甘蓝型油菜下胚轴培养和高频率芽再生技术的研究

以１１个甘蓝型油菜品种（系）的下胚轴为外植体,研究影响下胚轴细胞再生的若干因素。结果表明,用附加２,４－Ｄ的培养基对下胚轴切段进行短时间的预培养可显著提高细胞的生长和分化能力,使芽再生率达９０％以上;ＡｇＮＯ３对细胞的生长有很大的促进作用;丝氨酸和谷氨酰胺的有益效应不明显;下胚轴的上端比下端产芽早,但两者产芽率差异不显著;不同的基因型对同一培养条件反应不同,芽分化频率差异很大。     

花生胚轴丛生芽的诱导和植株再生

以花生胚轴为外植体,接种于ＭＳ２（ＭＳ＋ ６－ ＢＡ１０ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ０８ｍ ｇ／Ｌ＋ 蔗糖３％ ＋ 琼脂０７％ ）培养基上,２５℃±１℃和３５００Ｌｕｘ 光照条件下培养,约２０ 天,８３％ 的外植体分化出丛生芽。平均每个外植体产生６４ 个丛生芽,最多可达３０ 个,由此得到的再生苗生长正常、健壮,生根后植株移栽易成活。本文就外植体日龄、激素配比及外植体接种极性等对丛生芽发生产生的影响进行了讨论。     

花生组织培养及高频率植株再生

以14个花生品种为材料,对花生组织培养及植株再生进行了研究。将花生成熟胚幼叶、子叶和下胚轴外植体接种到添加0～2 mg/L NAA 和0～10 mg/L BAP的MSB5（MS无机盐 + B5有机）培养基上诱导愈伤,再转到添加0～10 mg/L BAP的分化培养基上诱导不定芽。结果表明,诱导培养基中添加的激素及其浓度对以后在分化培养基上不定芽分化有重要作用,以添加1 mg/L NAA 和6 mg/L BAP最利于不定芽分化;分化培养基中添加4 mg/LBAP利于不定芽伸长及植株再生;幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶和下胚轴;不同基因型不定芽分化率存在明显差异,白沙1016和花育23幼叶外植体获得了较高的不定芽分化率,分别达到91.8%和88.5%。再生苗经生根培养和驯化后,移栽花盆可正常开花结果。     

花生小叶外植体植株再生及农杆菌介导的基因遗传转化

鄂花四号、中花四号和豫花一号萌动４ｄ的小叶作外植体，通过器官再生在ＭＳ培养基加３ｍｇ／ＬＢＡＰ和１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导芽分化，转至ＭＳ加５ｍｇ／ＬＢＡＰ上诱导芽伸长，再生植株。芽诱导率为８６％～１００％，每个外植体平均再生５个植株。在培养基中加入１ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３和５００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素能有效抑制愈伤褐化和死亡，并能提高植株再生率。萌动４ｄ的小叶与农杆菌ＡＧＬ１分别共培养２ｄ，通过在再生培养基中加卡那霉素筛选，获得转基因再生植株，转基因植株生根后，移栽网室生长，并已开花结荚。外源基因的表达通过卡那霉素抗性和Ｇｕｓ活性组织化学检测得到证实。     

二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L.）品种“浙双758”为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0.5-1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上 “预培养”3 d 或7 d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3 mg/L BA和0.15mg/L NAA及添加或不添加2.5 mg/L AgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96.1%,96.7%和96.7%。     

花生未成熟子叶丛生芽培养

用果针入土后４５天左右的花生未成熟子叶为外植体，在含高浓度６－苄基腺嘌呤（ＢＡ）的培养基中，置于约１８００ｌｕｘ光照和２６±１℃条件下，培养２１～２８天，能有效地诱导产生幼芽。其中５号培养基（ＭＳ基本培养基＋ＢＡ２０ｍｇ／１＋ＡＤ１００ｍｇ／ｌ＋蔗糖３％＋琼脂０．８５％），芽诱导率达９２．５％。截取诱导苗带叶腋茎段转接在８号（ＭＳ＋ＢＡ４０ｍｇ／ｌ＋ＹＥ０．０１％）、９号（ＭＳ＋ＢＡ３０ｍｇ／ｌ＋ＹＥ０．０１％＋ＡＤ５０ｍｇ／ｌ）两种培养基中，置于约１８００ｌｕｘ光照和２３～２８℃条件下，培养２１天开始出现丛生芽，４２天后（８）号和（９）号两种培养基均有９５％以上的外植体分化出丛生芽，继而长成无根小苗。平均每个外植体分化出１５个以上小芽，多的达５０个以上。     

在油菜组织培养中激素及基因型对下胚轴分化的影响

以不同基因型的油菜种子为实验材料,以下胚轴为外植体,采用不同配比激素组合的培养基诱导芽苗分化。通过对芽苗分化率的方差分析明确了组织培养中激素对植株再生的影响大于基因型,且激素与基因型之间着显著的互作效应。ＭＳ＋６－ＢＡ２￣４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ）．６ｍｇ／Ｌ为地芽苗分化的最佳培养基。     

培养条件对甘蓝型黄籽油菜下胚轴的再生影响

以甘蓝型黄籽油菜GH01的下胚轴为材料，研究影响外植体芽再生的因素。试验结果表明，苗龄、预培养基的激素浓度和预培养时间、分化培养基等对芽再生频率均有较大影响。8d苗龄的下胚轴置MS 1．5mg／L2，4-D 0．1mg／L6-BA培养基预培养4d后，转分化培养基MS 4．0mg／L6-BA 0．05mg／LNAA 5．0mg／LAgNO3 0．6mg,／LGA3培养，可获得较高的芽再生频率。添加5mg／LAgNO3处理可防止外植体褐化并有利于芽分化；0．6mg／L GA3处理可促进胚状体形成，提高芽再生频率。GH01最高芽再生频率为40．50％。     

植物生长激素诱导花生不定芽研究初报

利用培养７～９ 天的花生小叶片作为外植体,在ＭＳ培养基上用植物生长激素ＢＡ 和ＴＤＺ诱导花生不定芽。试验结果表明,１０ｍ ｇ／ｌＢＡ＋ ０１ｍ ｇ／ｌＮＡＡ,Ｎｏ４、Ｎｏ５、Ｎｏ６ 外植体诱导出不定芽;５０ｍ ｇ／ｌＢＡ＋ ０１ｍ ｇ／ｌＮＡＡ,Ｎｏ２ 和Ｎｏ５ 外植体诱导出不定芽;０１ｍ ｇ／ｌＴＤＺ＋ ０１ｍ ｇ／ｌＮＡＡ,Ｎｏ１１ 外植体诱导出不定芽;１０ｍ ｇ／ｌＴＤＺ＋ ０１ｍ ｇ／ｌＮＡＡ,Ｎｏ９ 和２０％ 的Ｎｏ１０ 外植体诱导出不定芽;５０ｍ ｇ／ｌＴＤＺ＋ ０１ｍ ｇ／ｌＮＡＡ,Ｎｏ６ 和Ｎｏ１０ 外植体诱导出不定芽。     

茶籽下胚轴组织培养的研究

目前,国内外利用茶树种子的某些组织或器官作外植体,进行培养,诱导、分化植株的研究进展很快。吴振铎(1976)、颜慕勤等(1983)、加藤美知代(1986)以子叶为外植体进行培养,通过诱导愈伤组织、分化胚状体,获得了植株。中村顺行(1985)培养子叶胚,也获得了植株。刘德华(1987)以子叶柄为外植体,直接诱导了芽的分化,获得了植株。但用茶籽下胚轴作材料,诱导分化植株的研究,国内外未见报导。本研究以下胚轴为外植体,     

花生去子叶幼胚的丛生芽诱导和植株再生

授粉后２５－３０天的花生幼胚，去子叶后，在ＭＳ２（ＭＳ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ＋ＰＶＰＰ０．３％＋椰计５０ｍｌ／Ｌ＋蔗糖４％＋琼脂０．８％）培养基中，置３００ｌｕｘ弱光和２０℃±１℃条件下，培养２１－２８天，能有效地产生丛生芽；在ＭＳ２中诱导培养后的去子叶幼胚的生长点切去，在改良无激素培养基（ＭＳ１）中培养１４天，转入ＭＳ３（ＭＳ＋ＢＡ６．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．４ｍｌ／Ｌ＋Ｄ－生物素０．１ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ＋酵母浸出物２００ｍｇ／Ｌ＋椰计５０ｍ／Ｌ＋ＰＶＰＰ０．３％＋蔗糖２．５％＋琼脂０．８％）培养基，置２５℃±１℃，３５００ｌｕｘ光照条件下培养２１－２８天，８０％的外植体分化出丛生芽，继而长成无根带叶小苗．．平均每外植体产生８．１个丛生芽，最多可达４０个．诱根后小苗移植田间８０％植株成活并开花结实。品种（系）间差异不显著。     

激动素和萘乙酸不同浓度配比对大豆组织培养器官分化的影响

本文报道激动素(KT)和萘乙酸(NAA)不同浓度配比对大豆上胚轴和小真叶外植体愈伤组织器官分化的影响以及对分化成苗与未分化愈伤组织过氧化物酶活性的分析。 B_5基本培养基附加KT1+NAA 0.2毫克/升(5:1)对大豆上胚轴和小真叶外植体愈伤组织再生植株较适宜,增加NAA的比例抑制芽的分化,增加KT的比例抑制根的分化,都不利于再生植株。 过氧化物酶活性,分化成苗愈伤组织都较未分化愈伤组织的高。     

金线莲组织培养与人工栽植研究：Ⅱ,芽的快速繁殖

金线莲是一种名贵珍稀中药材．本研究表明，用金线莲节段为培植体，经培养能大量快速繁殖这种濒危药用植物的种苗．节段的腋芽分化过程中，有腋（侧）芽萌生和原球茎增殖两途径．以固体培养基培养一个节，经３个月侧芽再生．其最高的繁殖培率平均可达５，１倍．不同的金线莲品种繁殖速率不同，以广西、福建金线莲增殖速率为高．固体和液体浅层培养的效果相同．使用ＭＳ基本培养基对芽繁殖倍率比１／２ＭＳ、减量ＭＳ培养基提高了２３．３、５１．５％．激素ＢＡ对芽的增殖有极显著的促进作用．添加ＢＡ５ｐｐｍ、ＮＡＡ０．５或０，３ｐｐｍ的激素浓度组合为芽增殖诱导最佳配方．     

甜叶菊组织培养条件的研究Ⅰ．外植体、激素浓度、琼脂浓度对愈伤组织形成及芽诱导的影响

以茎尖为外植体进行甜叶菊的组织培养，比以叶柄、叶片、茎段、下胚轴为外植体，愈仿组织诱导率、出芽率都高；在ＭＳ基本培养基上，适合茎尖生长、分化的激素浓度为０．５ｍｇ／ＬＢＡ、０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ；琼脂浓度为０．７％     

花生遗传转化影响因素研究

研究表明,农杆菌介导花生外源基因遗传转化过程中影响转化效率的因素较多。本文在实现花生外源基因遗传转化的基础上,针对所利用的丛生芽、胚轴和子叶外植体等受体材料,就遗传转化中涉及的预培养时间、侵染时间、共培养时间等处理因素对转化效率的影响进行深入探讨,以探索提高花生遗传转化效率的方法和途径,为该领域研究提供理论依据和技术参考。     

诸葛菜花器组织培养及其植株再生

诸葛菜的花瓣、萼片、花丝在ＭＳ附加６—ＢＡ与２，４—Ｄ的培养基上培养７～１０ｄ，诱导形成愈伤组织。愈伤组织在ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ３ｍｇ／Ｌ的分化培养基上培养７ｄ左右分化出芽，每块愈伤组织形成３～４个芽。花托、花序轴切段在分化培养基上可直接出芽形成植株。     

培养条件对紫苏下胚轴外植体再生的影响

以紫苏下胚轴为材料,研究影响紫苏外植体芽再生的影响因素。结果表明：苗龄、黑暗时间、激素浓度及配比对紫苏芽再生均有较大影响。取13d苗龄的下胚轴先在分化培养基（MS+3.0mg/L BA+0.3 mg/L NAA）黑暗预培养8d后转为14h/d光照条件培养可获得较高的再生频率。诱导芽苗生根最佳培养基为1/2MS +1.0mg/L BA+0.3 mg/L IAA。     

花生体胚诱导和植株再生研究

在含２０ｍ ｇ／Ｌ２，４－ Ｄ ＭＳ诱导培养基上，未成熟种胚和成熟种子种胚为外植体，光照培养下体胚诱导率分别为９２％ 和７８％ ，单个外植体平均产胚４８ 和４１ 个；而成熟种子胚小叶和未成熟种子子叶体胚诱导率均较低。以成熟种子种胚为外植体，２０ｍ ｇ／Ｌ２，４－ Ｄ和５ｍ ｇ／ＬＰｉｃｌｏｒａｍ 暗培养体胚诱导率分别为５５％ 和５８％ ，单个外植体平均产胚分别为４４和４２ 个。在含５ｍ ｇ／ＬＰｉｃｌｏｒａｍ 培养基上，１３个花生品种（系）体胚诱导率６％ ～８３３％ ，产胚量１２～４５个，差异显著，珍珠豆型花生品种体胚诱导率、产胚量普遍高于普通型花生品种。８ 个品种（系）体胚在含１０ｍ ｇ／ＬＢＡ 的ＭＳ培养基上枝条再生率３６３％ ～７７８％ 。再生枝条在含０３ｍ ｇ／ＬＮＡＡ ＭＳ培养基上生根后，植株移到温室已正常开花、结荚。     

甜叶菊组织培养条件的研究：I.外植体,激素浓度,琼脂浓度对愈伤组织形成及？

以茎尖为外植体进行甜叶菊的组织培养，比以叶柄，叶片，茎段，下胚轴为外植体，愈伤组织诱导率，出芽率都高；在ＭＳ基本培养基上，适合茎尖生长，分化的激素浓度为０．５ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ；琼脂浓度为０．７％。     

花生胚小叶对卡那霉素的敏感性研究

卡那霉素是植物遗传转化中常用的一种筛选剂。研究花生胚小叶对卡那霉素的敏感性,对建立利用卡那霉素筛选花生遗传转化的有效体系具有重要意义。以3个不同基因型花生弗落蔓生、麻油1-1和濮花23号为试验材料,通过计算胚小叶黄化率、丛生芽诱导率和生根数等,并观察外植体的生长状态,研究不同浓度卡那霉素对胚小叶生长发育、丛生芽分化和丛生芽生根阶段的影响,以期确定3个品种胚小叶各个分化阶段的适宜筛选浓度。结果表明,不同基因型花生对卡那霉素的敏感性不同,弗落蔓生、麻油1-1和濮花23号胚小叶丛生芽分化筛选浓度依次为:150mg/L、100mg/L和50mg/L;丛生芽生根筛选浓度分别为:弗落蔓生20mg/L、麻油1-1 20mg/L和濮花23号10mg/L。本研究筛选到不同品种胚小叶丛生芽分化和丛生芽生根阶段的适宜卡那霉素浓度,为以花生胚小叶为外植体的花生遗传转化阳性植株的筛选奠定了基础。