnRH阳性细胞,且主要位于颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内;通过比较显示,两种不同品种水牛卵巢GnRH阳性细胞个数差异极显著（P〈0．01）,但GnRH阳性细胞大小及其平均光密度的差异均不显著（P〉0．05）。【结论】不同品种水牛卵巢的GnRH分布差异可能与繁殖性能有关,但主要分布于巢卵颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内。     

2种神经肽在奶山羊下丘脑中的共存

为了探讨下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH)和催产素(OT)在同一细胞有无共存的现象,实验采用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶法对GnRH与OT免疫反应物在妊娠周期奶山羊下丘脑的分布进行双重酶标记研究。结果显示,在室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等18个核团(区)有GnRH-OT双标记免疫反应阳性细胞。阳性细胞的形状有圆形、卵圆形、多角形;有的阳性细胞突起明显。根据细胞中阳性物质的多少和核团中阳性细胞数量,可分为强阳性、中等阳性、弱阳性核团。GnRH与OT在上述核团的某些细胞的共存现象为GnRH与OT在功能上的相互调节提供了形态学依据。     

弥散性神经内分泌细胞标志物在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达

【目的】研究卵巢内弥散性神经内分泌系统细胞的分布情况。【方法】采用间接免疫荧光染色法检测弥散性神经内分泌细胞广谱、共同的标志物S100蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达情况。【结果】S100蛋白和NSE在动情周期次级卵泡和囊状卵泡外膜细胞、妊娠期囊状卵泡外膜细胞和部分黄体细胞中表达,阳性细胞散在或成簇分布,一些细胞具有明显的突起,细胞核不着色。【结论】小鼠卵巢中存在弥散性神经内分泌细胞;弥散性神经内分泌物质在卵泡不同发育阶段发挥着不同的调控作用;在卵巢的发育过程中伴随着部分细胞神经内分泌化。     

雌激素对GT1-7细胞GnRH分泌及相关基因表达的影响

【目的】研究低浓度雌激素对下丘脑GnRH分泌以及ERα、GnRH等6个生殖相关基因表达的影响.【方法】采用体外培养GT1-7细胞,对照组添加溶剂(无水乙醇),试验组添加雌激素(100pmol/L),培养1、3、6、12、18、24、30、36h收集细胞和培养上清液,利用酶联免疫法(ELISA)测定收集上清液中GnRH浓度,并利用相对荧光定量法测定目的基因的表达.【结果】与对照组相比,试验组GnRH分泌呈增加趋势,培养12h左右GnRH分泌达到峰值(P0.05);ERα、GnRH、Kiss-1、GPR54mRNA相对表达量先增加后降低,4种基因mRNA依次在18h(P0.01)和24h(P0.05)、6h(P0.01)、3h(P0.01)、6h和12h(P0.05)表达显著增加.nNOS和c-fos mRNA相对表达量较对照组呈降低趋势,这2种基因mRNA依次在30h和36h(P0.05)、3h(P0.01)表达显著降低.【结论】100pmol/L雌激素能够促进GT1-7细胞分泌GnRH,这种作用可能是通过调控ERα、GnRH、Kiss-1、GPR54、nNOS以及c-fos mRNA的表达实现的.     

多浪羊和卡拉库尔羊卵巢促卵泡素受体的定位研究

[目的]探讨多浪羊和卡拉库尔羊卵巢组织中FSHR基因表达变化规律.[方法]采用免疫组织化学SP方法对两种绵羊卵巢组织上FSHR进行定位研究.[结果]FSHR阳性细胞主要表达在颗粒细胞上,在卵母细胞和膜细胞上也有少量表达,两地方品种绵羊卵巢上原始卵泡和闭锁卵泡时期表达差异不显著(P＞0.05),而在初级卵泡、次级卵泡时期和成熟卵泡上表达差异显著(P＜0.05);对同种绵羊分析时又发现原始卵泡与其他卵泡之间FSHR阳性细胞表达差异显著(P＜0.05),成熟卵泡时期阳性细胞表达显著(P＜0.05)高于初级和次级卵泡.闭锁卵泡是阳性细胞率与其他各级卵泡差异极显著(P＜0.01).[结论]推测出多浪羊对FSH的敏感性高于卡拉库尔羊,表明FSHR含量越高繁殖率越高.FSHR可能也参与其他因子的调控.     

兔圆小囊产溶菌酶细胞的免疫电镜组织化学观察

 采用免疫组织化学和免疫电镜细胞化学的方法 ,对兔圆小囊组织中产溶菌酶细胞进行了观察。免疫组织化学观察发现 ,产溶菌酶阳性细胞在兔圆小囊的粘膜上皮、圆顶上皮以及淋巴组织的滤泡生发中心、圆顶区和帽区均有分布 ,且受到多杀性巴氏杆菌感染后 ,阳性细胞增多 ,阳性反应增强。免疫电镜结果显示 ,在兔圆小囊的淋巴组织DNES细胞的颗粒中发现溶菌酶免疫组织化学阳性反应物。这一重要发现为神经 内分泌 免疫网络学说提供了新的证据。     

绵羊iPS细胞诱导及转录组学分析

【目的】建立绵羊(Ovis aries)诱导性多能干细胞系,为绵羊转基因育种、应用绵羊诱导性多能干细胞奠定基础。【方法】利用电转将OCT4、SOX2、KLF4、l-Myc、Lin28转染至绵羊成纤维细胞中并诱导培养至有光滑隆起、边缘整齐的细胞克隆,形态学、碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色以及实时荧光定量PCR检测克隆细胞的生物学特性;利用高通量测序技术对诱导0、10、20、30 d的阳性细胞的差异表达基因进行筛选。【结果】克隆细胞中SOX2、OCT4、SSEA-1蛋白免疫荧光染色均呈阳性; OCT4、SOX2、Nanog基因表达量均极显著高于成纤维细胞;0和30 d转录组测序表明,被注释到GO数据库的差异表达基因有9 465个,其中,上调基因6 987个,下调基因2 478个;KEGG分析共有5 773个基因注释到259个通路中,其中,P53信号通路显著富集,且其在干细胞增殖方面起着非常重要的作用。【结论】初步成功建立了绵羊诱导性多能干细胞。     

不同砧木对火焰无核葡萄生长、产量及品质的影响

【目的】研究不同砧木对火焰无核葡萄生长、产量和品质的影响,为新疆地区栽培优势火焰无核嫁接组合提供科学依据。【方法】以5BB、110R、101-14MG、SO4、188-08等5种砧木嫁接的6a生火焰无核葡萄为试材,火焰无核自根为对照,分析其在田间整个生长周期中树体的生长、产量及发育状况,测定果实色差、粒重、穗重、可滴定酸、可溶性固形物含量等品质指标。【结果】不同嫁接组合葡萄相较于火焰无核自根苗在生长、产量和果实品质均显著或极显著提高。其中火焰无核/101-14MG更能促进火焰无核葡萄早熟。且果实粒重最大,果实着色最好,可溶性固形物含量,固酸比最高。【结论】以101-14MG为砧木嫁接的火焰无核葡萄具有成熟期早、着色好、产量高、可溶性固形物含量高等优点,是5种砧穗组合中最适宜火焰无核葡萄的优良砧木。     

加工番茄小孢子细胞学发育时期与花器形态相关性研究

【目的】在单倍体育种中,分析加工番茄花器官形态,鉴定小孢子发育时期,为花药离体培养外植体的选择提供理论依据。 【方法】以加工番茄(杂交组合C1、C2和C3)为材料,研究小孢子不同发育时期的花器形态与细胞学形态。【结果】加工番茄小孢子发育时期与花器官形态密切相关,同一品种不同小孢子发育时期花器官形态不同;C1花蕾长度在小孢子单核靠边期大于其它 2个杂交组合;相同小孢子发育时期不同杂交组合花器形态基本相同。【结论】加工番茄杂交组合C2和C3花蕾长度为5.00~5.99 mm ,C1花蕾长度为6.00~6.99 mm时小孢子发育时期为单核靠边期。单核靠边期细胞学特征为细胞呈正圆形,细胞核靠近细胞壁和显现萌发孔。花器形态为花蕾膨大、微微张开、萼片黄绿色,花药颜色为黄绿色易剥离。     

Immunocytochemical Identification and Localization of Diffuse Neuroendocrine System （DNES） Cells in Gastrointestinal Tract of Channel Catfish （Ictalurus punctatus）

To detect distribution and relative frequency of diffuse neuroendocrine system （DNES） cells in the gastrointestinal tract of channel catfish （lctalurus punctatus）, the intestinal tract of channel catfish was divided into seven portions from proximal to distal： the enlarged area after oesophagus, cardia, fundus, pylorus, and anterior, middle, and posterior intestine. Immunohistochemical method using the strept avidin-biotin-complex （SABC） was employed. All antisera between seven portions of the channel catfish were compared statistically using statistical package for the social science （SPSS）. Five types of DNES ceils were determined： neuropeptide Y-immunoreactive （NPY-IR） cells were demonstrated in both anterior and middle intestine; serotonin （5-HT） immunoreactive cells were detected throughout the whole gastrointestinal tract; vasoactive intestinal peptide （VIP） positive cells were at the highest frequency in pylorus; glucagon-immunoreactive （GLU-IR） cells were moderate in number in the fundus and anterior, middle intestine, and no immunoreactivity was determined in the other portions; somatostatin （SOM） positive cells were more abundant in the anterior and middle intestine. The regional distribution and relative frequency of immunoreactive cells in the channel catfish, Ictalurus punctatus, are essentially similar to those of other fish. However, some characteristics are observed in this species, which further proved that the diversity of the physiological function of DNES cells was based on their morphology.     

青梗菜优异DH系的创制与利用

 【目的】创制多样性的青梗菜DH系,应用于杂种优势育种实践。【方法】以15个优良青梗菜杂交种为试材进行游离小孢子培养,通过优化培养条件建立高效培养体系。【结果】获得了373株小孢子植株;鉴定出251株双单倍体;筛选出7个优异DH系;配制出2个优良组合。【结论】建立了利用游离小孢子培养技术创制青梗菜DH系及其杂种优势育种的技术体系。     

矮牵牛细胞的长期离体培养及再生植株的ISSR分析

 【目的】实现矮牵牛细胞的长期离体培养和再生，不但可以获得矮牵牛体细胞突变体，从中选出优良株系，而且可以为研究外源基因在矮牵牛细胞增殖与分化过程中的稳定性提供技术体系。【方法】以重瓣矮牵牛叶片为外植体，使用不同浓度BA与NAA的组合在黑暗条件下诱导愈伤组织。在不同光条件下，将愈伤组织在MS+ BA 2.0 mg•L-1+0.5 mg•L-1 NAA+200 mg•L-1 CH 与 MS+ BA 0.5 mg•L-1+0.5 mg•L-1 NAA+200 mg•L-1 CH两种培养基进行愈伤组织3年多的继代培养，并利用筛选的8个引物对20个再生植株的总DNA进行ISSR分析。【结果】不同的生长素与分裂素配比诱导的愈伤组织状态明显不同，继代后的愈伤组织在低激素培养基上分化出不定芽，再生芽复壮后可得到正常植株。对再生植株的总DNA进行ISSR分析发现，再生植株之间存在很大的遗传变异。【结论】矮牵牛愈伤组织在高BA浓度培养基上可长期继代保存；在低激素培养基上可实现植株再生。长期离体培养矮牵牛是获得其突变体的有效方法。     

Activin A特异性对人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化的促进作用

【目的】研究Activin A对人胚胎干细胞（hESCs）向限定性内胚层（DE）诱导分化的促进作用及其信号通路分子,为hESCs向DE诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hESCs中,收集100 ng/mL Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96,120 h的细胞,用实时荧光定量RT-PCR检测原条标记Gsc和Mixl1、中内胚层共同前体标记Brachyury、内胚层标记Foxa2和Sox17、中胚层标记Flk1、外胚层基因Pax6、多能性相关基因Oct4与Nanog表达水平的变化,用细胞免疫荧光检测Brachyury和Sox17蛋白表达水平的变化。【结果】在人饲养层（HEF）培养体系上,高浓度Activin A能更快地促进中内胚层基因的表达并提高其表达水平;Brachyury和Sox17蛋白的细胞免疫荧光检测表明,Activin A诱导12和48 h就可检测二者的表达明显增加,且二者的表达水平分别在诱导48和96 h时达到高峰;hESCs高效分化为限定性内胚层细胞,DE细胞分化率为（81.7±5.4）%,并且体外的内胚层分化过程遵循从原条开始、经过中内胚层共同前体阶段、再到内胚层的发育过程,与体内发育规律相似。【结论】Activin A能特异性地诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层分化,转录调控Brachyury和Sox17蛋白的表达。     

东方百合OT系列试管鳞茎的诱导与植株再生体系的建立

[目的]通过对东方百合OT系列品种康佳德奥、罗宾娜试管鳞茎的诱导,建立康佳德奥、罗宾娜的植株再生快繁体系,为进一步建立脱毒快繁体系奠定基础.[方法]采用康佳德奥、罗宾娜不同部位的外植体进行试管鳞茎的诱导,比较用不同部位的外植体诱导的难易及快慢程度,筛选适合的诱导激素、增殖激素及生根激素水平.[结果]在百合OT系列选择外植体诱导时,最好用茎尖作外植体进行诱导;由于罗宾娜、康佳德奥所含内源激素水平不同,因而增殖培养基BA最好控制在1.0～0.5 mg/L;生根激素水平罗宾娜为NAA 0.5mg/L,康佳德奥为NAA0.3 mg/L,生根率为100;,试管苗结鳞茎率大于50;;试管苗移栽在条件容允许的情况下,用山土最为适宜,成活率可达到93;以上.[结论]在百合OT系列选择外植体诱导时,最好用茎尖作外植体进行诱导;罗宾娜的增殖培养基为MS+BA0.5 mg/L+ NAA0.5 mg/L、康佳德奥的增殖培养基为MS+BA0.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L;生根激素水平罗宾娜为NAA 0.5 mg/L,康佳德奥为NAA 0.3 mg/L,试管苗移栽最好使用山土.