石牌广藿香的细胞悬浮培养

以石牌广藿香无菌苗幼嫩叶片为外植体,通过愈伤组织诱导和培养、筛选及细胞的液体培养,在含0.05 mg/L 2,4-D和0.5 mg/L KT的MS液体培养基中获得了分散性良好的悬浮细胞,建立了广藿香细胞悬浮培养体系.研究培养基中植物生长调节剂、继代培养时间等因素对细胞生长、分化的影响.结果表明:0.05 mg/L2,4-D和0.5 mg/L KT能促进细胞的快速生长,而0.5～1.0 mg/L BA促进细胞的分化;以继代培养时间为15～18 d细胞进行接种,接种量8 g/100 mL时,悬浮细胞到达最大生长量,细胞鲜重最高达到511.2 g/L.     

紫茉莉愈伤组织诱导的激素优化研究

[目的]该研究以紫茉莉（Mirabilis jalapaL.）为供试植物,建立愈伤组织诱导及继代培养体系,为后期的细胞悬浮培养奠定基础。[方法]以MS为基础培养基,加入不同浓度的6-BA、2,4-D、NAA、KT,设计L16（44）正交试验。[结果]得出最佳愈伤组织诱导组合为：6-BA 0 mg/L＋2,4-D 1 mg/L＋NAA 1 mg/L＋KT 1.5 mg/L,以附加2,4-D 1 mg/L＋KT 0.5 mg/L的继代培养基上生长的愈伤组织适合细胞悬浮培养。[结论]筛选出适合紫茉莉愈伤组织培养的激素条件,可为紫茉莉组培相关研究奠定基础。     

通过继代培养提高橡胶树体胚诱导频率的研究

橡胶树体胚诱导频率低、正常胚状体比例低是影响橡胶树花药培养的重要限制因子。组织切片结果显示:50 d的愈伤组织生长期实际上应划分为2个阶段:0~30 d为愈伤诱导阶段,30~50 d为胚性表达和愈伤增殖阶段,因此本试验以30 d的橡胶树花药愈伤组织为材料,通过继代培养基的正交筛选,探索通过继代培养提高橡胶树体胚分化频率的途径。试验结果显示:橡胶树初代花药愈伤组织经过优化后的继代培养基继代培养1次后,分化的胚状体是不继代培养分化胚状体数量的4.29倍,而其中正常胚状体的数量是不继代的2.4倍。继代培养基包含4种激素,以6-BA的影响最大,其次为KT。优化的愈伤继代培养基为改良MS培养基添加6-BA0.1 mg/L+KT 0.3 mg/L+3,4-D 0.3 mg/L+ABA 0.013 mg/L。与传统橡胶树花药再生体系相比,本试验增加了愈伤组织继代这一程序,并摸索了适宜的继代培养基配方,使花药再生体系更加符合实际花药培养发育的过程,以提高橡胶树胚状体分化频率,促进橡胶树体胚苗产业的发展。     

花生愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以中花2号无菌苗为材料,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的最佳条件进行探讨,并对悬浮细胞的生长特性进行检测,建立了花生悬浮细胞培养体系。结果表明,叶片是诱导愈伤组织和进行悬浮培养的理想外植体,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L,悬浮培养适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+KT 1.5mg/L。悬浮细胞生长呈"S"型曲线,培养12d达到最大生长量,最适继代周期为12d左右,在悬浮培养过程中,细胞数量呈现先上升后下降的趋势,培养液的pH和电导率变化则均为先下降再回升最后趋于稳定。     

柑桔细胞悬浮培养及再生植株的研究

取锦橙(Citrus sinensis Osbeck)试管实生苗下胚轴切段诱导愈伤组织,继代培养,再以该愈伤组织制备悬浮细胞系。在附加KT(0.75mg/L)和2,4—D(0.5mg/L)的MS液体培养基中悬浮单细胞能正常分裂和生长,形成多细胞团和愈伤组织,在MT添加BA(1.5mg/L)和IAA(0.5mg/L)的固体培养基上能进一步诱导小芽并形成完整小植株。文中还探讨了建立悬浮培养细胞系的最适蔗糖浓度以及单细胞悬浮培养过程的细胞密度和培养液的pH值变化情况。     

苎麻组织培养和原生质体培养的研究

本文对苎麻组织培养进行了较为系统的研究,并在此基础上进行了原生质体培养。结果表明:在以苎麻品种浏阳大叶绿的子叶为材料,在含CPA1.0mg/l、KT0.5mg/l的MSB脱分化培养基培养和继代,可以得到高质量、高分化潜力的愈伤组织。悬浮培养可制得良好的悬浮系。其游离得到的原生质体,以海藻酸钠包埋漂浮方式培养在KM_8P培养基中得到愈伤组织。愈伤组织在BA2.0mg/l的MSB培养基上分化可再生完整植株。     

玉米幼胚离体培养体系的建立

以78599、A189和糯杂3号的幼胚为外植体进行幼胚培养,研究最佳培养基配方及培养程序。结果表明:用改良的玉培培养基 2mg/L2,4-D 0.2mg/LKT 5mmol CaCl2 600mg/L脯氨酸 500mg/L水解酪蛋白 7g/L琼脂 30g/L糖进行诱导培养,3种基因型中78599最易诱导出愈伤组织。在其它条件不变的情形下,2,4-D浓度降到1mg/L,胚性愈伤组织呈颗粒状分散且颗粒细小,呈黄绿色。此种胚性愈伤组织接种在加KT或加BA的分化培养基中,以加KT的绿苗数多。     

大豆（Glycinemax）原生质体培养与分化

试验56份大豆栽培品种。采用幼荚子叶、无菌苗下胚轴和子叶、幼胚悬浮培养细胞作原生质体游离材料。苗期子叶和下胚轴用酶液:1％Hemicellulase HP150,0.4％Cellulase R—10,0.1％Pectolyase Y—23;幼荚子叶用1％Cellulasc R—10,1％Hemicellulase HP150,0.5％Pectinase;悬浮培养细胞用1％Cellulase R—10,0.2％Pectolyase Y—23,2％Driselase游离,4种材料均获得大量原生质体。原生质体培养基均为K8P,分化培养基为MS、B5,培养基中的激素试用了2.4—D,2.4.5—T,NAAIAA、ZT、KT、BA、zip和毒莠定等不同配合和浓度。结果有12份品种的幼荚子叶。下胚轴和苗期子叶的原生质体形成愈伤组织、有不同类型的根分化和绿点出现,分化培养基B5+0.1-0.2mg/l 2.4.5-T+1-1.5mg/l·BA较好。     

提高水稻成熟种胚体细胞培养力

实验结果认为,水稻成熟胚是一种“竞争性”外植体。高浓度的脱落酸（ABA）能有效地抑制胚芽和胚根的生长,而对水稻盾片愈伤组织的生长影响较小,从而促进盾片愈伤组织的同步健壮生长。这些愈伤组织致密,呈乳白色且分化频率高。调节分化培养基的浓度可减少愈伤组织变褐老化,有效地提高愈伤组织绿苗分化率。在诱导培养期间,较高的2,4－D浓度（大于1 mg/L）和6－BA会抑制种胚体细胞愈伤组织的诱导,其中籼稻比粳稻敏感。在诱导培养基中附加2,4－D 0.5 mg/L,BA 0.5 mg/L,ABA 5 mg/L,B_1 (5－10 mg/L)对成熟籼稻种胚培养是较合适的。     

荔枝"妃子笑"品种花药培养及其体胚发生

以荔枝(LitchichinesisSonn.)品种“妃子笑”为试材,研究其花药离体培养及植株再生的影响因素。结果表明,荔枝花药在MS 2,4-D2mg/L NAA0.2mg/L以及含50g/L蔗糖的培养基上诱导胚性愈伤组织效果较好,把胚性愈伤组织转移到MS BA1mg/L NAA0.5mg/L,谷氨酰胺500mg/L,蔗糖50g/L分化培养基上培养1个月后,体胚大量萌发,再将成熟体胚转移到附加500mg/L谷氨酰胺的MS无激素培养基上,培养1￣2个月后,能再生成完整植株。     

绿宝石喜林芋叶片培养及植株再生

结果表明：诱导绿宝石喜林芋叶片产生愈伤组织频率最高的培养基是ＭＳ＋ＢＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋２．４－Ｄ１．０ｍｇｇ／Ｌ。最适于愈伤组织分化的基本培养基是Ｎ６；３ｍｇ／Ｌ的ＢＡ、ＺＴ和ＫＪ均能诱导愈伤组织产生不定芽，其中以ＢＡ为好；ＣＨ对愈伤组织的分化有促进作用。Ｎ６＋ＢＡ７ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ对不定芽的增殖效果较好，３０ｄ可增殖９．４倍。１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ诱导生根效果好。试管苗     

可可体细胞胚胎发生及植株再生体系的构建

以可可（TheobromaCac0L.）的子叶为外植体,通过体胚发生途径,诱导再生可可植株。各培养阶段的优化培养基和培养条件为∶（1）愈伤组织诱导培养基（PCG）∶改良DKW+2,4-D3.0mgL+KT1.0mg几+TDZ 0.01mgL,在28+2）℃（以下培养温度均同）温度条件下,暗培养20d,诱导率为96.67%;（2）愈伤组织增殖培养基（SCG）∶改良DKW＋2,4-D 3.0mgA+KT1.0mg九,暗培养20d;（3）胚状体诱导培养基（ED）∶改良DKW+Sucrose30gL,暗培养60~150d,胚状体诱导产生并发育成熟,胚状体的诱导率为333%;（4）成熟胚诱导成苗∶①PEC培养基为∶改良DKW+Ghrose20gl+Sucrose10gL,光照为16h/d,培养60d;②采用RD培养基∶改良DKW+BA1.5mgl+AA0.5mgl,光照为16h/,培养3090d后,可得到完整的植株,再生植株的诱导率为 42%。     

红杨桃胚乳愈伤组织的诱导和三倍体植株再生

以红杨桃成熟干种子为材料,萌发后剥离胚乳进行培养。结果表明,最佳诱导愈伤组织的培养基为MS+2,4-D　2mg/L+BA 0.2mg/L,诱导频率可达93.5％:将淡绿色致密的愈伤组织转至MS+ZT　3mg/L+NAA0.2mg/L的培养基上,经连续继代后,形成芽原基并发育成小植株,壮苗后取茎尖染色体显微观察,证明再生植株多为三倍体,其发生频率可达73.7％。      

云蔗03-194甘蔗组培快繁技术

以甘蔗新品种云蔗03-194的幼嫩叶片作为外植体,采用不同2,4-D浓度对幼嫩叶片的切片进行愈伤诱导,以不同6-BA和KT激素配比对甘蔗愈伤进行分化诱导和增殖培养,以不同NAA浓度及香蕉汁添加量诱导甘蔗组培苗生根。结果表明:适宜甘蔗幼嫩叶片愈伤诱导的培养基为MS+2,4-D 1.5mg/L,诱导分化培养以MS+6-BA1mg/L+KT 0.5 mg/L为宜,增殖培养以6-BA 2.0 mg/L+KT 1.0 mg/L为宜,适宜的生根培养基为MS+NAA 1.5mg/L+30mL香蕉汁。以河沙:红壤土(2∶1)为假植基质,假植成活率达92%～96%,植株生长健壮,长势良好。     

大豆花药培养几个问题的研究

本文研究了大豆花药培养中的培养基、基因型、激素配比、糖分种类及浓度、取材时期、预处理温度、接种方式、有机添加物等因素对愈伤组织诱导频率的影响。认为大豆花药在培养基上的脱分化启动具有群体效应，合适的取材时期是单核中晚期。高浓度蔗糖能抑制体细胞愈伤组织的产生，而愈伤组织的分化则需要较低的蔗糖浓度。愈伤组织在Ｂ＿５＋０．５ｍｇ／１ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／１ＫＴ＋１％蔗糖和改良ＭＳ＋０．１ｍｇ／１ＩＢＡ＋０．１ｍｇ／１ＧＡ＿３＋０．４ｍｇ／１ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／１ＢＡ＋０．５ｍｇ／１ＫＴ＋０．５ｍｇ／１ＺＴ＋０．５ｍｇ／ｌ生物素＋２％蔗糖等培养基上分化出了芽，在改良ＭＳ＋０．５ｍｐ／１ＩＢＡ＋０．５ｍｇ／１ＢＡ＋０．５ｍｇ／１ＫＴ＋０．５ｍｇ／１ＺＴ＋５％蔗糖＋１％麦芽糖等培养基上产生了胚状体。     

2个葡萄品系外植体愈伤组织诱导和植株再生

进行了无核白、红地球2个葡萄品系外植体愈伤组织诱导和植株再生的研究。通过葡萄品系无核白、红地球叶片和叶柄外植体的愈伤组织的诱导、再分化,以器官发生途径实现植株再生。结果表明:(1)愈伤组织诱导以MS+BA5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖40g/L培养基最佳,诱导率为35%;同一葡萄品种的叶片与叶柄诱导愈伤组织的频率基本相同,而红地球外植体诱导愈伤组织的频率高于无核白;(2)不定芽的诱导再生以1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+CH500mg/L+蔗糖30g/L培养基最佳,平均诱导率达35.4%;叶柄来源的愈伤组织诱导不定芽的频率高于叶片愈伤组织;(3)根系的诱导以1/2MS+KT0.5mg/L+IBA1.0mg/L+AC2g/L+蔗糖15g/L培养基最佳,无核白和红地球来源的不定芽诱导生根频率基本相同,都在80%以上。     

龙竹的组织培养

以龙竹的幼枝节段作为接种外植体,采用从腋芽-丛生芽-完整植株的繁殖途径进行繁殖。结果表明:在MS+BA 2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+PVP 250 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1培养基上培养10-20 d可诱导其腋芽萌发,新芽接种于MS附加BA 2 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+CW 100 mL·L-1+蔗糖30 g·L-1的培养基上培养20 d可诱导形成丛生芽,丛生芽在继代培养过程中每20-25d可增殖3-5倍。把丛生芽接种于1/2MS+NAA2mL·L-1+IAA2mL·L-1+蔗糖20 g·L-1培养基上培养4周后可诱导形成完整的根系,小植株移栽成活率可达98％。该体系的建立为龙竹的工厂化育苗奠定了坚实的基础。      

基因枪法转化籼稻有关因素的评价

 利用基因枪轰击水稻未成熟胚及未成熟胚诱导来源的愈伤组织,对国内外16个籼稻品种进行了转化。设置不同的基因枪转化参数,并在培养基中添加各种植物激素、甘露醇以及2-N-吗啉-乙基磺酸(简称MES)来改善继代过程中籼稻愈伤组织的生长状态。基因枪转化的操作参数（包括金粉浓度和DNA含量、基因枪氦气压力、轰击受体的不同状态）对转化频率有重要影响;在继代培养基中添加MES（500 mg/L）作为缓冲剂,可以减少籼稻愈伤组织褐化现象的发生;在诱导和继代培养基中补加NAA(0.5 mg/L）,KT(0.2 mg/L)可改进愈伤组织质量,进而提高再生频率;在继代培养基中补加低浓度的 ABA(1 mg/L)和甘露醇（20 g/L）,能普遍改善愈伤组织生长状况,减少褐化现象的产生,得到较多结构致密的颗粒状抗性愈伤。获得了再生的转化植株,经检测表现出对Basta的抗性。     

桂竹香花器离体培养的研究

以桂竹香花柄，花瓣，花丝为外植体，研究不同激素对诱导愈伤组织和不定芽的影响，研究结果表明，4种外植体均能形成愈伤组织，但愈伤组织的发生率，发生部位及形态等表现差异，花柄愈伤组织继代MS＋2，4－D＋BA培养基，可分化产生不定芽，出芽率78％－82％，再生小苗在1／2MS＋NAA 0．5mg/L培养基中生根形成再生植株。