火鸡乌鸡禽流感(H5亚型)免疫程序的试验研究

本试验对火鸡、乌鸡进行了禽流感H5亚型母源抗体、免疫抗体消长规律以及保护性HI抗体滴度的研究,配合血清学监测及攻毒试验制定了禽流感免疫程序。火鸡免疫程序:首免,15～20日龄,哈尔滨兽医研究所生产禽流感H5亚型疫苗,0.5mL/只,肌肉注射;二免,45～50日龄,0.5mL/只,肌肉注射;三免,120～125日龄,1mL/只,肌肉注射;三免后5个月加免1次至淘汰。乌鸡免疫程序:首免,10～15日龄,哈尔滨兽医研究所生产禽流感H5亚型疫苗,0.3mL/只,肌肉注射;二免,45～50日龄,0.5mL/只,肌肉注射;三免,120～125日龄,0.5mL/只,肌肉注射;三免后根据检测结果再适时免疫。通过特禽生产应用表明,本研究制定的免疫程序是切实可行的。     

种鸡禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗免疫程序的研究

本研究设计不同的免疫程序,用禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re-1+H9N2 Re-2株)免疫黄羽种鸡,通过对H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体滴度监测,探讨H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体消长规律及禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗的免疫程序.结果表明,用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡后,H5亚型和H9亚型禽流感HI抗体的消长规律基本同步,其抗体滴度阶段性峰值出现在免疫后的第21~28天.根据试验结果,建议用禽流感二价灭活疫苗免疫黄羽种鸡的免疫程序设为:首免(14 d),0.3 mL/只;二免(56 d),0.5 mL/只;三免(119 d或开产前4周),0.5 mL/只.     

不同H5亚型禽流感疫苗免疫肉鹅的对比试验

通过用不同H5亚型禽流感疫苗[水禽用禽流感疫苗(H5N2亚型D7株)与常规用疫苗(H5N1 Re-6株)]免疫肉鹅,跟踪检测其抗体水平,探讨其抗体的消长规律,比较2种疫苗免疫效果。结果表明:肉鹅在10日龄首免、31日龄二免后,肉鹅群体的H5抗体滴度显著上升,在首次免疫后4~5周,其H5抗体滴度上升到高峰值。上述2种亚型的禽流感疫苗对肉鹅均有较好的免疫保护作用。     

重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉免疫效果的研究

为评估重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉的免疫保护效果,选取30日龄的雉,按照免疫程序首免后21 d,加强免疫1次,分别于接种前和接种后定期采血,分离血清,检测H5、H7亚型HI抗体滴度。结果显示,免疫前,雉血清中H5、H7亚型HI抗体滴度均为0;免疫后14 d,H5和H7亚型抗体平均滴度分别达到7.0log2和7.07log2,49 d后平均滴度达到峰值,分别为8.04log2和9.20log2;H5亚型免疫有效期可达105 d以上,H7亚型可达189 d以上。结果表明,重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对雉具有良好的免疫保护效果且安全性良好,但疫苗免疫49 d后,H5、H7抗体效价逐渐下降,133 d后明显下降,群体免疫合格率低于70%,因此生产中推荐,30日龄首免后,51日龄和5月龄各加强免疫1次。本研究为珍稀禽的禽流感免疫疫苗选择和程序制定提供了参考。     

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗的鹅免疫试验

为探究重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗对鹅的免疫特性,将100只27日龄四季鹅,随机分成3组:一免组40只,接种剂量0.5 mL/只;二免组40只,二次接种剂量分别为0.5 mL/只、1.5 mL/只;对照组20只,不免疫。结果显示:一免后21 d H5(Re-8株)免疫抗体平均滴度为5.85 log2,抗体合格率为85%,28 d为7 log2,抗体合格率为100%,但60 d后平均滴度降为5.95 log2;二免后7 d为7.15 log2,39 d为7.95 log2,抗体合格率均保持100%。一免后21 d H7N9免疫抗体平均滴度为5.2 log2,抗体合格率为85%,28 d为6.6 log2,抗体合格率达到100%,60 d后降为3.15 log2;二免后7 d为6.8 log2,39 d为7.05 log2,抗体合格率均保持在100%。结果表明:该疫苗能够有效刺激鹅产生免疫保护抗体,适用于鹅的禽流感免疫;为增强免疫保护效果,建议进行二次免疫。     

禽流感灭活疫苗H5N2 D7株与H5N1 Re-6株对鸭的免疫效果研究

为评价禽流感灭活疫苗(H5N2亚型,D7株)和重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-6株)对鸭的免疫效果,根据兽医流行病学中利用比较率判断疫苗应用效果的样本量计算方法,得出所需的最小样本量;以田间试验的方式,常规养殖白鸭300只、番鸭240只,并对其进行随机分组;按程序免疫,从10日龄首免后2周开始,每周采集血清测定抗体效价,直至出栏(白鸭45日龄、番鸭66日龄)。结果显示,10日龄白鸭和番鸭的母源抗体分别为3.02 log2和0 log2,需进一步开展研究,以确定最佳首免时间。首免后2周,无论是白鸭还是番鸭,H5N2 D7株疫苗组抗体HI效价和抗体合格率均高于H5N1 Re-6株疫苗组;首免后3~5周,两种疫苗对白鸭和番鸭的HI效价均4 log2,抗体合格率均≥70%。二免后1周至出栏,两种疫苗对白鸭和番鸭均产生较好的免疫效果,HI效价均7 log2,抗体合格率均80%。是否采用对应亚型的血凝抑制抗原对抗体的检测结果有较大影响。研究表明:免疫两种疫苗后均能产生较好的免疫抗体,但相对而言,H5N2 D7株疫苗较H5N1Re-6株疫苗更适合于鸭的免疫;在鸭等水禽中推广使用该疫苗将能更有效地防控高致病性禽流感。     

肉鸽高致病性禽流感免疫效果评估试验

通过对肉种鸽、肉乳鸽采用不同类型、不同剂量的禽流感疫苗注射,在不同的时间段监测观察其抗体滴度水平变化,探索出肉鸽高致病性禽流感的最佳免疫剂量及疫苗品种：乳鸽使用0.3ml的H5N1＋Re-1疫苗进行禽流感的首免,二免采用0.5ml的H5N2灭活疫苗进行免疫,从而提高肉鸽免疫抗体滴度水平,保证免疫效果。     

雏鸭重组禽流感（H5+H7）三价灭活苗母源抗体消长规律

为探究雏鸭重组禽流感(H5+H7)三价灭活苗母源抗体消长规律,确定最佳首免日龄,将试验分为A组(种鸭免疫H5N1 Re-11+Re-12株、H7N9 H7-Re-2株、H5N2疫苗)和B组(种鸭免疫H5N2 rSD57株+rFJ56株、H7N9 rGD76株疫苗);选其孵化后的雏鸭各300羽,分别于1、7、14、21、28日龄时采血,每组随机采集100份样品,通过血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验进行禽流感母源抗体检测。结果显示:两组各亚型母源抗体在1日龄时平均滴度均达最高水平( 7.27log2),且离散程度低( 0.22)。两组雏鸭的禽流感母源抗体阳性率均随日龄增长而逐渐下降,7日龄时,平均滴度在4.26log2以上,群体抗体阳性率在76%以上,其中B组阳性率略高于A组;14日龄时,平均滴度都下降到2.55log2以下,群体抗体阳性率下降到25%以下;21日龄时,平均滴度均在0.43log2以下,群体抗体阳性率下降至1%以下。结果表明,高抗体水平种鸭能够使后代雏鸭具有较高水平的禽流感母源抗体,但母源抗体保护时间较短,重组禽流感(H5+H7)三价灭活苗的最佳首免时间为7～14日龄。本研究为鸭禽流感疫苗免疫策略制定提供了参考。     

不同剂量重组禽流感病毒二价灭活疫苗免疫效果对比

为了解重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)不同免疫剂量对黄羽肉鸡的免疫效果,将临床健康的黄羽肉鸡240羽随机分成A、B、C、D四个组,每组60羽,用同一种免疫程序同一时间、不同剂量进行免疫,采用血凝和血凝抑制的方法检测血清中的禽流感H5和流感H7抗体。试验结果表明,A、B、C、D四组疫苗的免疫效果好,在二免后14 d至56 d(76日龄),免疫抗体合格率都达到90%以上,达到农业部免疫抗体合格率的要求(70%以上);禽流感H5免疫抗体平均滴度达7log2以上,流感H7免疫抗体平均滴度达6log2以上;但以C、D两组的免疫效果更好,在二免后14 d至56 d(76日龄),免疫抗体合格率都达100%,禽流感H5和流感H7免疫抗体平均滴度达7.8log2以上。因此,重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对鸡的免疫程序:10日龄颈部皮下首次注射0.1、0.2、0.3 mL;20日龄颈部皮下二次注射0.1、0.2、0.3、0.5 mL,适用于76日龄左右出栏的肉鸡。但推荐10日龄和20日龄鸡分别颈部皮下注射0.3m L/只,免疫程序会更好。     

悬浮MDCK细胞源与鸡胚源H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较研究

为探讨MDCK纯悬浮细胞制备的H9亚型禽流感灭活疫苗的免疫效果,使用10日龄SPF鸡胚和MDCK纯悬浮细胞分别接种H9亚型禽流感 BX13株病毒,收获抗原液,制备2种单价油佐剂灭活疫苗,按照不同免疫剂量对21日龄SPF鸡进行免疫接种,测定免疫后不同时间的血清HI抗体,免疫后21 d翅静脉攻毒,测定疫苗的保护率。结果表明：2种疫苗分别以0.3、0.2、0.1、0.02 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡后,7 d HI抗体均为0log2,免后14 d、21 d时2种疫苗相同免疫剂量组间HI抗体无明显规律性差异。免疫后21 d,2种疫苗0.1mL/只～0.3mL/只的免疫剂量,各组间HI抗体水平无明显差异,可以达到1∶128以上。攻毒试验表明,鸡胚源疫苗0.1 mL/只、MDCK细胞源疫苗0.2mL/只的免疫剂量可以达到10/10保护。本研究为使用MDCK纯悬浮细胞制备的H9亚型禽流感疫苗的深化研究和应用奠定了基础。     

产蛋鸡免疫程序对卵黄抗体效价的影响

试验用小鹅瘟免疫原按8种免疫程序接种120日龄产蛋鸡,分别在接种后不同时间琼脂扩散试验试验检测卵黄抗体效价,筛选出最佳免疫接种程序。基础免疫,产蛋鸡每只肌肉注射小鹅瘟活疫苗1.0 m L（5羽份）;在基础免疫后14 d进行第2次接种,加强免疫,产蛋鸡每只肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗2.0 m L;在加强免疫后14 d进行第3次接种,强化免疫,产蛋鸡每只肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗3.0 m L。     

合成鱼腥草素对鸡新城疫疫苗免疫增强效果的研究

为探讨合成鱼腥草素对鸡新城疫疫苗免疫增强效果的影响,本试验将160只7日龄非免疫健康雏鸡随机分为空白对照组和低、中、高3个剂量组,各组用NDV La Sota株弱毒活疫苗进行初免,2周后加强免疫1次,并在第2次免疫的当天灌胃给药,3个剂量组分别以50、100和150 mg/kg的剂量灌服合成鱼腥草素,连续给药7 d,空白对照组灌服等量的生理盐水.各组分别于初免后的14、21、28和35 d随机抽取8只鸡,测定其免疫器官指数,血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的含量及新城疫抗体的效价.结果表明,不同剂量的合成鱼腥草素均能不同程度地提高肉鸡免疫器官指数、细胞因子和抗体滴度的水平,其中以中剂量(100 mg/kg)效果最明显.     

4型禽腺病毒HLJ1701株灭活疫苗的研制

利用4型禽腺病毒HLJ1701株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽4型禽腺病毒的防控提供数据及参考。将HLJ1701株用灭菌生理盐水作10~4倍稀释后,接种9日龄SPF鸡胚,37℃孵育72 h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加白油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批4型禽腺病毒灭活疫苗(HLJ1701株)均为油包水型,黏度均在50 cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000 r/min离心15 min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1 mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.2 mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中HLJ1701株的抗体平均效价可达2~8以上,使用4型禽腺病毒(HLJ1701株)接种0.2 mL/只(100 LD_(50))对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。研究表明,实验室条件下研制的4型禽腺病毒(HLJ1701株)灭活疫苗的各项指标均符合标准。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活 疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫程序研究

设计不同的免疫程序,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡,通过对ND、IB、H9抗体滴度监测,探讨ND、IB、H9抗体消长规律及鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)的免疫程序。试验结果表明,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡后,其诱导产生的ND、IB、H9抗体的消长规律基本同步;仅于10日龄免疫一次三联灭活苗,其抗体水平较低,于20、40日龄二免、三免或10日龄先用鸡新城疫病毒(La Sota株)、禽流感病毒(H9亚型,SS/94株)二联灭活疫苗作基础免疫,20或40日龄再用三联灭活苗作加强免疫,则上述3种抗体均快速上升,且维持时间长。根据试验结果,建议按照正常免疫程序作基础免疫的健康肉鸡,饲养期较短的可于20日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.3 mL/只;饲养期较长的则于40日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.5 mL/只。     

重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)免疫鸡抗体消长规律及免疫程序的初步研究

研究新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对种鸡和肉鸡的免疫原性,并对雏鸡母源抗体和免疫后的抗体进行动态观察,根据试验结果推荐该疫苗对鸡的免疫程序。用HI方法检测种鸡、肉鸡的母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄。结果表明种鸡的母源抗体约能维持10 d多;0.3 mL/羽首免后10 d HI抗体就可达到6.40 log2,3-5周达到高峰期,至免疫17周后(19周龄)HI抗体水平仍然维持在4.88 log2;19周龄时0.5 mL/羽进行二免,有效抗体能维持约20周;280日龄0.5 mL/羽三免后抗体水平均一,下降缓慢,至种鸡淘汰时(三免后29周)抗体水平仍能维持在5.32 log2。肉鸡母源抗体约能维持7d,10日龄时0.3 mL/羽免疫,有效抗体能维持到上市。新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸡的免疫原性确实。     

植物血凝素对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

试验对植物血凝素在艾维菌雏鸡新城疫疫苗免疫过程中的效果进行了研究.经过雏鸡新城疫母源抗体水平的检测后.选择抗体滴度约为2.5 log2的雏鸡90羽,随机分成3组,分别为溶剂对照组、单免组和PHA组.单免组和PHA组分别于7.21 d接种Ⅳ系LaSota弱毒疫苗,PHA组还同时肌肉注射植物血凝素0.01 mL/只.各组鸡于第1次免疫后的14.21,28.35,42.49和56d测定血液中鸡新城疫特异性抗体水平.结果显示,经2次免疫后PHA组鸡的抗体滴度比单免组和对照组鸡的高.差异显著(P<0.05),说明PHA能显著增强雏鸡对LaSota弱毒苗的免疫反应.     

怀山药多糖对鸡免疫功能的影响

目的研究怀山药多糖对鸡免疫功能的影响。方法将150羽14日龄蛋公鸡随机分成3组,每组50羽,14日龄用一羽份新支二联弱毒苗点眼滴鼻免疫;同时2个试验组分别肌肉注射怀山药多糖溶液高、低剂量各0.3ml/羽,对照组注射生理盐水0.3ml/羽,连用3d;分别于免疫用药后的第7、14、21、28、35、42天各组随机抽取8只翼下静脉采血,后分离血清,测定新城疫血凝抑制(HI)抗体效价,并于免疫后14、21、28、35、42天随机抽4只放血致死后称重,摘取胸腺、法氏囊、脾脏称重并计算指数。结果试验组特异性免疫抗体和免疫器官指数均高于对照组,在某些时间点差异显著。结论怀山药多糖能增强鸡的免疫功能,可作为免疫增强剂与疫苗同时使用。     

鸡新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫不同日龄商品肉鸡的效果比较

使用鸡新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗分别免疫3、7、14日龄三组商品肉鸡各40羽,同时设一组空白对照组。各免疫组及对照组于3、7、14、21、28、35、42日龄采血检测新城疫、禽流感抗体,于21、28、35日龄进行禽流感病毒攻毒,对比不同日龄免疫组的抗体消涨情况及不同日龄禽流感攻毒结果。发现对照组随鸡日龄增加,新城疫与禽流感抗体逐渐下降,在42日龄时下降至0,而不同免疫组新城疫与禽流感抗体均先下降,21日龄左右开始上升,至35日龄新城疫与禽流感抗体升至6log2以上。3日龄免疫组的禽流感免疫保护效果最好,21、28、35日龄时禽流感强毒攻毒保护率均达100%;7日龄免疫组在21、35日龄时禽流感强毒攻毒保护率均达100%,28日龄时禽流感强毒攻毒保护率达70%;14日龄免疫组在28、35日龄时禽流感强毒攻毒保护率均达100%,21日龄时禽流感强毒攻毒保护率只达30%。试验表明,商品肉鸡选择3日龄免疫鸡新城疫-禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗时禽流感免疫保护效果最好,采用3日龄免疫程序可以提高新城疫与禽流感的免疫保护效果,减少养殖业的经济损失。     

共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒免疫抗体消长规律及免疫效力研究

为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的免疫抗体消长规律及免疫效力,将重组病毒通过颈部皮下注射和翅部皮下注射2种不同的免疫途径来免疫鸡群,结果发现,2种免疫途径中,重组鸡痘病毒对鸡体质量增加均无影响,而野生型鸡痘病毒均可抑制鸡体质量增加。翅部皮下注射疫苗组能够产生较高的血凝抑制(HI)抗体水平,免疫21d后抗体水平达到高峰,28d后开始下降,49d时仍保持在一定的水平。免疫SPF鸡21d后攻毒,表明该重组病毒能使经滴鼻攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为95%,与油苗组相同,与单表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒组(40%)差异显著;攻毒后3、5、7d采集喉头、泄殖腔棉拭子检测排毒情况,结果发现第3天排毒率最高,其中rFPV-AIH5AIL6免疫组排毒率为最低,显示IL-6在rFPV-AIH5IL6免疫过程中起到了免疫佐剂的作用,这为研制新型的禽流感重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。     

硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制鸡的颉颃作用

为探究硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制的颉颃作用,将336只11日龄非免疫健康罗曼雏鸡随机均分为7组：空白对照组（BC）、免疫对照组（VC）、环磷酰胺对照组（Cy）、sGPS3、sGPS5、sGPS6和药物对照组（APS）,每组6个重复,每个重复8只鸡。BC组和VC组注射0.5 mL生理盐水,其余组均肌肉注射8 mg/mL环磷酰胺0.5 mL,每天1次,连续3 d;14日龄时,除BC组外,其余组均用新城疫疫苗免疫,同时3个硒大蒜化多糖组分别注射0.5 mL浓度为1 mg/mL的sGPS₃、sGPS₅、sGPS₆,APS组肌肉注射黄芪多糖注射液0.5 mL,Cy组、VC组和BC组注射生理盐水0.5 mL,每天1次,连续3 d,28日龄二免。分别于首免后的第7、14、21、28天,每组随机抽取6只罗曼鸡翼静脉采血,分离血清,β-微量法检测血清ND-HI抗体效价、ELISA法检测血清γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）含量。称量体重后采集胸腺、脾脏和法氏囊组织并称重,计算免疫器官指数。结果显示,各给药组的血清ND-HI抗体效价、血清IFN-γ和IL-2含量、法氏囊指数均显著高于Cy组（P<0.05）;sGPS₆组血清抗体效价、IFN-γ含量在28 d,血清IL-2含量在21、28 d均显著高于其余各组（P<0.05）;在免疫后21、28 d,4个给药组中sGPS₆组体重、法氏囊指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）;在免疫后28 d,4个给药组中sGPS₆组胸腺指数、脾脏指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）。结果表明,硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致的免疫抑制具有颉颃作用,其中sGPS₆组的活性最高,可作为新型免疫抑制颉颃剂的候选药。