枣不同组织提取RNA方法的比较及优化

为了获得高质量的枣RNA,本研究从所得RNA的纯度与浓度、操作时间和成本等方面比较了Trizol试剂法、传统CTAB法、热硼酸法、试剂盒法以及改良CTAB法5种方法提取枣不同组织总RNA的效果,并筛选出了最适合提取枣不同组织样品RNA的具体方法。结果表明:(1)在本研究试验的5种提取方法中,枣不同的组织RNA提取需要不同的方法。枣组培苗RNA提取的最佳方法是热硼酸法,枣芽和幼叶是试剂盒法,花和果实需要用改良CTAB法。(2)通过正交试验,得出枣树花和果实RNA提取适宜的改良CTAB法为在原有CTAB法的基础上水浴20 min、加入Na Ac的p H值为4.8、加入2倍体积的异丙醇。(3)枣RNA提取过程中的其他条件包括:RNA储存液保存的材料提取出的RNA质量最高,使用TBE缓冲液替代TAE进行电泳可以提高RNA的电泳亮度,4℃低温离心更有利于组培苗和芽的总RNA的提取,而叶片、花以及果实的RNA提取室温即可。     

苦瓜水溶蛋白超薄等电聚焦电泳条件的优化

为了建立等电聚焦电泳进行苦瓜种子纯度及品种真实性鉴定的技术体系,本试验利用苦瓜水溶蛋白进行超薄等电聚焦电泳条件优化,结果表明,在0.15 mm超薄层凝胶和1mm普通凝胶对比中,超薄层凝胶电泳效果最好,基本无背景、条带多,节省药品;1.5h是提取苦瓜水溶蛋白的最佳时间;10μl是最佳上样量;半粒种子加蛋白提取液效果最好的是0.6ml.     

高效毛细管电泳对复合B药片中水溶性维生素含量的快速测定

本文改进了毛细管电泳法同时分离检测多种水溶性维生素的方法,在柱温25℃、电压25kv、40mMpH8.4磷酸二氢钾-硼砂缓冲液的电泳条件下,7min内实现了7种水溶性维生素（VB1、VB12、VB2、VB6、VC、烟酸和叶酸）的良好分离。利用上述的毛细管电泳法对复合B药片中7种水溶性维生素进行了检测,其迁移时间重现性为0.0625%～1.2224%,峰面积重现性为1.82%～4.70%,回收率为96.2%～105.3%检测限为0.03μg/ml。     

核酸染料Gelred在两种凝胶检测系统中的应用研究

由于无毒的核酸染料Gelred价格比较昂贵,在不影响实验效果的情况下,探讨Gelred在聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳中的最小用量。笔者将10000×的核酸染料Gelred稀释成1×、10×、20×、30×、40×、50×,将稀释后的核酸染料直接加入到甜菜PCR产物中。将核酸染料和甜菜PCR产物的混合物直接点样聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶,电泳后直接利用凝胶成像系统进行检测。以及另外一种方法是利用1×的Gelred分别对聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶进行泡胶,用凝胶成像系统进行检测。结果表明,Gelred 30×及以上的稀释浓度均适合于聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶,而1×的Gelred稀释液更适合于对聚丙烯酰胺凝胶进行泡胶。将稀释后的Gelred直接和PCR产物混合后,配合聚丙烯酰胺凝胶电泳,不仅减少了Gelred的使用量,而且减少了显影的时间。     

聚丙烯酰胺电泳技术在小麦纯度鉴定中的应用研究

在国家农作物种子检验规程（GB／T3543—1995）颁布的小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺电泳技术鉴定品种的标准程序基础上。对样品的提取时间及环境温度、凝胶的制备及电泳方式等影响电泳效果的主要技术环节进行了研究和改良，使该技术具有操作简单快捷、凝胶质量好、易剥胶、分辨率高等优点，比原方法更具有可操作性。     

宁夏枸杞中蛋白质的提取与鉴定

采用盐溶法提取宁夏枸杞中蛋白质,用饱和(NH4)2 SO4溶液进行分级盐析、透析、浓缩后用SDS-PAGE分析,测定不同提取液中主要蛋白质的分子量.结果表明:用pH为6.0的PB缓冲液提取,用饱和度为80％的(NH4)2SO4盐析时,枸杞蛋白的提取效果最好;经SDS-PAGE电泳后,初步鉴定出7种主要蛋白质,其中分子量为63 096 Da、51 286 Da、33 884Da的蛋白质提取范围较大.     

分离小麦麦谷蛋白亚基的几个关键因素研究

小麦高分子量、低分子量麦谷蛋白亚基组成是影响小麦加工品质的重要因素,为了经济快速鉴定小麦高低分子量麦谷蛋白亚基组成,需要不断对提取和分离这些蛋白的方法进行优化。在Singh等提出的提取分离小麦高低分子量麦谷蛋白亚基方法的基础上,对其中涉及的单体蛋白去除、麦谷蛋白还原和烷化过程中使用的异丙醇浓度、烷化剂浓度以及烷化过程能否简化几个关键因素进行了深入研究。结果表明:在麦谷蛋白还原时,在10%～50%的异丙醇浓度范围内,不同浓度的异丙醇对高分子量麦谷蛋白亚基的提取效果没有差别,而低分子量麦谷蛋白亚基在用低浓度异丙醇提取时效果较差,随异丙醇浓度提高,提取效果逐渐提高,异丙醇浓度提高到30%时,提取效果达到最高,异丙醇浓度继续提高到50%,提取效果不再提高;使用30%和50%的异丙醇,去除单体蛋白的效果相同;把烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化,不同浓度(0. 6%～1. 4%)的烷化剂处理麦谷蛋白亚基的烷化效果相同,但烷化剂浓度为1. 4%时电泳背景较重。优化后的方法为:在单体蛋白去除和麦谷蛋白还原时把异丙醇浓度由原来的50%降为30%,去掉单独的烷化步骤,把0. 6%的烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化。优化后的方法不但减少了试剂用量,简化了提取步骤,还提高了电泳条带强度。     

玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定常见问题浅析

2001年9月，农业部全国农技推广服务中心制定了《玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法》(NY／T449-2001)的行业标准，并于11月1日开始实施。此标准的实施确定了应用电泳技术检测玉米种子纯度的手段，特别是回归方程的引用，为各级种子管理和企业提供了一种快速准确的判别种子质量的方法。虽然电泳技术已得到广泛应用，但是在电泳过程中有几个关键的问题应特别注意： 1 药品的购置 1．1 甘氨酸的选购 电泳效果的好坏和药品有着直接的关系，有一段时间我们作电泳效果一直不好，谱带重影、模糊不清，缓冲液使用次数减少，浪费了……     

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良

对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较,确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol·L1,pH8.0Tris-HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白,提取效率高,蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法—改良丙酮沉降法,电泳结果显示,条带清晰、数量多、分辨率高。     

玉米籽粒蛋白质双向电泳技术体系的优化

为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同p H值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用p H值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800μg效果最佳,采用p H值4~7的IPG预制凝胶条时,总聚焦80 000 Vhs、上样量900μg效果最佳,并且采用p H值4~7的IPG预制凝胶条相比p H值3~10的凝胶条能分离到更多的点,最后结合蛋白质点MALDI-TOF-TOF质谱鉴定分析,建立了一套适用于玉米籽粒的蛋白质双向电泳技术方法,即采用可溶性蛋白提取法提取蛋白,采用24 cm、p H值4~7的IPG干胶条,上样900μg电泳效果最佳,等点聚焦程序:500 V、1 h,1 000V、1 h,2 000 V、1 h,4 000 V、2 h,8000 V、4 h,8 000 V、80 000 Vhs,500 V保持。试验研究为后续玉米籽粒发育差异蛋白研究奠定了技术基础。     

水肥互作效应对陕北温室马铃薯生长及品质的影响

为在陕北地区栽培马铃薯(Solanum tuberosum)过程中选择合理的灌水施肥量,本研究采用随机区块组合的温室试验,滴灌施肥由3个灌水水平(100%ET0, 80%ET0和60%ET0)和3个施肥水平(100%F(N-P2O5-K2O=240-120-300 kg/hm2), 75%F和50%F)完全随机组成为9个处理(T1, 100%ET0×100%F;T2,80%ET0×75%F;T3, 60%ET0×50%F;T4, 100%ET0×75%F;T5, 80%ET0×50%F;T6, 60%ET0×100%F;T7, 100%ET0×50%F;T8, 80%ET0×100%F;T9, 60%ET0×70%F),以常规施肥(施肥量为50%F)和沟灌(灌水量为60%ET0)为对照处理(CK),研究水肥互作对马铃薯不同生育时期的株高、茎粗、叶面积、叶绿素含量、产量和品质的影响。结果显示,T9处理(60%ET0×70%F)条件下的马铃薯株高、茎粗生长优势较为明显,不会产生"徒长"现象,叶绿素含量较高,有利于马铃薯植株的生长,增产量明显且变异系数小,各品质指标含量较高且变异系数较小。因此,该处理可作为陕北地区温室马铃薯种植灌水施肥优选方案。本研究结果可为该地区优质马铃薯生产提供有力的技术支持。     

苦荞提取物的毒理学安全性

通过给小鼠和大鼠投喂苦荞提取物，观察了苦荞提取物的毒理学安全性。结果表明，苦荞提取物长期连续应用，对大鼠生长发育及血液学、生化、病理指标均未见明显的不良影响，实属无毒。     

龙眼ISSR反应体系的建立和优化

对影响龙眼ISSR－PCR扩增反应的各个参数进行优化,建立适合龙眼的ISSR反应体系：PCR反应体积为20μl,其中模板DNA 25ng,引物0.2μmol/L,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶0.5U,MgCl2 2.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.0μl;扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,退火温度1min,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸7min     

苦荞提取物对大小鼠血糖、血脂的调节

试验观察了苦荞提取物对四氧嘧啶所引起的高血糖型大鼠的降血糖作用及对高血脂症动物血脂的影响。结果表明，苦荞提取物对正常大鼠血糖无影响，大、中剂量对四氧嘧啶所致的高血糖大鼠空腹血糖有明显的降低作用，并改善由四氧嘧啶所引起的高血糖大鼠的糖耐量。给予大剂量苦荞提取物可使大鼠血清总胆固醇（TC）浓度显著下降，给予中剂量可使大鼠血清甘油三酯（TG）浓度显著下降。     

短芒披碱草SRAP-PCR 体系的建立和优化

通过单因子和正交设计两种试验方法,对短芒披碱草SRAP-PCR体系进行优化,得到短芒披碱草20μL SRAP-PCR最优反应体系为：Mg2＋2.00 mmol/L、引物0.40μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U、d NTPs250μmol/L、DNA 30 ng和10×buffer 2μL;各因素水平变化对PCR反应影响从大到小依次是：Mg2＋、引物、Taq酶、d NTPs和模板DNA。运用该优化体系对6份短芒披碱草材料进行验证,电泳结果显示扩增条带多态性高,清晰无杂带。该优化体系的建立有助于将SRAP标记技术用于短芒披碱草的遗传育种等研究。     

4个马铃薯新品系的SSR分析

为明确H 027×陇薯6号和H-027×陇薯7号2个杂交组合杂种F1的4个优异新品系(A2、A10、B1和B12)在DNA水平上的遗传差异,利用SSR分子标记技术对4个新品系进行多态性分析.利用筛选出的10对SSR适宜引物,4个新品系及亲本共扩增出稳定而清晰的SSR条带142个,多态性位点百分率达81.69％;建立了能区分出4个优异新品系及其亲本的SSR指纹图;4个杂种新品系及其双亲的GD值变幅为0.229 8～0.650 8.以GD值0.34为基准,7个马铃薯材料分为3类:第1类为新品系A2、A10和H 027,第2类为新品系B1、B12和陇薯7号,陇薯6号单独为1类.     

基于流式细胞术的澳洲坚果基因组C值测定

为建立澳洲坚果基因组C值的流式细胞术测定方法,采用改良的OTTO细胞核提取液配方和PI荧光染料,以‘O.C’嫩叶为材料,以基因组DNA含量已知的Pisum sativum L. Ctirad和Zea mays L. CE-777为对照,运用流式细胞术对澳洲坚果基因组C值进行了测定。结果表明,澳洲坚果‘O.C’二倍体基因组DNA总量为1.91488599 pg,其C值为0.957443 pg;按1 pg DNA=0.978×109 bp来计算,‘O.C’基因组大小为1.872758×109 bp;采用2种不同对照材料作为内标测定的结果无显著差异。本研究发现,运用流式细胞术进行澳洲坚果基因组C值测定准确可靠,可为其他物种基因组C值测定提供参考。     

胡椒SRAP反应体系的建立和优化

建立并优化胡椒SRAP分子标记体系,为海南胡椒属植物亲缘关系和遗传多态性分析、物种和品种鉴定等打下技术基础。利用单因素随机试验对胡椒SRAP-PCR反应体系中各组分（Taq DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、引物和Mg2+）的浓度进行优化,同时筛选SRAP-PCR反应的循环数和最适退火温度。通过实验确定了SRAP-PCR反应体系为：反应总体系为20 μL,其中引物0.35 μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,dNTP 0.6 mmol/L,Mg2 + 1.5 mmol/L,模板DNA 25~200 ng,同时通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度;最佳SRAP-PCR反应程序为：94℃预变性5 min;94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸45 s,5个循环;然后94℃变性30 s,48℃退火30 s,72℃延伸45 s,40个循环;最后72℃延伸7 min,4℃保存。SRAP-PCR体系适为胡椒属植物遗传多样性分析奠定了基础,并成功地应用于海南胡椒属植物亲缘关系和遗传多态性分析。     

正交设计优化狭叶坡垒ISSR-PCR反应体系

以狭叶坡垒DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数,最终确定狭叶坡垒最佳反应体系及扩增条件为：25 μL体系中1×PCR buffer,2 mmol/L MgCl2,0.25 mmol/L dNTPs,0.04 U/μL Taq聚合酶,0.2 μmol/L引物,4 ng/μL DNA模板;最佳扩增程序为：94℃预变性5 min;94℃变性45 s,53℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃最后延伸7 min。     

磷酸缓冲液对亚硫酸伤害的防护作用研究

磷酸缓冲液（1/15 mol/L,pH 7.7）能减轻亚硫酸对小麦、高粱幼苗所造成的叶绿素—蛋白质结合度降低、电解质渗漏增多等伤害症状,表明磷酸缓冲液对亚硫酸伤害有防护作用。生理指标的测定证明,磷酸缓冲液能提高幼苗的根系活力、脯氨酸含量、可溶性糖含量。进一步实验表明磷酸缓冲液对高粱苗的作用大于对小麦苗的作用;而且喷叶处理好于浇根处理。