锥栗植株再生体系的建立

【目的】为了建立锥栗再生体系,【方法】以锥栗胚为外植体,分析不同基因型、基本培养基及激素组合对锥栗不定芽的诱导、增殖和生根的影响。【结果】结果表明,油榛是锥栗组织培养最佳的基因型;锥栗不定芽诱导的最适培养基为M(NH4NO3804 mg·L-1+KNO31011 mg·L-1+FeSO4.H2O 27.8 mg·L-1+1/2MS其余无机盐+MS有机)+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1,其出芽率为76%;芽增殖的最佳培养基为M(同上)+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1,其增殖倍数达18;诱导生根的最佳培养基为M(同上)+IBA 0.5 mg·L-1,其生根率为48%。【结论】运用上述体系可获得完整锥栗再生植株。     

苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养及其叶片不定梢诱导

【目的】建立苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养快繁技术体系及其离体叶片不定梢再生技术体系,为工厂化生产优质苗木及利用生物技术手段改良品种奠定技术基础。【方法】以苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的半木质化新梢为试材,建立初代无菌试管苗。以试管苗为试材,研究了基本培养基、植物生长调节物质对试管苗继代生长及生根的影响。以离体叶片为外植体,研究了细胞分裂素种类和浓度及碳源对不定梢再生的影响。【结果】半木质化新梢在芽启动培养基上的腋芽萌发率达85%以上。在基本培养基MS和QL上,试管苗的增殖没有显著差异,但生长表现不同,QL培养基上的增殖苗表现出该品种田间生长的红色特征。当细胞分裂素为BA时,蔗糖比D-山梨醇易诱导出叶片不定梢;当细胞分裂素为TDZ并且浓度较高时,D-山梨醇比蔗糖易诱导出叶片不定梢。以添加3 mg·L-1BA和30 g·L-1蔗糖处理获得的不定梢再生率最高,为71.6%。生根诱导,基本培养基1/2MS比1/4MS有效,生长素IBA比NAA有利于提高生根率。【结论】苹果砧木‘BP-176’试管苗适宜的继代增殖培养基为添加1.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1IBA的QL培养基;最佳不定梢再生培养基为:NM+3 mg·L-1BA+0.3 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖,最高生根率为69.8%。     

野生软枣猕猴桃组织培养快繁体系的建立

以从野生资源筛选出的3个优良品系8025、9301、8001(雄株)组培苗的叶片为外植体,研究不同光照强度、不同植物生长调节剂对不定芽叶片再生、不定芽的增殖以及组培苗生根的影响,以期建立野生软枣猕猴桃组织培养快繁体系。结果表明:3个品系不定芽叶片再生培养基均为MS+1 mg/L6-BA+0.3 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;不定芽增殖培养基为MS+2.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;组培苗生根培养基为1/2 MS+0.2~0.5 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂。     

华东葡萄白河-35-1器官离体再生体系建立的研究

以华东葡萄株系白河-35-1(Vitis pseudoreticulata clone Baihe-35-1)的茎段和叶片为材料,通过器官发生途径研究了不同激素及浓度处理组合对华东葡萄白河-35-1无菌苗茎段和叶片诱导不定芽的影响。结果表明,通过调整不同的激素浓度组合和选择不同的外植体可以成功诱导出不定芽。较低的激素浓度组合有利于外植体不定芽的再生。所选用的外植体中,茎段比叶片更易诱导出不定芽。诱导出不定芽的最适激素组合为TDZ1mg·L-1+NAA0.05mg·L-1,其中茎段不定芽诱导率为12.8%,叶片不定芽的诱导率为3.3%。将不定芽置于MS基本培养基+0.2mg·L-1IBA培养基上培养,获得了完整植株。     

苹果新品种'鲁丽'离体叶片高效不定芽再生体系的建立

以早熟苹果优良新品种'鲁丽'无菌苗的离体叶片的外植体为试材,采用离体组织培养方法,研究了植物生长调节物质及碳源对叶片高效不定芽再生的影响,以期获得诱导'鲁丽'叶片高效不定芽再生的适宜培养基组成.结果 表明:不依赖于植物生长调节物质的组成,碳源D-山梨醇相比蔗糖明显提高不定芽再生率和平均单位叶片不定芽数.在相同碳源条件下,不定芽再生率和单位叶片不定芽数均表现为塞苯隆(TDZ)高于6-苄基氨基嘌呤(BA),但TDZ和BA之间没有达到差异显著水平;TDZ及BA不同浓度间差异不显著.诱导不定梢绿苗生根,除了较高浓度1.0 mg·L-1 IBA处理外,基本培养基1/4MS比1/2MS显著提高不定梢生根率;在基本培养基1/4MS上,生长素物质吲哚乙酸(IAA)比吲哚丁酸(IBA)显著提高生根率和单株生根数.在基本培养基1/2MS上,IAA和IBA的生根率和单株生根数均差异不显著.IAA比IBA诱导生根速度快,IAA诱导的不定根从绿苗茎横切面直接产生,没有愈伤产生,最高生根率为80.8％,平均单株生根数为4.2条.     

裂叶秋海棠组织培养及植株再生研究

以裂叶秋海棠（Begonia palmata D.Don）种子获得无菌苗,取其叶片为外植体,对裂叶秋海棠叶片丛生芽诱导和植株再生进行了研究。结果表明：MS＋TDZ 0.5 mg/L诱导叶片外植体产生不定芽的诱导效果最佳,诱导率为100%,不定芽个数可达200个/cm2;最佳生根培养基为1/3MS＋IBA 0.2 mg/L,2周后生根率达到100%。     

晌叶杨×84K杨高效再生体系的建立

以响叶杨×84K杨的茎段和叶片为外植体,应用正交实验方法对响叶杨×84K杨的再生条件进行研究.结果表明:茎段和叶片不定芽诱导的最佳培养基分别为Ms+TDZ 0.0015mg/L+NAA 0.05 mg/L,茎段不定芽再生率可达91%,MS+TDZ 0.001 mg/L+NAA 0.01mg/L,叶片不定芽再生率可达70%;诱导不定芽生根的最佳组合为1/2MS+NAA 0.01 mg/L+IBA 0.1 mg/L,生根率可达100%.在碳源对生根率影响的研究中,蔗糖的影响最大,生根率可达88.9%.     

响叶杨×84K杨高效再生体系的建立

以响叶杨×84K杨的茎段和叶片为外植体,应用正交实验方法对响叶杨×84K杨的再生条件进行研究。结果表明:茎段和叶片不定芽诱导的最佳培养基分别为MS+TDZ 0.0015mg/L+NAA0.05 mg/L,茎段不定芽再生率可达91%,MS+TDZ 0.001 mg/L+NAA0.01mg/L,叶片不定芽再生率可达70%;诱导不定芽生根的最佳组合为1/2MS+NAA0.01 mg/L+IBA0.1 mg/L,生根率可达100%。在碳源对生根率影响的研究中,蔗糖的影响最大,生根率可达88.9%。     

紫叶稠李叶片离体培养再生植株

以紫叶稠李为试材,采用组织培养方法,研究不同激素对其试管苗不定芽诱导、不定芽生根及成苗影响。结果表明:叶片切块可诱导产生大量的不定芽,MS附加0.5mg/L BA和0.01mg/L NAA的培养基不定芽诱导率为50.1%;利用植物激素0.5mg/L BA,0.5mg/LNAA,0.5mg/L KT和0.2mg/L IBA的组合,不定芽可多次继代培养增殖;不定芽在附加0.4mg/L IBA的MS培养基上生根,生根率为67%。该试验结果说明,紫叶稠李试管苗叶片可作为外植体离体培养获得再生植株,BA是主要的调控植物激素,IBA对生根有一定促进作用。     

多裂叶荆芥离体再生体系的建立

以多裂叶荆芥无菌幼苗根、茎段、叶片等为外植体,进行不定芽离体再生,建立了多裂叶荆芥离体快速繁殖体系,研究了不同外植体和附加不同外源激素配比对不定芽离体再生的影响。结果表明:多裂叶荆芥离体再生的最佳外植体为带有叶腋的茎段,诱导不定芽再生的适宜培养基为MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L TDZ,每个外植体产生不定芽数平均为18个;不定芽增殖培养每4周为1个周期,理论年繁殖系数可达1×1812;当不定芽生长至3~4cm时移入生根培养基诱导生根;适宜的生根培养基为MS+0.2mg/L NAA,移栽成活率为53.85%。     

野生毛桃叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对愈伤组织不定芽再生的影响。【结果】结果表明,适合‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导的培养基为LP+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 3.0 mg.L-1+AgNO30.5 mg.L-1+蔗糖30.0 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1;保存的培养基为LP+2,4-D1.5 mg.L-1+CH 0.4 g.L-1+蔗糖30 g.L-1+CA 3.0 g.L-1或PVP 3.0 g.L-1+琼脂5.8 g.L-1,且采用持续暗培养保存,每28 d继代1次。愈伤组织在SH+TDZ 3.0 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1的培养基上可再生不定芽,再生率为6.83%。【结论】初步建立了‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生体系,为桃愈伤组织再生和遗传转化的研究奠定了基础。     

‘苹果梨’离体叶片再生体系的建立

【目的】为了给梨转基因研究提供稳定、高效的离体再生体系,【方法】以‘苹果梨’为试材,NN69作为基本培养基,研究了植物生长调节剂种类、暗培养时间及外植体类型等因素对其再生体系建立的影响,筛选出较适合‘苹果梨’不定芽分化的培养条件。【结果】结果表明,较适合‘苹果梨’分化的外植体为继代4次以上(含4次)的组培苗叶片,适宜分化的培养基为NN69+1.5 mg.L-1TDZ+0.4 mg.L-1NAA,结合20 d的暗培养,再生频率达到71.00%,平均再生芽数为2.21。【结论】影响‘苹果梨’离体叶片再生的最关键因素是外植体的继代次数。     

甜樱桃四倍体杂种砧木Y1高频、高效离体再生体系研究

以甜樱桃四倍体矮化砧木Y1试管苗叶片为外植体,探讨了不同基本培养基、激素组合、暗培养时间和叶片发育阶段对其不定芽再生的影响,建立甜樱桃四倍体矮化砧木的高频、高效离体再生体系,为进一步进行遗传转化研究奠定基础。结果表明,甜樱桃四倍体矮化砧木Y1采用WPM培养基再生效果最好,明显优于MS和DKW培养基;最佳激素组合为6-BA2.0 mg.L-1+IBA1.0 mg.L-1;接种后暗培养可以明显提高不定芽再生率,最适宜暗培养时间为14 d;Y1试管苗顶部完全展开的幼嫩叶片再生能力最高。通过以上条件的优化,成功建立了甜樱桃四倍体矮化砧木的高频、高效离体再生体系,离体叶片不定芽再生率达90%,每叶片平均再生不定芽数达4.1。     

利用枣离体叶片直接再生完整植株

以冬枣组培苗叶片为材料进行离体再生培养, 通过对再生条件的系统研究, 实现了离体叶片直接再生不定芽并获得完整植株。试验结果表明: 麦芽糖为离体叶片直接再生的适宜碳源; AgNO3可显著提高叶片不定芽再生率和出芽数, 在TDZ 1.0 mg·L - 1 +AgNO3 1.0 mg·L - 1的条件下, 不定芽直接再生率高达97.3% , 出芽数达14.4个。但麦芽糖不适宜继续作为不定芽伸长培养的碳源, 再生的不定芽需在MS+ 蔗糖40 g·L - 1 + 琼脂4 g·L - 1 +BA 1.0 mg·L - 1 + IBA 0.5 mg·L - 1的培养基上进行增殖, 增殖系数为3.2。在IBA1.0 mg·L - 1条件下, 生根率达87.3%。     

香玲核桃离体叶片再生体系的建立

为解决核桃种质资源的实验室保存及转基因研究等问题,研究了暗培养时间、叶片放置方式及不同浓度激素组合(BA、NAA、TDZ)对香玲核桃叶片再生的影响。试验结果表明,最适宜的暗培养时间为14d;近轴面放置效果最好;不同组合的激素配比对叶片再生不定芽能力不同,最适宜香玲核桃叶片再生的培养基为:MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+TDZ1.0mg·L-1+sucrose30g·L-1+agar6g·L-1,在该培养基上,离体叶片不定芽再生率达60%,每叶片平均再生不定芽数超过1.1个。筛选得到了香玲核桃离体叶片的最适分化及生根培养基,对离体再生培养条件进行优化,为香玲核桃的种质资源保存及遗传转化研究奠定了基础。     

三角梅两种植株再生途径丛生芽增殖比较研究

以紫花三角梅和紫红重瓣三角梅为外植体,进行丛生芽增殖比较研究,以期筛选出丛生芽诱导和增殖的最佳培养基。结果表明:愈伤组织丛生芽增殖最佳培养基为MS+BA2.0mg/L（2.5mg/L）+IBA 0.2mg/L+GA₃1.0mg/L,增殖系数达7.7以上;侧芽途径丛生芽的增殖最佳培养基为MS+BA 3.0mg/L+IBA 0.1mg/L,增殖系数达4.0以上。考虑生产成本和生产周期,侧芽途径优于愈伤组织途径。     

不同基因型梨叶片离体培养和植株再生

 以‘巴梨’、‘身不知’和‘早酥’梨试管苗叶片为外植体, 对不定芽进行了诱导、增殖和生根。重点探讨了基本培养基、植物生长调节剂配比、AgNO₃ 不同浓度和NH4⁺-N与NO3^--N比例对不定芽再生的影响。结果表明, MS + TDZ 0.5 mg/L + IBA 0.1 mg/L为‘巴梨’叶片不定芽发生的最佳培养基。在QL + TDZ 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L培养基上, 暗培养3周后转光下培养, ‘身不知’和‘早酥’分别获得89.6%、81.2%的不定芽再生率和3.45、3.73的平均再生芽数; 对‘巴梨’和‘早酥’不定芽再生有效促进的AgNO₃ 浓度范围为0.1～0.5 mg/L, 0.1～4.0 mg/L的AgNO₃、1∶2～7的NH₄⁺-N∶NO ₃^--N和21.50mmol/L的K+对‘身不知’叶片再生均有促进作用, 缺乏NH₄⁺-N不利于不定芽的再生; 转移到MS+BA1.0 mg/L + IBA 0.1 mg/L培养基上能快速增殖; 在MS、1 /4MS + IBA 1.0～2.5 mg/L +蔗糖5～15 g/L +活性炭0.5～1.0 g/L上获得了不同程度的生根苗。     

美人指葡萄不定芽离体诱导再生植株的研究

6-BA、TDZ与IBA不同浓度组合对美人指葡萄叶片、叶柄和茎段不定芽离体器官发生途径诱导再生植株有不同的影响。以茎段为外植体在MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L培养基上分化效果最好,再生率75.00%;叶片、叶柄分别在MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.10mg/L和MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基上分化效果较好。TDZ和IBA研究的几种组合都能诱导不定芽再生,但再生率不高。