平陆百合愈伤组织诱导的正交试验研究

[目的]筛选平陆百合愈伤组织诱导的最佳培养基配方。[方法]以平陆百合的鳞片作为外植体,分别在光照和黑暗培养条件下,利用正交试验设计法研究了不同浓度2,4-D、NAA、KT组合对平陆百合愈伤组织诱导效果的影响。[结果]光照培养条件下,百合愈伤组织的适宜诱导培养基配方为MS+2,4-D 1mg·L~(-1)+NAA 0.3 mg·L~(-1)+KT0.5mg·L~(-1),诱导率为57.143%,各因子影响程度依次为NAAKT2,4-D;黑暗培养条件下,百合愈伤组织的适宜诱导培养基配方为MS+2,4-D 5mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)+KT 0.2mg·L~(-1),诱导率为50%,各因子影响程度依次为KTNAA2,4-D。[结论]平陆百合愈伤组织诱导的最佳培养基配方为:MS+2,4-D 1 mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)+KT 0.5mg·L~(-1),培养条件为光照。     

多效唑在核桃仁中的残留测试评估

为了解核桃树使用多效唑后核桃仁中的残留量,评估多效唑在核桃园中使用的安全性,于2019年分别以普通核桃品种‘香玲’和‘元丰’为试材,使用不同剂量(0. 8～1. 6 g·m~(-2))、不同浓度(1 000～2 000mg·L~(-1))多效唑进行土壤施入或叶面喷施,利用气相色谱-质谱法(GB 23200. 8—2016)对多效唑在核桃仁中的最终残留量进行测定。结果表明,叶面喷施和土施处理的残留量均小于0. 5 mg·kg~(-1),其中大部分土施处理的残留量低于0. 01 mg·kg~(-1),叶面喷施处理的残留量低于0. 02 mg·kg~(-1)。我国目前还没有核桃仁多效唑残留限量标准,若以最大残留量≤0. 5 mg·kg~(-1)(我国现行花生仁残留限量标准)为标准,土壤施入多效唑0. 8～1. 6 g·m~(-2)或叶面喷施多效唑浓度不超过2 000 mg·L~(-1),喷施不多于3次,核桃仁中多效唑残留量不超标。     

洋水仙Dutch Master愈伤组织的诱导、分化及植株再生

以洋水仙品种Dutch Master的鳞茎、叶、花葶及无菌苗叶片作为外植体,选用MS为基本培养基,分别添加不同质量浓度的NAA(0.5,1.0,1.5mg·L~(-1))、IBA(0,0.5,1.0mg·L~(-1))、2,4-D(0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0mg·L~(-1))、6-BA(0.5,1.0,1.5,2.0,3.0mg·L~(-1))和KT(0.1,0.3,0.5mg·L~(-1)),研究不同外植体和不同外源激素配比对小鳞茎的诱导,愈伤组织的诱导、继代及植株再生的影响。结果表明:在Dutch Master初代培养阶段,6-BA的影响效应最大,随着6-BA质量浓度的升高,诱导率呈上升趋势,最适宜的初代培养基配比为:MS+6-BA 3.0mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)+2,4-D 0.2mg·L~(-1);以带鳞茎盘的双鳞片作为外植体诱导小鳞茎效果最好,诱导率达76.7%;鳞片部位以鳞茎外层鳞片的培养效果最好,分化率达97.5%;在Dutch Master愈伤组织诱导阶段,2,4-D的影响效应最大,当2,4-D浓度为1mg·L~(-1)时,愈伤组织诱导率的均值(K2)为峰值,最适宜的愈伤组织诱导培养基配比为:MS+2,4-D 1mg·L~(-1)+6-BA 1.5mg·L~(-1)+KT 0.1mg·L~(-1),Dutch Master无菌苗叶片愈伤组织诱导率可以达到81.3%;在Dutch Master愈伤组织继代培养阶段,最适宜的继代培养基配比为:MS+2,4-D 0.5mg·L~(-1)+6-BA 1mg·L~(-1),可以增殖分化得到没有玻璃化的小植株。     

花椒愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

以花椒试管苗叶片为试验材料,研究了不同激素浓度对花椒愈伤组织继代培养的影响,并以多次继代得到的疏松、活性高的愈伤组织建立花椒细胞悬浮系。结果表明:花椒愈伤组织最适继代培养基为MS+2,4-D 1.0mg·L~(-1)+6-BA 0.5mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+琼脂6g·L~(-1);花椒细胞悬浮培养的最佳培养基和培养条件为:MS+2,4-D 1.0mg·L~(-1)+6-BA 1.0mg·L~(-1)+葡萄糖30g·L~(-1),接种量0.05g·mL~(-1),摇床转速110r·min~(-1),25℃暗培养,该条件下悬浮细胞生长良好,最大生长量为4.52g;花椒悬浮细胞生长呈"S"型曲线,最适继代周期为16d。     

朝鲜淫羊藿愈伤组织诱导及分化

以朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)幼叶叶尖(称叶尖)和嫩叶柄分枝点(称分枝点)为外植体,研究外植体灭菌时间;采用L_9(3~4)正交试验设计,探讨1/2MS、MS、WPM 3种培养基和质量浓度不同的2,4-D、6-BA、NAA对愈伤组织诱导的影响,目的是筛选叶尖和分枝点诱导愈伤组织最佳培养基;同时进行叶尖愈伤组织分化条件及不同质量浓度KT对不定芽增殖效果的研究。结果表明:叶尖和分枝点灭菌时间均为6 min,存活率分别为71.67%和73.33%,诱导叶尖愈伤组织最佳培养基为1/2MS+2,4-D2.0 mg·L~(-1)+6-BA0.4 mg·L~(-1)+NAA0.5 mg·L~(-1),诱导率为48.33%,分枝点最佳培养基为MS+2,4-D3.0 mg·L~(-1)+6-BA0.2 mg·L~(-1)+NAA0.5 mg·L~(-1),诱导率为31.67%;叶尖愈伤组织在(4±0.5)℃低温处理180 d后能够分化,分化率为54.4%;KT质量浓度为1 mg·L~(-1)时增殖效果最好,增殖系数为2.35。     

植物生长延缓剂对蝴蝶兰开花特性的效应研究

选用不同浓度梯度的矮壮素(CCC)、多效唑(PP333)和丁酰肼(B9)对2个花梗较高的蝴蝶兰品种进行处理。研究结果表明:(1)25 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1)、100 mg·L~(-1)和200 mg·L~(-1)的多效唑喷施0.5~1 cm的蝴蝶兰花梗芽能极显著降低蝴蝶兰成花后的花梗高度,而不同浓度的矮壮素和B9处理效果次之,且对品种具有选择性,对于降低内山姑娘花梗高度的效果更显著。(2)各浓度多效唑对品种新娘礼服花径值没有明显影响,50 mg·L~(-1)和200 mg·L~(-1)的多效唑能显著减少内山姑娘的花径值,500 mg·L~(-1)的矮壮素以及4 000mg·L~(-1)和8 000 mg·L~(-1)的B9能显著减少品种内山姑娘和新娘礼服的花径值。(3)3种不同浓度的植物生长延缓剂矮壮素、多效唑及B9均没有对品种内山姑娘的花序长度、总花数及花期产生明显影响;而这3种激素处理都会减少新娘礼服的花序长度以及延迟该品种的花期,但不影响其总花数。     

植物激素对诱导猕猴桃单性结实及提高果实品质和产量的影响

以猕猴桃米良1号为试材,用植物激素赤霉素60 mg·L~(-1)+2,4-D 5 mg·L~(-1)+氨基酸100 mg·L~(-1)+钙160 mg·L~(-1)混合液喷雾,探讨混合液处理对米良1号果实品质及产量的影响。结果表明,植物激素混合液处理不仅可诱导猕猴桃单性结实生产无籽果实,还可大大地减少劳动成本、提高单位面积产量、改善果实品质、延长贮藏期,在生产上便于操作,易于大面积推广,具有很好的实用价值。     

杉木不同器官愈伤组织和再生芽的诱导效率

以杉木未成熟胚、种子发芽的下胚轴、子叶以及组培苗茎段为外植体,研究基本培养基、不同激素组合及浓度对杉木愈伤组织的诱导及再生芽发生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对不同外植体的愈伤组织诱导率有显著影响,对未成熟胚愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+2,4-D 2 mg·L~(-1)+6-BA 1 mg·L~(-1)+KT 1 mg·L~(-1),诱导率为92.7%;对子叶、下胚轴愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+TDZ 0.01 mg·L~(-1),诱导率分别为97.4%和95.2%;对组培苗茎段愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+2,4-D 1 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+TDZ 0.01 mg·L~(-1),诱导率为86.7%;MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织诱导再生芽的最佳培养基,诱导率为80%。质地疏松的愈伤组织其再生芽率最高(65%),单个质地均匀的愈伤组织其再生芽数可达6个;基本培养基对愈伤组织质地形态有较大影响,1/2MS培养基诱导出愈伤组织质地较疏松,MS培养基诱导出的愈伤组织质地均匀且表面可见颗粒状细胞团,DCR培养基诱导出的愈伤组织质地较密。     

东方百合遗传转化组培体系的建立

为建立高效稳定的基因转化受体系统,以东方百合"西伯利亚"(Lilium orienta l"Siberia")无菌苗叶片和鳞片叶为外植体,使用不同种类和浓度的生长素与细胞分裂素、蔗糖、抗生素筛选等方法进行了不定芽的诱导分化、试管苗小鳞茎诱导及生根等研究。结果表明:鳞片诱导最佳分化培养基为MS+KT2.0+NAA0.2mg·L~(-1),试管苗小鳞茎诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT2.0 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1)+75g·L~(-1)蔗糖,试管苗叶片分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA0.1 mg·L~(-1),试管苗鳞片叶分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.2 mg·L~(-1)。生根培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L~(-1)。抗生素敏感性试验表明,百合叶片的卡那霉素选择压为100 mg·L~(-1),鳞片叶为120 mg·L~(-1)。     

黑龙江省一 、二积温区水稻花药培养条件优化

为提高黑龙江省第一、二积温带水稻花药培养效率,促进该技术在粳稻新品种选育中的应用,以五优稻2号及黑龙江省第一、二积温区骨干亲本的F1、F2为材料,对提高花培效率的几个关键环节如取材标准、关键时期培养基配方和培养条件等进行了方法改良。结果表明:取穗以叶枕距、颖壳颜色和花药长度等多重因素为标准;适用于以五优稻2号为亲本的诱导培养基配方为进口N6+凝胶3.6g·L-1+蔗糖60g·L-1+2,4-D2mg·L~(-1);分化培养基配方为MS+KT 2mg·L~(-1)+IAA 1mg·L~(-1)+蔗糖30g·L-1+琼脂4g·L-1,同时辅以16h光照;生根培养基中加入3～6mg·L~(-1)多效唑,可以壮苗促分蘖,提高移栽成活率。     

马铃薯松散型胚性愈伤组织的诱导

为了建立马铃薯松散型胚性愈伤组织体系,用于脱毒繁殖和诱变育种,试验采用马铃薯块茎为外植体,在含有不同浓度2,4-D,BA和MS的培养基上进行松软型、松散型和胚性愈伤组织的诱导。结果显示,在1/4 MS+1.0 mg·L~(-1) 2,4-D+15 g·L~(-1)蔗糖的培养基上可以诱导出松软型马铃薯愈伤组织;在MS+0.5 mg·L~(-1) BA+0.25 mg·L~(-1) 2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上,继代3~5次,即可获得松散型愈伤组织;在MS+1.0 mg·L~(-1) BA+1.0 mg·L~(-1) 2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上,继代5~8次,即可获得松散型胚性愈伤组织。而且上述类型的愈伤组织生长迅速,结构特点突出。     

外源激素对紫马铃薯试管苗快繁的影响

[目的]为研究不同外源激素及其配比对紫马铃薯试管苗生长的影响。[方法]以紫马铃薯的无菌试管苗为试验材料,在添加不同浓度的生长素(IBA、NAA、2,4-D)和细胞分裂素(TDZ、6-BA、ZT)的MS培养基上培养,观察并分析各项生长指标。[结果]IBA、NAA两种生长素对根系生长的影响较大,IBA 1.0mg·L~(-1)时有利于紫马铃薯试管苗根的生长,对根系作用效果明显,NAA浓度在0.5mg·L~(-1)以上时不利于根系生长;2,4-D 0.5~2.0mg·L~(-1)时试管苗株高增加、茎纤细、根系极不发达,产生乳白色、块状愈伤组织。0.5mg·L~(-1)的TDZ或ZT可促进不定芽产生,利于芽增殖;单独使用6-BA时,无不定芽产生,也不利于试管苗生长。[结论]紫马铃薯试管苗生长的最适培养基成分:MS+IBA 1.0mg·L~(-1)+6-BA 1.0mg·L~(-1)、MS+NAA 0.5mg·L~(-1)+6-BA 0.2~0.5mg·L~(-1)。     

多效唑对突尼斯软籽石榴开花结实的影响

为了避开不利气象因素,促进张家界地区石榴开花结果,以突尼斯软籽石榴为材料,分别于头年夏季、春季萌芽期、春季展叶期对结果树进行了多效唑喷施试验。结果表明:喷施多效唑可以抑制突尼斯软籽石榴的营养生长;在春季展叶时喷施对增加枝梢径粗、缩短枝长和延后花期的效果最好;多效唑降低了突尼斯软籽石榴的坐果率,但能提高植株完全花数量达1~3倍,因此喷施多效唑仍能提高树体的坐果数量。     

菊芋悬浮细胞系的建立及其导管分子的体外分化

利用菊芋地下块茎作外植体,在附加1.2mg·L~(-1)2,4-D 的 MS 培养基上诱导愈伤组织形成,经同样 MS 液体培养基培养形成悬浮系;菊芋悬浮细胞转入含5.0mg·L~(-1)的6-BAP、1.0mg·L~(-1)2,4-D 的 MS 液体培养基内.经9d 培养可使约30%～50%悬浮细胞转化为具次生壁条纹的导管分子。     

福农39甘蔗健康种苗繁育

以福农39甘蔗为材料,通过预处理、茎尖培养、增殖培养、生根培养、病毒检测、炼苗移栽,以期建立健康种苗繁育体系。结果表明:经50℃水浴15min,在温度为35℃、相对湿度为80%、光照强度为1 000lx的培养箱中培养约7d,甘蔗茎段侧芽萌发率达97%。在MS+2,4-D1.0 mg·L~(-1)+6-BA1.0 mg·L~(-1)+AC5.0g·L~(-1)培养基中,茎尖均生长良好。在MS+6-BA1.5mg·L~(-1)+KT0.5mg·L~(-1)继代培养基中,增殖系数为13.6。在1/2MS+NAA1.0mg·L~(-1)生根培养基中,生根率达100%。经检测,组培苗无花叶病和宿根矮化病发生。炼苗移栽后存活率达到86%。由此,建立起福农39甘蔗健康种苗繁育体系。     

杉木愈伤组织的继代增殖与植株再生

通过建立杉木愈伤组织增殖和植株再生体系,旨在为杉木体细胞杂交和遗传转化等基因工程研究提供高效受体系统。以杉木子叶、下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了不同激素组合及浓度、培养条件对愈伤组织的继代及植株再生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对愈伤组织的继代有显著影响,2,4-D有利于降低继代过程中的褐化现象,NAA、KT有利于愈伤组织的继代增殖。DCR+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+KT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 1.0 mg·L~(-1)和DCR+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+KT1.5 mg·L~(-1)+NAA 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织继代增殖的最佳培养基。暗培养和800 lx光照强度是愈伤组织继代的最佳培养条件。愈伤组织在继代30~45 d期间内需转移至新培养基。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)再生芽诱导率最高,诱导率为80%。经过一次继代的愈伤组织比未经过继代的单个再生芽数多,平均可达3~4个。再生苗在1/2MS+IBA 1.0 mg·L~(-1)培养基中生根率高达89.5%。     

药用野生稻胚拯救后代YF2快繁技术

取药用野生稻胚拯救后代的幼芽1~2 cm,经70%酒精消毒30 s,0.1%升汞摇动消毒8 min及无菌水洗3~5次后,将其放在诱导培养基MS+2,4-D 1.0~3.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.1~0.5 mg·L~(-1)中培养,胚性愈伤组织的诱导率为31%;然后转入MS+IAA 1.0~3.0 mg·L~(-1)+6-BA 2.0~4.0 mg·L~(-1)+KT 1.0~2.0 mg·L~(-1)分化培养基中培养,成苗率为62%。成苗后转入1/2 MS+IAA 0.02~0.5 mg·L~(-1)生根培养基中,生根率达到99%。炼苗7 d后移栽到苗床,成活率达到90%。短期内可实现胚拯救后代YF2组培苗健康及快繁生长,为创制水稻新种质和研究抗病虫新基因克隆和利用奠定基础。     

栎叶枇杷叶片愈伤组织诱导技术初探

通过对外界环境如温度、光照等条件对愈伤组织诱导的影响研究。结果:叶片培养在温度22℃时愈伤组织诱导的效果最好,可达到81.82%;有经过10 d黑暗培养处理的叶片,愈伤诱导率整体有明显提高;在最适温度和黑暗培养处理下,培养基配方为MS+BA 0.2 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1)+2,4-D 1.0mg·L~(-1),栎叶枇杷叶片的愈伤诱导率达到100%。     

甘蓝游离小孢子培养技术体系的研究

甘蓝游离小孢子培养技术是快速创制甘蓝育种自交系资源的一条途径。本技术体系通过多年探索研究,获得花蕾供体植株的栽培管理技术,确定了环境温度23~27℃是植株初花期生长适宜温度,主花序或1级侧花序是花蕾选取的理想部位,单核靠边期至双核早期的小孢子占≥60%是游离小孢子的标准花蕾长度,小孢子数量1×105~2×105个·m L~(-1)有利出胚培养;培养基添加10~50 mg·L~(-1)秋碱和0.1 mg·L~(-1)TDZ有利小孢子出胚和获得双单倍体植株,B5+0.1 mg·L~(-1)GA3+Suc 30 g·L~(-1)+Agar 10 g·L~(-1)和MS+NAA 0.1 mg·L~(-1)+多效唑0.2 mg·L~(-1)+Suc 30 g·L~(-1)+Agar8 g·L~(-1)培养基均有利于胚状体分化和不定芽生根培养再生植株。     

红阳猕猴桃的组织培养快繁技术

为提高红阳猕猴桃组织培养效率,以红阳猕猴桃带芽嫩茎段和再生苗叶片为外植体,通过组培快繁试验,对影响红阳猕猴桃嫩茎段腋芽萌发和再生苗不定芽再生的生长调节物质的用量和作用进行分析筛选。结果表明:红阳猕猴桃最适宜诱导腋芽萌发的培养基为WPM+1mg·L~(-1) 6-BA+0.1mg·L~(-1) NAA和WPM+1mg·L~(-1)6-BA+0.2mg·L~(-1) NAA,在此条件下带腋芽茎段萌芽率达100%;再生苗叶片不定芽诱导的最佳培养基为WPM+1mg·L~(-1) 6-BA+0.2mg·L~(-1) NAA+0.2mg·L~(-1) 2,4-D;最适合红阳猕猴桃不定芽增殖的培养基为WPM+0.2mg·L~(-1) NAA+0.2mg·L~(-1) 2,4-D。