大豆与豌豆原生质体融合的初步研究

我们采用PEG—高pH—高钙的方法对大豆和豌豆原生质体进行融合,获得了10—36％的融合率。大豆原生质体游离的混合酶液为2％ Cellulase ONOZUKA R-10,2％ Hemicellulase-Rhozyme, 1％ Pectinase Sigma;豌豆原生质体游离的混合酶液为2％Cellulase ONOZUKA R-10,2％ Hemicellulase sigma,1％ Pectinase Sigma。原生质体的密度对融合的影响很大,以10~4—10~(?)/毫升的密度适合原生质体融合及有利细胞分裂。品种间融合率有差异。融合体用高国楠的KM8P培养基培养,经过多次分裂,获得了愈伤组织。     

大豆原生质体培养经胚胎发生高频率再生植株

大豆原生质体培养诱导再生植株一直为国内外学者所关注。如Kao(1970)和Miller等(1971)从悬浮培养的大豆细胞分离出原生质体,经培养获得了愈伤组织。但在以后的多年中进展不够大。据报道,已从幼荚子叶、幼苗根、叶肉组织和悬浮培养细胞等外植体游离出原生质体,经培养获得愈伤组织,并进行了大量的分化研究,但最终都未能得到再生植株。卫志明和许智宏于1988年首次由大豆幼荚子叶分离出     

双低油菜品种组织培养的反应

在有激素培养基中萌发的油菜种苗的子叶大而厚、根少而短、下胚轴粗短,并有少数愈伤组织出现。2,4—D1～3mg/1均能诱导愈伤组织形成,添加0.1～1mg/16BA有利于愈伤组织的分化培养。子叶愈伤组织诱导率高于下胚轴,三个品种中,双低油菜DSV—SR—50的诱导率最高。来自激素萌发培养基的下胚轴的愈伤组织发生早、发展快、诱导频率高,并有直接分化出芽的。愈伤组织在含有IAA1mg/l和6BA1～7mg/l的B5培养基中都能分化出芽,但以添加6BA3～5mg/l对频率最高。小塔的愈伤组织分化频率最高为45.65％,以下为DSV—SR—5034.32％,Liglando 22.79％。并讨论了前期培养基和材料基因型与愈伤组织诱导分化的问题。     

小黑豆组织培养的研究

以应县小黑豆的下胚轴、子叶、小真叶为试验材料,研究不同培养基对小黑豆愈伤组织诱导和器官分化的影响.结果表明:NAA和BA单独使用不利用小黑豆的离体培养,细跑分裂素与生长素结合使用有利于小黑豆愈伤组织的诱导和器官分化.下胚轴在Ms BA2mg/L IAA0.5mg/L、Ms BA1.5mg/L IAA0.5mg/L Ms KT2mg/L NAA0.2mg/L培养基中植株再生频率为46%、46%、16%,在前两种培养基中下胚轴外植体分化出丛生芽.小黑豆下胚轴愈伤组织诱导率、再生植株分化率较子叶、小真叶高.     

苎麻组织培养和原生质体培养的研究

本文对苎麻组织培养进行了较为系统的研究,并在此基础上进行了原生质体培养。结果表明:在以苎麻品种浏阳大叶绿的子叶为材料,在含CPA1.0mg/l、KT0.5mg/l的MSB脱分化培养基培养和继代,可以得到高质量、高分化潜力的愈伤组织。悬浮培养可制得良好的悬浮系。其游离得到的原生质体,以海藻酸钠包埋漂浮方式培养在KM_8P培养基中得到愈伤组织。愈伤组织在BA2.0mg/l的MSB培养基上分化可再生完整植株。     

人参悬浮细胞原生质体培养的研究

以人参幼叶为外植体,在MS+2ppm2.4—D+0.5ppmKT+500ppmLH培养基上诱导产生愈伤组织.将生长旺盛的愈伤组织转移到MS+1ppm2.4—D+O.5ppmNAA+0.5ppmKT+500ppmLH液体培养基上建立细胞悬浮系.用含2.0%Onozuka R—10,0.5% Pectinase和11%甘露醇的混合酶液在PH5.8、25℃下分离原生质体.原生质体在培养后的第3天形成再生细胞并进行第一次分裂,第8天形成细胞团,40天形成愈伤组织.当再生的愈伤组织转移到MS+0.1ppmNAA+0.5ppmKT上时分化产生大量不定根.     

苎麻不同来源原生质体的分离和培养的比较研究

比较了苎麻子叶与子叶悬浮细胞两种材料的原生质体在分离和培养时的差异。取真叶初露期的绿色子叶，用３％纤维素酶、０．５％离析酶的０．６Ｍ甘露醇混合溶液处理５小时，原生质体产量可达５×１０￣６个／ｇｆｒ·ｗｔ，但其原生质体以海藻酸钠包埋方式培养在附加２，４—Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．５ｍｇ／ＬＫＭ＿８Ｐ培养基上，原生质体仅发生二次分裂；子叶悬浮细胞只有在纤维素酶４．５％，离析酶０．８％、半纤维素酶０．８％的０．５５Ｍ甘露醇混合液中处理１１小理，原生质体才达最大程度释放，每克悬浮细胞可得原生质体２×１０￣６个，但其原生质体易于诱导分裂，在与前者相同的培养条件下，５０天左右可形成肉眼可见的小愈伤组织，该愈伤组织经过扩增，在不同的培养基上可诱导芽、根的分化，从而形成完整植株。     

籼稻绿芽悬浮细胞原生质体再生成株

采用籼稻Hu-18绿芽为外植体,在N6附加2 mg/L 2,4-D的培养基上诱导愈伤组织。加20 d后转人AA 培养基进行悬浮培养。继代培养45 d左右形成了分裂旺盛的胚性细胞悬浮系。即从绿芽诱导至胚性细胞悬浮系的建立仅用了65 d左右。继代后前6 d,细胞干重几乎每2 d增加1倍,而培养液的渗透压及pH 值迅速下降。取继代后4 d的悬浮细胞游离原生质体,产率为8.74X10⁶/g鲜重。纯化后的原生质体在KPR培养基中进行琼脂糖包埋培养,原生质体植扳率为12.0％ 。将20 d后的小愈伤组织(0.1 mm)转入 N6附加0.5 mg/L 2,4- D、1 mg/ L BA、1 mg/L KT、0.3 mg/L ZT的培养基上增殖,待长成直径2～3 mm 左右时,用N₆附加1 mg/L BA,1 mg/L KT,0.3 mg/L ZT的培养基进行分化培养, 5 d后同时出现芽根生长,最终再生成绿色植株,绿苗分化率为3.5株/10000个原生质体。     

根癌农杆菌介导大果西番莲基因转化

以大果西番莲种子无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,在添加不同质量浓度BA和IAA的MS系列培养基上进行不定芽的诱导,确定MS+BA2.0mg·L-1+IAA0.1 mg·L-1为最适的不定芽诱导培养基,下胚轴、子叶外植体诱导芽分化率分别为88.33％,90.00％。将诱导出的不定芽接种在添加不同质量浓度IBA和NAA的MS系列培养基上,进行不定根的诱导,确定MS+NAA0.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1为最适的不定根诱导培养基,生根率达92.86％。用三亲交配法将质粒pBICr先转移到E.coli DH5α,然后转移到根癌农杆菌。利用含有NPT-Ⅱ基因和CaMV35S启动子控制下的黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV-CP）反义基因的表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其导入西番莲受体细胞,在质量浓度为50mg·L-1的Kan+选择压力下培养,获得大果西番莲CP转基因再生植株。      

甘蓝型油菜原生质体培养及植株再生的研究

从5个不同甘蓝型油菜品种（系）的下胚轴分离得到游离原生质体，以改良KM8p原生质体培养基作液体浅层暗培养。结果表明，低温（15℃）暗处理培养无菌苗的下胚轴原生质体活力达92．1％，培养7d后的细菌分裂频率达26．2％。分化培养基附加5mg/L 6-BA，再生频率可达17．6％。利用这一培养体系，5个油菜品种均获得再生植株。     

野生大豆(Glycine soja)下胚轴和子叶的愈伤组织获得幼苗

野生大豆Glvcine soja是栽培大豆G.max的近祖。它具有高蛋白、抗病性强、抗旱、抗涝和抗盐碱等许多优良性状。研究G.soja的愈伤组织的再生,对于研究Glycine属的遗传工程,改良现有栽培大豆都有重要意义。本文介绍采用MS基本培养基附加2mg/l IAA、5mg/l BA和2mg/l KT培养基,培养未成熟的G.soja幼嫩种子的下胚轴和子叶获得愈伤组织并分化出幼苗。 IAA——Indole—Acetic Acid. BA——6—Benzylamiaopurine. KT——Kinetin.     

紫罗兰愈伤组织诱导及植株再生的研究

以紫罗兰幼苗子叶、子叶柄、下胚轴作外植体接种MS附加不同激素的培养基诱导愈伤组织，并进一步诱导分化出芽及再生植株。子叶和下胚轴外植体在MS＋0.1mg/LNAA培养基上愈伤组织发生率达100％，下胚轴愈伤组织转移MS 0.1mg/L 6-BA培养基上易诱导分化出小苗，分化频率达67％，再生小苗在1／2MSA＋0.2mg/L IBA培养基上生根率达86％。     

花生组织培养及高频率植株再生

以14个花生品种为材料,对花生组织培养及植株再生进行了研究。将花生成熟胚幼叶、子叶和下胚轴外植体接种到添加0～2 mg/L NAA 和0～10 mg/L BAP的MSB5（MS无机盐 + B5有机）培养基上诱导愈伤,再转到添加0～10 mg/L BAP的分化培养基上诱导不定芽。结果表明,诱导培养基中添加的激素及其浓度对以后在分化培养基上不定芽分化有重要作用,以添加1 mg/L NAA 和6 mg/L BAP最利于不定芽分化;分化培养基中添加4 mg/LBAP利于不定芽伸长及植株再生;幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶和下胚轴;不同基因型不定芽分化率存在明显差异,白沙1016和花育23幼叶外植体获得了较高的不定芽分化率,分别达到91.8%和88.5%。再生苗经生根培养和驯化后,移栽花盆可正常开花结果。     

常夏石竹快繁技术研究

以山西省农业科学院经济作物研究所特种苗木中心选育的新品系6-5为材料,建立其快速繁育体系.筛选出一系列适宜的培养基:诱导常夏石竹外植体脱分化的适宜培养基为MS+BA 2.0 mg/l +NAA 0.2 mg/l,以MS+BA1.0 +NAA0.01的愈伤组织分化效果最好,分化率能够达到88.9％.分化小苗最适的生根培养基为MS+BA1.0+IBA0.2.移栽时用50mg/1 ABT6蘸泥浆效果好,移栽成活率能达到85.5％.     

培养条件对紫苏下胚轴外植体再生的影响

以紫苏下胚轴为材料,研究影响紫苏外植体芽再生的影响因素。结果表明：苗龄、黑暗时间、激素浓度及配比对紫苏芽再生均有较大影响。取13d苗龄的下胚轴先在分化培养基（MS+3.0mg/L BA+0.3 mg/L NAA）黑暗预培养8d后转为14h/d光照条件培养可获得较高的再生频率。诱导芽苗生根最佳培养基为1/2MS +1.0mg/L BA+0.3 mg/L IAA。     

郑薯5号和费乌瑞它试管苗培育、快繁及试管薯诱导培养基的筛选

用不同配方的培养基对马铃薯试管苗培育、繁殖和试管诱导进行了研究,结果表明,马铃薯茎尖分化培养基为MS+6 BA0.5+NAA0.1,分化成苗率达46％;切段快繁培养基为1／2 MS,根多苗壮;试管薯诱导培养基为MS+6 BA0.5+NAA0.2,诱导结薯株率达80％以上。     

油葵子叶外植体不定芽再生体系的建立

对油葵子叶外植体在含有不同激素浓度的培养基上进行了诱导、分化及成苗的研究,建立起一套完整的再生体系.在MS添加IAA 1mg/L和6-BA 4mg/L的培养基上诱导的愈伤质量较好,在MS添加IAA 0.01mg/L和6-BA 0.04mg/L的分化培养基上能够实现较高的不定芽再生.基因型间再生能力差异明显,8份材料中以康地6R为最佳.不定芽在1/2MS培养基上能健康成苗.     

AgNO_3对花生离体培养芽再生的作用

将花生未成熟幼叶、子叶节、上胚轴和下胚轴等作外植体，以离体培养添加ＡｇＮＯ３ 的分化培养基诱导产生不定芽。结果表明，使用ＡｇＮＯ３ ４～８ｍ ｇ／Ｌ对细胞再生有很大的促进作用，提高形态发生反应比率，特别是上胚轴对ＡｇＮＯ３ 作用反应极为明显，产芽率达到１００％ 。但ＡｇＮＯ３ 对花生芽再生的促进作用具有器官特异性，不同外植体源对ＡｇＮＯ３ 反应存在较大差异。黑暗培养有利于芽的分化和形成。     

提高玉米胚性细胞系诱导再生植株的研究

本实验以玉米G35×31、Tf幼胚培养的胚性细胞系为材料，用8114、MS和MN6、MB四种培养基诱导胚性细胞系再生绿苗，结果以MB培养基诱导率最高，为93.3%；在以不同激素配比的培养基进行愈伤组织的生根培养，KT1.0mg/L(单位下同)+6BA0.5+NAA0.5+IBA 2的激素组合诱导生根效果最好，而其他三种激素组合未出现分化生根现象。     

红花高效再生体系的建立

目的筛选红花不定芽高效诱导条件,结合红花茎尖微嫁接技术,解决转基因红花再生效率低的问题。方法以新疆塔城裕民无刺红花的子叶作为外植体,子叶--愈伤组织--不定芽分化--伸长--生根/嫁接,分别对红花不定芽高效诱导培养基、伸长培养基和生根培养基进行筛选。结果确定了不定芽分化培养基:MS+1.0mg/L TDZ+0.5mg/L NAA,不定芽伸长培养基:MS+1%蔗糖,生根培养基:White+3mg/L IBA+Ag NO3 10mg/L+2%蔗糖+0.2g/L活性炭,生根率为12.5%;以14d红花实生苗做砧木,劈接法嫁接再生植株的成活率为53.3%。结论本研究采用不定芽高效诱导与茎尖微嫁接技术相结合的方法,成功的获得了再生植株。