苦瓜水溶蛋白超薄等电聚焦电泳条件的优化

为了建立等电聚焦电泳进行苦瓜种子纯度及品种真实性鉴定的技术体系,本试验利用苦瓜水溶蛋白进行超薄等电聚焦电泳条件优化,结果表明,在0.15 mm超薄层凝胶和1mm普通凝胶对比中,超薄层凝胶电泳效果最好,基本无背景、条带多,节省药品;1.5h是提取苦瓜水溶蛋白的最佳时间;10μl是最佳上样量;半粒种子加蛋白提取液效果最好的是0.6ml.     

改良ISTA醇溶蛋白电泳方法及其应用

本文以ＩＳＴＡ醇溶蛋白标准电泳程序为基础，在吸收其简便、快速的优点同时，着重对其分辨率低、应用范围小的缺点进行改良。主要通过改变凝胶组成及关键操作步骤，建立了一套分辨率高、重复性好、简便快速且适用于我国仪器和试剂的电泳程序。并论述了该方法的应用领域。     

酸溶蛋白质电泳方法鉴定小麦种子纯度

本试验通过对小麦种子酸溶蛋白质的提取液浓度、提取时间和电泳凝胶组分浓度进行研究,建立了一种对小麦种子纯度进行鉴定的常规电泳技术方法.结果表明该方法具有以下特点:①样品提取时间短;②蛋白质组分多态性丰富;③电泳谱带清晰,分辨率高.     

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良

对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较,确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol·L1,pH8.0Tris-HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白,提取效率高,蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法—改良丙酮沉降法,电泳结果显示,条带清晰、数量多、分辨率高。     

利用等电点聚焦电泳分离的种子蛋白的印渍来鉴定品种

品种鉴定能确保种子生产者和购买者种子的纯度。传统的方法主要是依靠大田表现出的形态特征来鉴定品种纯度,这些特征的表现通常受环境和管理经验的影响,用这些特征来鉴定品种是不可靠的。随着大量新品种的涌现,并且这些新品种缺乏新的特征来鉴定,增加了人们对品种纯度测定新方法研究的兴趣。其中最有希望的方法之一便是种子蛋白质的电泳。本文研究了在非变性等电点聚焦电泳凝胶上分离种子蛋白来鉴定品种的新途径。将这些电泳分离出的种子蛋白吸咐在可移动的膜上,形成印渍,一次电泳可进行多个酶的染色分析。例如,应用本方法,一次电泳,大豆种子可以进行苹果酸酶、硫辛酰胺脱氢酶和脂酶的分析,燕麦可以进行酯酶、过氧化物和总蛋白的分析,对小麦而言,一次可以显示出76个样品中种子麦醇溶蛋白的特征。这个技术和现在的淀粉凝胶电泳系统相比具有比较经济,且可以保持聚丙烯酰胺凝胶清晰度好的特点。因为等电点聚焦凝胶是在分子电荷基础上分离蛋白质的,所以用这种技术来鉴定品种弥补了现行以分子大小和电荷密度来电泳分离蛋白鉴定品种上的不足。利用等电点聚焦电泳分离的种子蛋白的印渍来鉴定品种纯度是一种经济且有效的。     

蛋白质指纹图谱在紫花苜蓿品种鉴定中的研究

以中苜1号、公农1号、肇东苜蓿、甘农3号紫花苜蓿品种的萌动种子为研究材料，采用不连续聚丙烯酰胺垂直平板凝胶和SDS-PAGE电泳方法进行过氧化物酶同工酶、苹果酸脱氢酶同工酶、超氧化物歧化酶同工酶、乙醇脱氢酶同工酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶同工酶种子贮藏蛋白进行电泳。图谱分析比较显示，采用萌动种子为样品可以获得清晰的电泳图谱，并建立标准化的检测程序。利用超氧化物歧化酶同工酶可以鉴别出来甘农3号，利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶同工酶可以鉴别出公农1号，利用种子贮藏蛋白电泳可以将中苜1号区分出来。     

甜菜SSR扩增产物不同检测方法的比较研究

利用16对甜菜SSR引物对12个不同的甜菜品种进行扩增,分别采用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、3%的Metaphor琼脂糖电泳以及3%的普通琼脂糖电泳对SSR扩增产物进行检测,比较不同检测结果的差异性。结果表明,8%的非变性聚丙烯凝胶分辨细小条带的差异远高于3%的Metaphor琼脂糖和普通琼脂糖,而Metaphor琼脂糖的的分辨率高于普通琼脂糖,但对于条带较少的引物,三种凝胶未显现出差异;对于条带数较多的引物,如果条带比较集中,三种检测方法差异显著,如果条带比较分散,三种凝胶之间的差异较小。由于Metaphor琼脂糖价格偏高、胶软不易操作且分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶,因此不建议使用。而8%的聚丙烯酰胺凝胶则适合于指纹图谱的构建以及遗传多样性分析等等,普通琼脂糖可以应用在品种纯度的鉴定。     

PCR技术及实用方法

本文系统介绍了PCR技术的原理，反应组分、反应程序及PCR产物的电泳检测方法。这些实用的：PCR方法大都来源于国内外一些著名的实验室并经海南省农作物分子育种重点实验室改进而成。这些方法作为分子植物育种实验室的技术平台具有非常好的实用性，能满足常规的分子生物学及生物工程技术研究的要求。     

蛋白质凝胶电泳方法的几点改进

蛋白质凝胶电泳方法在杂交玉米纯度室内鉴定中与其他方法相比具有省时快速、简单易行、准确及电泳谱带分辨率高等优点。但是在操作中 ,尤其样品数量比较多时 ,该方法仍然有一些不足之处。通过我们这几年的大量实践 ,对该方法做了以下改进。1　凝胶贮存寿命的延长1.1　凝胶聚合原理 :我们知道 ,聚丙烯酰胺凝胶的聚合机理是 H2 O2 - Fe SO4 - Vc氧化还原体系引发的自由基聚合反应 ,即通过 H2 O2 与 Fe SO4 Vc进行氧化还原反应时产生足够数量和具有较高活性的游离基 ,引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺进行链式聚合反应。当氧化剂 H2 O2 或还原…     

谷子籽粒醇溶蛋白提取条件及A-PAGE方法研究

在小麦醇溶蛋白电泳方法的基础上研究了适宜谷子醇溶蛋白的提取条件及电泳方法。结果表明:10粒种子加入200μl 50%异丙醇+1%β-巯基乙醇提取液,在60℃水浴下提取30 min可以得到适宜A-PAGE电泳的醇溶蛋白提取液;在凝胶丙烯酰胺浓度为12.5%,电极液含有0.4‰甘氨酸、8‰冰乙酸情况下,可以得到分辨率高,重复性好的醇溶蛋白谱带,可对谷子品种进行有效的鉴定。     

玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳中常见故障的分析及解决办法

玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的工作原理,是从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下得到良好分离,通过染色显示蛋白质谱带类型.根据分子遗传学的理论,遗传信息的转移是遵守DNA→RNA→蛋白质这样的中心法则的,遗传信息在不同的大分子之间的转移都是单向的,不可逆的,只能从DNA到RNA(转录),从RNA到蛋白质(翻译).不同的玉米品种具有不同的遗传物质,那么种子内也就具有不同的蛋白质,不同的蛋白质其所带电荷不同,电泳谱带也就不同,通过对电泳谱带的分析达到对种子的真实性和品种纯度的鉴定.     

毛细管电泳的原理特点及其在种子检验上的应用

本文介绍了新型电泳技术——毛细管电泳的原理及其和传统常规电泳相比所具有的高分辨率、分析量微量及全自动等特点。同时,用该项技术分析了杂交水稻汕优63及其“三系”亲本种子蛋白组成差异情况,据此,可用毛细管电泳技术鉴别杂交种子样品纯度。     

玉米蛋白质凝胶电泳常见故障及纠正方法

玉米蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定玉米品种及纯度的方法 ,是利用玉米品种间蛋白质组成的差异 ,用电泳的方法分离这些蛋白质 ,观察其差异 ,鉴定玉米品种的。该方法以其准确性高、速度快、经济、简便等优点广泛应用于玉米种子纯度鉴定上。一般来说 ,在电泳中严格按操作规程操作很少发生故障 ,但操作不当时常会出现一些异常情况。现将电泳过程中易出现故障的原因及防止和排除故障的方法作一介绍。1　凝胶不聚合一般来说 ,凝胶贮备液按比例取出混合好后 4 0min以内会聚合 ,当放置 1h以上仍不聚合时或有块状聚合没有完全聚合时应查找不聚合的原…     

鱼体整体利用及产品开发新技术

华中农业大学研发的鱼体整体利用及产品开发新技术，为湖北省科技攻关计划和国家“十一·五”科技支撑计划资助开发，包括新型鱼面生产技术、新型即食鱼羹生产技术、新型鱼糜凝胶食品生产技术等3个新技术。新型鱼面生产技术以三去鱼体或采肉后剩余鱼体为原料，采用低温微粒化等技术，配合、复合压延及真空包装等技术制成新型鱼面，具有鱼香味浓、口感好、耐煮等特点。     

盐溶蛋白电泳技术及其在玉米种子鉴定中的应用

盐溶蛋白电泳方法具有样品提取时间和电泳时间短、电泳谱带清晰、分辨率高、品种间谱带差异大、组合间互补带明显等优点,因而在玉米种子纯度鉴定中具有重要意义。本文综述了盐溶蛋白电泳技术检测玉米种子纯度的原理、操作要点、谱带分析及在电泳过程中常出现的问题及解决办法,旨在为从事种子鉴定的同行提供参考。     

核酸染料Gelred在两种凝胶检测系统中的应用研究

由于无毒的核酸染料Gelred价格比较昂贵,在不影响实验效果的情况下,探讨Gelred在聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳中的最小用量。笔者将10000×的核酸染料Gelred稀释成1×、10×、20×、30×、40×、50×,将稀释后的核酸染料直接加入到甜菜PCR产物中。将核酸染料和甜菜PCR产物的混合物直接点样聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶,电泳后直接利用凝胶成像系统进行检测。以及另外一种方法是利用1×的Gelred分别对聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶进行泡胶,用凝胶成像系统进行检测。结果表明,Gelred 30×及以上的稀释浓度均适合于聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶,而1×的Gelred稀释液更适合于对聚丙烯酰胺凝胶进行泡胶。将稀释后的Gelred直接和PCR产物混合后,配合聚丙烯酰胺凝胶电泳,不仅减少了Gelred的使用量,而且减少了显影的时间。     

小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的简化研究

在ISTA小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的标准程序的基础上，对影响电泳效果的各主要因素进行逐一筛选、改进，尤其是实验设计的NaOH—醋酸—甘氨酸缓冲系统和先低后高再低的电泳方式使此项技术具有快速、分辨率较高、重复性较好、易剥胶、操作简单、经济实用等优点，适于一般实验室利用小麦种子醇溶蛋白技术对小麦进行大量的快速简捷的筛选、鉴定等初步研究。     

不同缓冲液对凝胶迁移试验的影响

凝胶迁移(EMSA)实验在理论上较简单,但在实际操作中需要对试验测定系统进行优化,缓冲液的选择是需要优化的因素之一.通过用T7RNA聚合酶与T7启动子DNA的结合反应来选择合适的缓冲液,结果表明,不同的缓冲液会影响凝胶迁移试验的结果,5×Buffer1结合缓冲液的效果较好;TBE电泳缓冲液比TAE、TGE的电泳效果好,同时在3种不同浓度的TBE缓冲液中,0.2×的TBE效果最好.     

应用等电聚焦电泳测定玉米种子的纯度

应用灵敏度、分辨率和重复性均较高的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)电泳测定150多种玉米自交系和90多种玉米杂交种的胚及幼芽的酯酶(EST)同工酶，通过对酶谱的比较和遗传分析，发现它们的酶谱各有特点，而且相互间又有很显著的差异，这些差异正是它们基因型差异的反映。因此，酶谱的特点及差异为玉米自交系和玉米杂交种种子纯度的鉴定从遗传和生化角度提供了科学依据。     

用于鉴定谷物品种的改良电泳法

本文就可靠、简便以及用1克分子浓度尿素从胚乳提取的蛋白质区分小麦、大麦、裸麦及小黑麦品种的能力诸方面比较了若干个电泳法.梯度凝胶作了改进,特别是使用冷粉凝胶和匀质微孔聚丙烯酰铵来得简便.叙述了用聚丙烯酰铵浓度为3-27%或2-16%梯度凝胶电泳进行品种鉴定.这二种浓度的聚丙烯酰铵有商品