蟠桃果实总RNA提取方法的研究

[目的]筛选获得提取蟠桃果肉中总RNA的适宜方法.[方法]以盛花后100 d的蟠桃为材料,采用Transplant plus植物总RNA提取试剂提取法、RNAisoTM试剂盒法、改良SDS法、改良CTAB法等四种方法提取总RNA.[结果]两种试剂盒法提取的总RNA质量差,有严重的基因组污染;改良SDS法提取物中含有大量的多糖;采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰无降解,无基因组污染.经过RT - PCR和Northern blot检测后,表明该RNA能够满足后续分子生物学操作的要求.[结论]蟠桃果实总RNA适宜提取方法-改良CTAB法的确定为后续果实发育分子生物学的研究奠定了基础.     

适于葡萄不同组织RNA提取方法的筛选

比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SDS法能够克服果实中RNA提取难度大的问题,能够从果实中提取到质量和产量都很高的RNA。结果表明,改良SDS法适用于葡萄叶片、花序、茎尖、卷须组织中总RNA的提取,改进的改良SDS法是从果实中提得LMWRNA较佳选择。在总RNA提取的基础上建立的葡萄LMWRNA提取方法能够达到研究的要求。     

越橘果实总RNA提取方法比较研究

越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取.试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测.结果表明,改良的CTAB法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高.通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆等分子生物学试验的要求.     

果树果实总RNA提取方法的改良研究

植物总RNA的提取尽管已成为一种常规的技术,但由于果树果实材料的特殊性,其RNA的提取至今没有一种比较理想的技术和方法。本研究在以往CTAB方法的基础上,对其进行改良以探讨一种适于果实总RNA提取的通用方法,从而为果实分子生物学研究奠定基础。研究结果表明,在提取缓冲液中加入PVP和β-巯基乙醇,使其终浓度分别为16%和3%,在匀浆上清液中加入1/3体积5 mol/L KAC(pH4.8),可有效地提高RNA提取的质量。利用改良后的CTAB法成功地从苹果、桃、草莓和葡萄果实中提取出总RNA。经过紫外、电泳、反转录分析结果表明,该改良的CTAB法是一种适合果实总RNA提取的首选方法。     

不同方法提取新疆红肉苹果RNA差异研究

使用生工柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒、Trnzol法以及改良CTAB 3种方法,提取红肉苹果克孜阿尔玛的果肉、果皮、花瓣、叶片中的总RNA,并对比这3种方法提取RNA的产量、质量以及完整性。结果表明,由Trnzol方法提取所获得的RNA纯度较低,有降解现象,且有DNA、蛋白质的污染,果肉和果皮RNA的产量也并不理想;而用改良CTAB法和生工试剂盒法提取的RNA较少降解,所得28 S rRNA和18 S rRNA条带较为清晰,花瓣和叶片的OD_(260/280)均在2以上,生工试剂盒法提取的RNA产量高,OD_(260/280)和OD_(260/230)比值均在1.8～2.5,条带的完整性好。3种方法比较而言,改良CTAB法和Tr Nzol法提取的RNA条带的清晰度、产量及质量都低于生工试剂盒法。     

番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

一种适合香蕉根系总RNA提取的方法

利用改良SDS法、改良CTAB法、SDS法和QIAGENR Neasy Plant Mini试剂盒提取法分别提取香蕉幼根和老根的总RNA,并对提取的总RNA的完整性、纯度等进行比较。结果表明：改良的SDS法提取的总RNA在清晰度、纯度、完整性和回收率上均高于其他3种方法所提取的。     

三种梨果皮总RNA提取方法的比较研究

以西洋梨品种‘早红考密斯’、‘香红蜜’和白梨品种‘华酥’成熟果实为试材,采用Plantol总RNA提取试剂盒法、改良CTAB法和SDS法提取果皮中总RNA,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR检测所提取总RNA样品的质量.结果表明,Plantol试剂盒法和改良CTAB法提取的RNA,经RT-PCR后得到的条带清晰,与目的片段大小一致,可以满足基因表达分析等试验的要求;而SDS法所提取的部分RNA,RT-PCR扩增不到目的片段,难以达到进一步试验的要求.     

桃生长发育过程中果肉、果皮及叶片色素含量的变化研究

以红肉桃18(离核、红肉)、红肉桃6(粘核、红肉)、沙红桃(白肉)和锦香(黄肉)4个桃品种为试材,分析了果实生长发育过程中果肉、果皮、叶片中色素含量的变化。结果表明:随着果实的生长发育,4个品种叶片中叶绿素、类胡萝卜素、花青素含量及果皮、果肉中叶绿素含量略有波动或缓慢下降;红肉桃6、红肉桃18和沙红桃3个品种果皮、果肉中类胡萝卜素含量缓慢下降,锦香果肉中类胡萝卜素含量6月上旬开始快速上升,到6月12日时最高达0.014 mg/g;4个桃品种果皮和果肉中花青素含量6月上旬开始上升,其中红肉桃18含量最高,到6月12日达0.15 mg/g;与类胡萝卜素含量一样,果皮、果肉中花青素含量远低于叶片中含量。相关性分析表明,4份桃品种果皮、果肉中叶绿素和类胡萝卜素含量均呈显著正相关,红肉桃6、红肉桃18果皮、果肉花青素含量与叶绿素、类胡萝卜素含量均呈负相关。     

桃不同发育时期叶片总RNA提取方法的比较

为了从桃叶片中提取到高质量的RNA,以进行反转录、RT-PCR等后续分子生物学试验,选取了改良硼砂-CTAB法、改良CTAB法、改良SDS-苯酚法、试剂盒法、Trizol法,以及在试验中探索的改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ对桃不同发育时期的叶片总RNA进行提取,测定RNA样品的OD值,结合琼脂糖凝胶电泳检测总RNA样品的质量。结果表明,这些方法虽然都能获得桃叶片总RNA,但是或存在不同程度的DNA残留,或有蛋白、多糖等杂质污染,或降解严重;而改良的Trizol法提取总RNA的完整性和纯度较好;针对生长期和衰老期叶片的不同生理特性可分别采用改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ,提取的总RNA反转录后,通过RT-PCR检测,条带明亮清晰,与预期目的基因片段大小一致,说明这2种方法提取的总RNA能用于后期的分子生物学试验。     

山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响

探讨了不同浓度的山梨醇清洗溶液对李果肉组织中RNA提取效果的影响。经琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR等方法对RNA质量和产率进行了分析,结果表明:李果肉组织研磨后用山梨醇清洗溶液处理有利于总RNA的提取,而不添加山梨醇的清洗溶液,提取液中检测不到RNA,当清洗溶液中山梨醇浓度为1.10mol/L时,李果肉组织总RNA的产率明显高于山梨醇浓度为0.35 mol/L和3.00 mol/L时的产率;以不同贮藏天数的李果实为试材提取总RNA,其结果是一致的;通过RT-PCR扩增蛋白延伸因子EF-2基因,结果证明本试验提取的总RNA可以用于基因转录表达特性分析。     

不同采收期对蟠桃贮藏品质及生理特性的影响

对3个不同采收期的瑞蟠四号桃进行冷藏,通过测定果实颜色、大小、硬度、可溶性固形物、可滴定酸、褐变指数等理化指标,以探索适宜蟠桃长期贮藏保鲜的采收期。结果表明,3个采收期桃的硬度、可溶性固形物、可滴定酸含量在贮藏过程中变化趋势相同,没有显著差异;瑞蟠四号桃在采收期2[硬度,(4.4±0.3)kg/cm2;可溶性固形物,(9.9±0.8)%;可滴定酸,0.1366%左右]采收有较好的果实品质,可贮藏长达2个月以上。     

桃三种肉色类型果实抗氧化因子的比较评价

【目的】具有较高抗氧化活性的健康有益食品正逐渐被开发利用,从抗氧化组份和抗氧化活性的角度比较评价桃不同肉色类型,为桃种质资源的深入挖掘利用提供理论依据。【方法】研究以75份桃资源为试材,测定并比较分析果皮、果肉和全果的总酚、花色苷、三价铁还原能力（FRAP）、相对抗自由基能力（RAC）以及色泽参数。【结果】红肉桃总酚、花色苷、FRAP和RAC的分布区间均宽于白肉和黄肉桃,但分布区间存在明显重叠;4个指标的最高值均出现在红肉桃资源中。红肉桃抗氧化组份含量极显著地高于白肉和黄肉桃,在全果水平,红肉桃总酚含量为后两者的4.1倍和4.6倍,花色苷含量分别为后两者的20.1倍和11.6倍;红肉桃抗氧化能力亦高于白肉和黄肉类型,FRAP分别是后两者的5.8倍和6.2倍,RAC分别是后两者的3.8倍和4.6倍。桃果实抗氧化能力与总酚和花色苷含量均呈极显著的正相关,但抗氧化能力与总酚的相关系数高于其与花色苷;回归分析也表明桃抗氧化能力与总酚的线性回归关系优于其与花色苷。【结论】红肉桃果实抗氧化组份和抗氧化能力显著高于白肉和黄肉桃,从抗氧化的角度红肉桃资源有开发利用的价值;桃果实总酚对抗氧化能力的贡献高于花色苷;筛选出‘北京一线红’、‘红桃’等抗氧化能力高的红肉桃种质资源。     

油桃果实细胞组织结构与裂果的关系

对油桃,普通桃果实细胞组织结构的变化进行了电镜扫描观察。结果表明,油桃果面组织和果皮,果肉细胞结构与裂果关系密切;（1）普通桃果面有密集的茸毛保护,而油桃果面无茸毛保护,除气孔外,油桃果面有波纹状裂痕,随果实生长裂痕明显,若遇外界不良因子侵袭产生裂缝,使果皮细胞裸露,就会产生裂果,（2）普通桃果皮细胞厚,层数多,多为横向排列,紧密,间隙小,而油桃果皮细胞薄,多为纵向排列,松散,间隙大,果肉细胞膨大时易将果皮撑裂;（3）果实着色期果肉细胞膨大速率油桃高于普通桃,油桃果肉细胞对果皮细胞施加的膨压增长的越快,越易引起裂果。     

桃杂交后代基因性状遗传分析

分析了12个桃杂交组合(杂交亲本包括6个普通型、5个半矮化和2个矮化品种(系))F1的1 361单系5个数量性状的遗传力,包括盛花期,果实成熟期,果实大小、颜色和风味及果形、果肉硬度、果肉颜色,丰产性,核黏离性状,树体大小和果实品质的遗传规律。结果表明,盛花期、果实成熟期、果实大小和颜色的遗传力(H2)为0.3～0.5,果实风味遗传力较低;圆形果个体相对于椭圆形、卵圆形和扁圆形果个体呈显性,比例为76∶12∶8∶4;后代的平均果肉硬度较双亲平均果肉硬度低0.2级(最大为5级);所有黄肉亲本的F1个体果肉颜色广泛分离,黄肉个体显著高于白肉和红肉个体;子代的丰产性比双亲平均丰产性低1级,然而,亲本组合7310828(海尔×波南萨)×波南萨和49号(Fortyniner)×7310902(海尔×波南萨)组合获得丰产单系的几率高;通常离核相对于黏(半离)核呈显性,杂交组合7310828×波南萨的后代例外;F1群体的平均果实品质比亲本退化2级(最高为5级)左右;49号×7310828和亨利(O'Henry)自由授粉后代中获得全红、大果、黄肉优系的几率高;乔化单系的几率显著高于矮化、半矮化单系,其比例为82∶14∶4;柱型桃皮勒(Pillar)是强健、直立实生个体的理想亲本。     

不同类型桃果实内酯芳香物质构成与重要性评价

【目的】分析不同类型成熟桃果实的内酯芳香物质构成,并评价其对于桃果实芳香的重要性。【方法】以涵盖不同果肉质地、果肉颜色、果实成熟期等的多品种桃果实为试材,采用顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用体系检测样品的芳香物质,通过精确的定性和定量分析,明确内酯芳香物质的构成,并结合芳香物质的气味活性值分析评价其重要性。【结果】内酯芳香物质存在于本研究全部桃品种的成熟果实中,样品中共检测到10种内酯芳香物质,包括γ-己内酯、γ-辛内酯、γ-庚内酯、γ-癸内酯、5-羟基-2, 4-癸二烯酸-δ-内酯、δ-癸内酯、γ-十一内酯、δ-辛内酯、茉莉内酯、顺式-4-羟基-6-十二烯酸内酯。各内酯物质具有特定的气味属性,主要散发果香（桃/椰子）、甜香、奶油香、焦糖香、花香和草本味等气味。不同品种的桃果实共有的内酯物质是γ-己内酯,较为普遍存在的内酯物质包括γ-癸内酯和δ-癸内酯,部分品种存在特有的内酯物质,如‘深州蜜桃’果实中的顺式-4-羟基-6-十二烯酸内酯。果实成熟期时,溶质‘白花水蜜’‘深州蜜桃’‘橙香’‘奉化玉露（晚）’‘肥城红里大桃’等品种中检测到较多种类的内酯芳香物质,硬质‘霞脆’‘秦王’‘华玉’等品种果实具有较少种类的内酯芳香物质。气味活性值分析表明,由于极低的气味阈值和较高的物质含量,γ-癸内酯存在于大部分品种中,且对于这些品种桃香气的形成具有重要贡献,使溶质‘深州蜜桃’‘橙香’‘奉化玉露（晚）’‘白花水蜜’等品种果实均具有较为强烈的典型的桃香气味,溶质‘阿初桃’和硬质‘华玉’品种的典型桃果芳香较淡,而未检测到该内酯的硬质‘秦王’‘霞脆’品种果实则没有典型的桃果芳香。此外,γ-辛内酯使部分品种（本研究中为‘橙香’和‘深州蜜桃’）桃果实呈现更为强烈的椰果味和非常甜的气味。【结论】内酯是桃果实挥发性芳香物质的一个重要类别,桃果实内酯物质构成丰富,成熟果实至少包含10种内酯芳香物质。内酯物质类别和含量的差异是不同品种尤其是不同果肉质地的桃果实芳香特征的一个重要体现,而不同果肉颜色或成熟期品种的内酯芳香无显著差异。γ-己内酯是品种之间共有的内酯物质,γ-癸内酯和δ-癸内酯是品种之间较为普遍存在的内酯,顺式-4-羟基-6-十二烯酸内酯等是部分品种特有的内酯物质。γ-癸内酯和γ-辛内酯等内酯对于品种的典型桃香气以及独特芳香气味的形成具有重要贡献。     

蟠桃果实发育成熟过程中果肉细胞超微结构的变化

[目的]研究两种不同熟期蟠桃果实发育成熟过程中细胞超微结构的变化.[方法]以早露蟠桃和英格尔蟠桃为材料,采取盛花后不同发育时期的果实确定单果重变化趋势,并据此对相应发育时期果实果肉组织进行固定切片、透射电镜观察.[结果]早露蟠桃在果实发育初期及果重迅速增大期超微结构差异不大,细胞壁结构完整;果实发育后期细胞壁中胶层开始溶解,至盛花后70 d时细胞壁明暗分区结构已丧失;英格尔蟠桃在果实发育后期可观察到结构完整的线粒体等细胞器,至盛花后110 d仍可观察到细胞壁的明暗分区结构.[结论]细胞超微结构分析认为英格尔蟠桃耐贮性优于早露蟠桃;英格尔蟠桃果实的适宜采收期可根据采后用途的不同来确定.     

一种木本果树基因组DNA提取方法研究

研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组ＤＮＡ提取方法．其改良策略是：在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质，防止多酚类物质被氧化，从而排除多酚类等杂质的干扰．利用这一方法提取的柑桔、枇杷、梨、苹果、湖北海棠、桃、樱桃等７种果树基因组ＤＮＡ均能被限制性内切酶完全消化，获得理想的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果，也可作为ＰＣＲ模板应用，成功地进行特异性基因扩增和ＲＡＰＤ．